趙貴琴，李帆帆，李純剛，張燕，曾勇，孟憲麗

狗皮膏作為傳統(tǒng)黑膏藥制劑，為國(guó)家基本藥物，并收載于中國(guó)藥典。狗皮膏處方含有生川烏、生草烏、羌活、獨(dú)活、青風(fēng)藤、香加皮、防風(fēng)等29味中藥，具有祛風(fēng)散寒，活血止痛的功效，用于風(fēng)寒濕邪、氣血瘀滯所致的痹癥，癥見四肢麻木、腰腿酸痛、筋脈拘攣，或跌打損傷、閃腰岔氣、局部腫痛，或寒濕瘀滯所致的腕腹冷痛、行經(jīng)腹痛、寒濕帶下、積聚痞塊[1]。目前對(duì)狗皮膏的研究主要集中在制備工藝控制指標(biāo)[2]、基質(zhì)[3]、提取溶劑、提取工藝及劑型改進(jìn)[4]，而關(guān)于狗皮膏藥效學(xué)的研究尚未見報(bào)道。因此，我們對(duì)狗皮膏進(jìn)行了小鼠抗炎鎮(zhèn)痛試驗(yàn)研究，為其臨床應(yīng)用提供藥理學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小鼠，體重18～22 g，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（川）2008-24。

1.2 藥物

狗皮膏及基質(zhì)：由天全縣中醫(yī)醫(yī)院提供，參照2010年版中國(guó)藥典制備項(xiàng)[1]進(jìn)行制備，批號(hào)20100219；紅花油（五環(huán)牌）：廣東泰恩康制藥廠有限公司生產(chǎn)，批號(hào)100702。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑

硫化鈉：天津市博迪化工有限公司，批號(hào)20090226（臨用前用75%乙醇配置成8%的溶液）；二甲苯：成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)20091225；冰醋酸: 成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)20100701；瓊脂: 成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)20091110。

1.4 主要儀器

智能熱板測(cè)痛儀、打孔器（6mm）、計(jì)時(shí)器、電子天平。

2 方法

2.1 給藥方法

于給藥前24小時(shí)將小鼠背部用8%硫化鈉脫毛2×2 cm2，將小鼠隨機(jī)分為5組，即狗皮膏基質(zhì)組、狗皮膏大、中 、小 3個(gè)劑量組 、紅花油組，每組10只，各給藥組在小鼠背部脫毛部位敷藥。其中大、中、小劑量組分別按7.5 g.kg-1、5.0 g.kg-1、2.5 g.kg-1給藥，狗皮膏基質(zhì)組按7.5 g.kg-1給藥，紅花油組按0.2mL/只給藥。每天給藥6 h后去藥，于實(shí)驗(yàn)前1 h再給藥一次。

2.2 抗炎試驗(yàn)[5]

2.2.1 對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響 昆明種小鼠50只，雄性，分組及給藥方法見“2.1”項(xiàng)下。連續(xù)用藥5天，末次給藥1 h后，各組動(dòng)物右耳面涂二甲苯0.02mL致炎，30min后將小鼠脫頸椎處死，用直徑為6mm的打孔器分別在左右耳對(duì)稱處取圓形耳片，稱重，以左右耳的重量差異作為腫脹度，計(jì)算腫脹抑制率。

2.2.2 對(duì)瓊脂所致小鼠肉芽腫的影響 昆明種小鼠50只，雄性，分組及給藥方法見“2.1”項(xiàng)下。所有小鼠均在左側(cè)肋下皮下注射2%瓊脂0.2mL/只，并于第二天開始連續(xù)用藥6天，第7天將小鼠脫頸椎處死，小心剝離瓊脂肉芽塊，并稱濕重（g）。

2.3 鎮(zhèn)痛試驗(yàn)[6]

