譚旭艷， 王奕萍，武心萍

目前普遍認(rèn)為乳腺腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移呈明顯的血管依賴(lài)性［1］，卻鮮見(jiàn)有關(guān)乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌(invasive ductal carcinoma，IDC)病理分化程度與免疫組化微血管密度(microvessel density，MVD)相關(guān)性的研究報(bào)道，而IDC患者超聲造影增強(qiáng)參數(shù)與MVD的關(guān)系亦無(wú)報(bào)道。本研究通過(guò)對(duì)52例不同分化程度的IDC患者超聲造影增強(qiáng)參數(shù)進(jìn)行分析，并與免疫組化的MVD檢測(cè)結(jié)果對(duì)比，探討超聲動(dòng)態(tài)增強(qiáng)在評(píng)價(jià)IDC血管生成變化中的應(yīng)用價(jià)值，為IDC分化程度的判定尋求幫助。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

2010年8月至2011年10月我院收治IDC患者52例，均為女性。年齡24～78歲，平均44歲，病灶大小8～32 mm。均經(jīng)手術(shù)或超聲引導(dǎo)穿刺活檢病理確診。

1.2 儀器與方法

1.2.1 超聲造影 使用百勝Technos DU8彩色多普勒超聲診斷儀，LA532E變頻線(xiàn)陣探頭，頻率4.5～7.5MHz。機(jī)內(nèi)置實(shí)時(shí)造影匹配成像技術(shù)(contrast-tuned imaging，CnTI)及聲學(xué)定量時(shí)間－強(qiáng)度曲線(xiàn)分析軟件。首先對(duì)病灶進(jìn)行常規(guī)二維超聲檢查，然后選取彩色多普勒顯示血管最豐富切面，啟動(dòng)CnTI，機(jī)械指數(shù)＜0.1。超聲造影劑采用Sono Vue，每次劑量3.5 mL，經(jīng)肘靜脈團(tuán)注;同時(shí)啟動(dòng)TimeInt按扭，以相同大小的圓形取樣框選取病灶內(nèi)造影劑灌注最強(qiáng)區(qū)域?yàn)楦信d趣區(qū)，機(jī)器自動(dòng)繪制時(shí)間－強(qiáng)度曲線(xiàn)，獲取造影開(kāi)始增強(qiáng)時(shí)間，峰值時(shí)間，峰值強(qiáng)度和曲線(xiàn)下面積等參數(shù)。每個(gè)病灶在不同部位分析3次，取均值。

1.2.2 病理及MVD檢測(cè) 52例患者的病理標(biāo)本經(jīng)10% 甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，HE染色，腫瘤病理分級(jí)按WHO標(biāo)準(zhǔn)分為高分化級(jí)及低分化級(jí)。兔抗人CD34單克隆抗體(購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司)，按SP試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。結(jié)果由兩名有臨床經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)師雙盲進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計(jì)。CD34陽(yáng)性結(jié)果判斷以細(xì)胞漿或細(xì)胞膜出現(xiàn)棕色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞判斷標(biāo)準(zhǔn)。MVD測(cè)定參照Weidner計(jì)數(shù)法［2］:首先在低倍鏡(40倍)下確定3個(gè)著色最密集的區(qū)域，然后在200倍光鏡下計(jì)數(shù)3個(gè)視野內(nèi)的血管數(shù)，計(jì)算其平均值作為該病灶的MVD。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有資料分析均應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)分析完成。計(jì)量資料用表示，組間均數(shù)比較采用χ2分析，組間多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)，兩變量資料相關(guān)分析用Pearson積差相關(guān)分析方法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病理及MVD檢測(cè)結(jié)果

HE染色證實(shí)，52例IDC中，高分化組25例，低分化組 27例。IDC低分化組 MVD為(4.32±1.07)%，高分化組 MVD 為(2.87 ±0.97)%(見(jiàn)表1);經(jīng)方差分析，IDC的高分化組與低分化組的MVD差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。

表1 52例不同分化組IDC的MVD比較(n=3)

2.2 超聲造影增強(qiáng)結(jié)果

由表2可見(jiàn)，IDC低分化組的峰值強(qiáng)度、曲線(xiàn)下面積均顯著大于高分化組的相應(yīng)參數(shù)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);而兩組間開(kāi)始增強(qiáng)時(shí)間、峰值時(shí)間雖無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但低分化組低于高分化組。

