吳波平，黃文華，金顏輝，黃 雁，洪 英，林 芬，楊得勝，王琳轟，吳順意，嚴(yán)乾臨

（1.福建省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，福建福州 350003；2.福建農(nóng)林大學(xué)，福建福州 350003）

偽狂犬?。≒seudorabies，PR）是由皰疹病毒科的偽狂犬病病毒（（Pseudorabies virus，PRV）引起的多種動(dòng)物以發(fā)熱、奇癢和腦脊髓炎為主要臨床特征的一種急性傳染病。本病在世界各地都有發(fā)生，如歐洲各國、美國、中南美各國、馬來西亞、日本等國。我國自1947年在上海首先報(bào)道貓發(fā)生本病以來，至目前已遍布我國絕大部分地區(qū)，罹患動(dòng)物有豬、牛、羊、狗、貓和水貂等動(dòng)物，其中以對(duì)豬的危害最為嚴(yán)重，給畜牧業(yè)，特別是養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。

豬是該病的原發(fā)感染宿主，又是病毒的長期帶毒和排毒者。PRV感染后，將導(dǎo)致仔豬死亡，成年豬則易形成潛伏感染。潛伏感染狀態(tài)下的豬在一定條件下可使病毒重新激活并排毒。當(dāng)前，廣泛開展的疫苗接種，對(duì)強(qiáng)毒感染后形成的潛伏感染及再被激活有重要影響，對(duì)于消除潛在的傳染源和加快偽狂犬病的凈化有重要作用。據(jù)調(diào)查，當(dāng)前我國內(nèi)外生產(chǎn)和使用的PRV疫苗均為gE基因缺失苗。gE基因是PRV的主要的毒力因子之一，但不是病毒復(fù)制所需的。因此，對(duì)gE抗體的檢測(cè)將有助于進(jìn)行PRV疫苗毒與野毒感染的鑒別。

gE缺失疫苗的強(qiáng)制免疫和gE抗體的大規(guī)模監(jiān)測(cè)，成為荷蘭等國成功根除豬群偽狂犬疫病的主要措施，值得我國借鑒。為初步了解福建省規(guī)模豬群中偽狂犬gE抗體分布情況，為進(jìn)一步開展豬群偽狂犬免疫、防控和凈化根除積累數(shù)據(jù)，筆者開展了此項(xiàng)研究工作。

1 材料與方法

1.1 隨機(jī)采樣

福建省9個(gè)設(shè)區(qū)市，每個(gè)設(shè)區(qū)市選擇存欄母豬100頭以下規(guī)模場（A類規(guī)模場）和100頭以上規(guī)模場（B類規(guī)模場）各2個(gè)，每個(gè)豬場分別采集免疫后1個(gè)月的種豬、育肥豬和仔豬血清樣品各15份。

1.2 試劑盒

偽狂犬gE抗體ELISA檢測(cè)試劑盒購自IDEXX公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)過程

實(shí)驗(yàn)操作及結(jié)果判定，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。具體操作如下：用樣品稀釋液將被檢樣品稀釋2倍（1:2），按要求加入陰陽性對(duì)照品后，在其余的孔內(nèi)分別加入100μL已稀釋好的被檢樣品→室溫下孵育1小時(shí)或2~7℃孵育過夜→用大約300μL洗滌液洗滌板孔，重復(fù)3~5次→每孔加入100μL辣根過氧化物酶標(biāo)記抗PRV gpI抗體→室溫下孵育20 min。用大約300μL洗滌液洗滌板孔，重復(fù)3~5次→每孔加入100μL TMB底物液→室溫下孵育15 min→每孔加入50μL終止液→酶標(biāo)儀讀數(shù)OD650nm→S/N值≤0.60，樣品應(yīng)判定為PRV gE抗體陽性。

2 結(jié)果

2.1 偽狂犬gE抗體地域分布

偽狂犬gE抗體地域分布見表1。

2.2 偽狂犬gE抗體養(yǎng)殖規(guī)模分布

偽狂犬gE抗體養(yǎng)殖規(guī)模分布見表2。

2.3 偽狂犬gE抗體陽性場分布

偽狂犬gE抗體陽性場分布見表3和表4。

3 討論分析

3.1 PRV gE抗體的檢測(cè)方法主要為ELISA，而國內(nèi)市場上主要有IDEXX、LSI和HIPRA等幾種試劑可供選擇。從筆者長期從事的實(shí)踐中，我們發(fā)現(xiàn)這三種試劑盒的相關(guān)性較好，與報(bào)道的一致[1]。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇性的使用了IDEXX gE抗體檢測(cè)試劑盒。