2.3.1 對(duì)小鼠熱板法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)的影響 昆明種小鼠，雌性，給藥前 24 h背部脫毛后將小鼠置于恒溫?zé)岚迳希瑴囟缺３衷?55±0.5) ℃ 范圍，測(cè)痛閾2次，間隔時(shí)間5min，以平均值在 5～30s之間的小鼠為合格。篩選合格小鼠50只，分組及給藥方法見“2.1”項(xiàng)下。測(cè)定各鼠正常痛閾值后連續(xù)用藥5天，末次給藥 1 h、2 h、3 h、4 h時(shí)分別測(cè)各鼠痛閾值。

2.3.2 對(duì)小鼠扭體法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)的影響 昆明種小鼠50只，雌雄各半，分組及給藥方法見“2.1”項(xiàng)下，連續(xù)用藥5天后，于末次給藥后1小時(shí)，每鼠腹腔注射0.7%冰醋酸0.2mL/只，并立即記時(shí)，觀察小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的潛伏期（min）及15min內(nèi)扭體反應(yīng)的次數(shù)（以小鼠腹部凹陷，雙后肢伸展為扭體反應(yīng)指標(biāo)）。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以(x±s)表示，并采用spss 13.0進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響(見表1)

表1 對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響

表1結(jié)果表明：狗皮膏大劑量組能夠抑制小鼠耳腫脹（P＜0.05），狗皮膏中、小劑量組同基質(zhì)組在統(tǒng)計(jì)上并無顯著性差異（P>0.05），但對(duì)小鼠耳腫脹的抑制率呈現(xiàn)一定的趨勢(shì)。提示狗皮膏對(duì)小鼠耳腫脹有一定的抑制作用。

3.2 對(duì)瓊脂所致小鼠肉芽腫的影響（見表2）

表2 對(duì)瓊脂所致小鼠肉芽腫的影響

表2結(jié)果表明：各給藥組與狗皮膏基質(zhì)組比較，狗皮膏大劑量組對(duì)小鼠肉芽腫具有一定的抑制作用

（P＜0.05）。

3.3 對(duì)小鼠熱板法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)的影響（見表3）

表3 對(duì)小鼠熱板法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)的影響

表3的結(jié)果表明：狗皮膏大劑量組在給藥2 h后，與基質(zhì)組比較具有顯著性差異（P＜0.05），狗皮膏中劑量組在給藥4 h與基質(zhì)組比較也有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），說明狗皮膏能提高小鼠痛閾值。

3.4 對(duì)小鼠扭體法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)的影響（見表4）

表4 對(duì)小鼠扭體法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)的影響

表4結(jié)果表明：狗皮膏大、中劑量組均能延長(zhǎng)潛伏期（P＜0.05），且大劑量組在15min內(nèi)的扭體次數(shù)也明顯減少，說明狗皮膏具有較好的鎮(zhèn)痛作用。

4 討論

本研究所選擇的4個(gè)抗炎鎮(zhèn)痛試驗(yàn)均為驗(yàn)證藥物抗炎鎮(zhèn)痛作用的經(jīng)典試驗(yàn)方法。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，狗皮膏大劑量組對(duì)小鼠耳腫脹及肉芽腫具有一定的抑制作用，且能明顯提高小鼠痛閾值，延長(zhǎng)潛伏期并減少扭體次數(shù)。因此，狗皮膏具有較好的抗炎、鎮(zhèn)痛作用。這些結(jié)果為狗皮膏用于治療腰腿疼痛、局部腫痛及跌打損傷提供了藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010,844.

[2]張金蓮,陳小榮.狗皮膏制備工藝控制指標(biāo)的研究[J].江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2002,14(4):26.

[3]張金蓮,陳宇帆.狗皮膏基質(zhì)改進(jìn)的初步研究[J].江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2002,14(3):26.

[4]高小春,韓建偉.狗皮膏的完善改進(jìn)研究概況[J].中國(guó)中醫(yī)藥咨訊,2009,1(6):38.

[5]李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].上?？萍汲霭嫔?1987.

[6]徐淑云.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)(第三版)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2001.