表2 52例IDC超聲造影增強(qiáng)參數(shù)比較(n=3，x±s)

2.3 超聲造影增強(qiáng)參數(shù)與MVD的相關(guān)性

超聲造影增強(qiáng)參數(shù)中的峰值強(qiáng)度、曲線(xiàn)下面積與MVD顯著性相關(guān)(P＜0.001)，其中曲線(xiàn)下面積與MVD相關(guān)性最好(r=0.89，P ＜0.001);開(kāi)始增強(qiáng)時(shí)間、峰值時(shí)間與MVD則無(wú)明顯的相關(guān)性(P＞0.05)，詳見(jiàn)表3。

表3 超聲造影增強(qiáng)參數(shù)與MVD表達(dá)相關(guān)性

3 討論

IDC分化程度的高低直接影響其診斷、病理分級(jí)、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移等預(yù)后的判定。不同分化程度腫瘤血供的差異性不僅表現(xiàn)在血流有無(wú)或多少，也直接影響著腫瘤分化和生成的微血管構(gòu)筑的形態(tài)學(xué)變化即MVD［3］。超聲造影增強(qiáng)參數(shù)可以進(jìn)一步定量分析腫瘤內(nèi)部微血管灌注的功能學(xué)變化特征及差異［4］，因此用超聲造影增強(qiáng)參數(shù)探討和評(píng)判IDC的分化程度與微血管密度相關(guān)性研究臨床意義重大。

研究腫瘤血管生成最直接的方法就是對(duì)腫瘤標(biāo)本行血管數(shù)量測(cè)量［2］。CD34抗體被認(rèn)為是惡性腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞具有較高敏感性和特異性的標(biāo)志物，其表達(dá)與腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞增殖、移行有關(guān)，CD34表達(dá)顯示的MVD目前已成為評(píng)價(jià)腫瘤血管生成的金標(biāo)準(zhǔn)［3］。本組結(jié)果顯示IDC低分化組的MVD顯著高于IDC高分化組的MVD(P＜0.001)，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在乳腺癌組織或有惡變趨勢(shì)的組織中MVD較高，而正常組織或良性腫瘤MVD較低，即IDC的分化程度與MVD存在一定的關(guān)系。隨著腫瘤病灶中MVD增加，其發(fā)生和發(fā)展為惡性腫瘤的危險(xiǎn)性也顯著增加［5］，提示病理的分化呈降低趨勢(shì)，腫瘤的惡性程度升高，預(yù)后差。

本研究應(yīng)用SonoVue結(jié)合CnTI技術(shù)，通過(guò)超聲造影對(duì)時(shí)間－強(qiáng)度曲線(xiàn)分析獲得增強(qiáng)參數(shù)，結(jié)果顯示IDC低分化組峰值強(qiáng)度、曲線(xiàn)下面積兩項(xiàng)參數(shù)均高于IDC高分化組(P＜0.01)。病理佐證乳腺癌間質(zhì)中彌漫分布粗細(xì)不均的新生血管，結(jié)構(gòu)不完整，平滑肌及神經(jīng)支配缺乏，血管舒縮成份缺如，異常擴(kuò)張的大血管和裂隙狀新生血管并存等特點(diǎn)［6］，導(dǎo)致IDC尤其是分化差的IDC血液灌注及血流量明顯增加。部分學(xué)者觀(guān)察到低分化的腫瘤在組織學(xué)上表現(xiàn)為竇狀血管腔較分化好的腫瘤明顯擴(kuò)張，IDC在血管生成因子的誘導(dǎo)下產(chǎn)生大量的畸變血管，合并動(dòng)靜脈瘺，因此低分化IDC的血管構(gòu)筑模式造成造影時(shí)具有更快更強(qiáng)更多的灌注特征［7-8］。IDC低分化組增強(qiáng)時(shí)間、峰值時(shí)間均小于高分化組的相應(yīng)參數(shù)，但統(tǒng)計(jì)學(xué)比較無(wú)差異?？赡芘c樣本量較小，在非典型增生及部分纖維腺瘤合并時(shí)血管增多，血管擴(kuò)張導(dǎo)致早期灌注增加等因素有關(guān)。利用超聲造影增強(qiáng)參數(shù)研究IDC的分化程度及相應(yīng)的時(shí)間鑒別點(diǎn)還有待繼續(xù)積累臨床病例及深入研究IDC造影劑增強(qiáng)參數(shù)特征。