3.2 PRV gE抗體的地區(qū)分布較廣泛。9地市除寧德外都存在不同程度的PRV gE抗體陽性，豬群陽性率從5.6%到100%不等，平均為23.6%，與2009年調(diào)查結(jié)果一致（23.56%）[2]，與全國平均水平持平[3]。各地市種豬群PRV gE抗體陽性分布較廣泛，陽性率從16.7%到100%，平均為28.9%。仔豬和育肥豬的PRV gE陽性率地域分布較不均勻，平均陽性率分別為16.6%和20.4%。比較而言，種豬群、育肥豬群和仔豬群PRV gE陽性率依次降低，其中種豬群的陽性率較廣東省冼瓊珍報(bào)道的低[4]。

3.3 PRV gE抗體在不同養(yǎng)殖規(guī)模豬場中的分布不均勻。其中種豬群PRV gE抗體陽性率從高到低依次為中型養(yǎng)殖規(guī)模（母豬存欄100~500頭）>中大型養(yǎng)殖規(guī)模（母豬存欄500~1 000頭）>大型養(yǎng)殖規(guī)模（母豬存欄1 000以上）>小型養(yǎng)殖規(guī)模（母豬存欄<100頭）（此分類僅供參考，下同），陽性率分別為32.7%、28.8%、24.2%和15.3%。育肥豬群與種豬群有著類似的分布規(guī)律，而仔豬群呈現(xiàn)非常明顯的隨養(yǎng)殖規(guī)模增大，仔豬PRV gE陽性降低的特點(diǎn)。

表 1 偽狂犬gE抗體地域分布

表 2 偽狂犬gE抗體養(yǎng)殖模式分布

表 3 偽狂犬gE抗體陽性場比例之地域分布

表 4 偽狂犬gE抗體陽性場比例之養(yǎng)殖模式分布

3.4 PRV gE抗體陽性養(yǎng)殖場比例高。從對(duì)養(yǎng)殖場調(diào)查結(jié)果看，67.6%的豬場存在種豬群PRV gE抗體陽性，這一結(jié)果略高于2009年調(diào)查結(jié)果（62.5%）[2]，低于全國平均水平73.03%[3]，而仔豬群和育肥豬群中的PRV gE陽性養(yǎng)殖場比例分別為38.2%和34.1%。不同養(yǎng)殖規(guī)模，PRV gE陽性養(yǎng)殖場比例呈現(xiàn)一定分布規(guī)律：隨著養(yǎng)殖規(guī)模的增大，種豬群、仔豬群、育肥豬群的豬場陽性率都逐漸減小?？傮w而言，豬場內(nèi)存在PRV gE陽性的豬場比例依次為小規(guī)模豬場66.7%，中型規(guī)模豬場78.9%，500頭母豬以上存欄的豬場比例為53.9%，平均為26/38=68.4%，較楊小燕報(bào)道[5]的比例高，可能與地區(qū)差異有關(guān)。

3.5 這說明，該省PRV gE抗體陽性率較高。目前我國市場上豬偽狂犬疫苗都為gE基因缺失苗，gE抗體陽性率高，從一個(gè)側(cè)面反映了當(dāng)前豬群中存在偽狂犬野毒感染的概率較高。因此，有必要對(duì)生豬群疫苗應(yīng)用歷史進(jìn)行調(diào)查，了解gE基因未缺失疫苗的使用情況，結(jié)合臨床實(shí)踐，確認(rèn)豬場中豬偽狂犬野毒感染形勢(shì)。越來越多的研究和實(shí)踐表明，母豬群的更新淘汰和gE基因缺失疫苗的使用能有效降低豬群中g(shù)E抗體的陽性率，從而有助于正確評(píng)估偽狂犬野毒感染。

[1]陳偉杰，趙靈燕，周彩琴，等.3種ELISA試劑盒檢測(cè)豬偽狂犬病 gE 抗體的比較[J].畜牧與獸醫(yī)，2009，41（11）：57-59.

[2]陳如敬，王隆柏，魏宏.福建省部分地區(qū)規(guī)?；i場偽狂犬病感染情況調(diào)查[J].養(yǎng)豬，2010（1）：38-40.

[3]程晶，陳艷紅，蔭碩焱，等.2006-2008年我國部分地區(qū)規(guī)?；i場PRV血清流行病學(xué)調(diào)查 [J].中國動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)，2009，17（1）：67-72.

[4]冼瓊珍，蔡明福，王淑敏，等.廣東、廣西部分地區(qū)中小型豬場豬偽狂犬病野毒感染的血清學(xué)調(diào)查[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2007（1）：20-21.

[5]楊小燕，戴愛玲，李曉華，等.閩西地區(qū)豬偽狂犬野毒株感染的血清學(xué)調(diào)查[J].中國獸醫(yī)科技，2000（11）：36-37.