峰值強(qiáng)度反映了病灶血管床內(nèi)造影劑微泡總量，與病灶組織的血流灌注量有關(guān);曲線(xiàn)下面積反映了造影劑流量隨時(shí)間的變化，是流速、流量和時(shí)間三者的全面評(píng)估，綜合反映腫瘤的血管床，因此峰值強(qiáng)度及曲線(xiàn)下面積是與MVD相關(guān)性最高的重要參素［9］。本組研究結(jié)果顯示峰值強(qiáng)度、曲線(xiàn)下面積與MVD顯著相關(guān)(P＜0.001)，其中曲線(xiàn)下面積與MVD相關(guān)性最好(r=0.89，P＜0.001)。結(jié)果間接提示了IDC的MVD值的增高預(yù)示著瘤體生長(zhǎng)速度加快，轉(zhuǎn)移可能性增加和患者生存期縮短，對(duì)于幫助判定IDC的分化程度具有一定的應(yīng)用價(jià)值，此與方華等［10］的研究結(jié)論相似。

既往研究腫瘤的血管生存最直接的方法是對(duì)腫瘤手術(shù)后標(biāo)本進(jìn)行血管數(shù)量的測(cè)量，方法滯后，不能在手術(shù)前和放療前做出實(shí)時(shí)無(wú)創(chuàng)的評(píng)價(jià)，難以滿(mǎn)足新近提倡的新輔助化療的臨床要求。血管生存尤其是MVD的研究對(duì)IDC的分化程度及發(fā)生發(fā)展起重要作用。超聲造影定量參數(shù)在病理分化程度不一的IDC中有顯著差異，與病理MVD間有良好的相關(guān)性，是術(shù)前無(wú)創(chuàng)性評(píng)估腫瘤血管生存、評(píng)價(jià)預(yù)后的實(shí)用性影像技術(shù)。

［1］張淵，江泉，陳劍，等.乳腺腫瘤超聲造影與微血管密度及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的相關(guān)性研究［J］.中華超聲影像學(xué)雜志，2012，21(1):52-55.

［2］Weidner N.Intratumor microvessel density as a prognostic factor in cancer［J］.Am J Pathol，1995，147(1):9-19.

［3］李穎嘉，張?jiān)评ィ荜堂?超聲造影微血管成像對(duì)乳腺良惡性腫瘤微血管構(gòu)筑的評(píng)價(jià)［J］.中國(guó)超聲醫(yī)學(xué)雜志，2009，25(6):559-563.

［4］Kettenbach J，Hellbich TH，Huber S，et al.Computer-assisted quantitative assessment of power Doppler US:effects of microbubble contrast agent in the differentiation of breast tumors［J］.Eur J Radiol，2005，53(2):238-244.

［5］Guine bretiere JM，Le Monique G，Gavoille A，et al.Angiogenesis and risk of breast cancer in women with fibrocystic disease［J］.J Natl Cancer Inst，1994，86(8):635-636.

［6］Senger DR，Van de Water L，Brown LF，et al.Vascular permeability factor(VPF，VEGF)in tumor biology［J］.Cancer Metastasis Rev，1993，12(3-4):303-324.

［7］Yamashita Y，F(xiàn)an ZM，Yamamoto H，et al.Spin-echo and dynamic gaclolinium-enhanced FLASH MR imaging of hepatocellular carcinoma:correlation with histopathologic findings［J］.J Magn Reson Imagine，1994，4(1):83-90.

［8］Du J，Li FH，F(xiàn)ang H，et al.Correlation of real-time gray scale contrast-enhanced ultrasonography with microvessel density and vascular endothelial growth factor expression for assessment of angiogenesis in breast lesions［J］.J Ultrasound Med，2008，27(6):821-831.

［9］Lim AK，Patel N，Eckersley RJ，et al.Hepatic vein transit time of SonoVue:a comparative study with Levovist［J］.Radiology，2006，240(1):130-135.

［10］方華，李鳳華，杜晶，等.乳腺腫瘤實(shí)時(shí)灰階超聲造影與微血管密度相關(guān)性研究［J］.中國(guó)超聲醫(yī)學(xué)雜志，2009，25(6):555-558.