裴軼琨

(長(zhǎng)春工業(yè)大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，吉林長(zhǎng)春130012)

復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊對(duì)大鼠骨密度的影響

裴軼琨

(長(zhǎng)春工業(yè)大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，吉林長(zhǎng)春130012)

目的:探討復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊對(duì)去卵巢大鼠骨密度的影響。方法:將16周齡的雌性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)對(duì)照組、去卵巢對(duì)照組和去卵巢低、中、高劑量共5組，其中3個(gè)劑量組每天分別給予復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊0.1、0.2、0.6g/kg·bw，連續(xù)灌胃12周后，檢測(cè)各組大鼠的骨密度和骨鈣含量。結(jié)果:復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊低、高劑量組大鼠股骨中點(diǎn)骨密度值顯著高于去卵巢對(duì)照組(P＜0.05);復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊中、高劑量組大鼠股骨遠(yuǎn)心端骨密度和股骨鈣含量顯著高于去卵巢對(duì)照組(P＜0.05)。結(jié)論:復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊具有增加去卵巢大鼠骨密度的功能。

復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊，去卵巢大鼠，骨密度，骨鈣含量

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

鈣測(cè)定試劑盒 上海名典生物工程有限公司;其他化學(xué)試劑 均為國(guó)產(chǎn)分析純。

DXP-MD型雙能X線骨密度儀 美國(guó)LUNAR公司;UV-1600型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 北京瑞利分析儀器公司;TCL-20 M高速臺(tái)式冷凍離心機(jī) 長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司;DZF-6050型真空干燥箱 上海精宏儀器設(shè)備有限公司;電子天平 北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司;游標(biāo)卡尺 北京量具刃具廠。

表1 復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊對(duì)大鼠體重的影響(SD)

表1 復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊對(duì)大鼠體重的影響(SD)

注：*：與去卵巢對(duì)照組比較，P＜0.05;#：與偽手術(shù)對(duì)照組比較，P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù)(只) 初始體重(g) 第4周(g) 第8周(g) 第12周(g) 283±17 332±24 364±37 364±37去卵巢對(duì)照組 10 284±14 393±35# 435±47# 464±47#低劑量實(shí)驗(yàn)組 9 284±12 388±18# 423±21# 457±30#中劑量實(shí)驗(yàn)組 10 283±10 374±24# 412±28# 440±27#高劑量實(shí)驗(yàn)組 9 285±14 378±16# 398±32* 427±33*偽手術(shù)對(duì)照組9

表2 復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊對(duì)大鼠股骨重、股骨長(zhǎng)和身長(zhǎng)的影響(SD)

表2 復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊對(duì)大鼠股骨重、股骨長(zhǎng)和身長(zhǎng)的影響(SD)

注：#與偽手術(shù)對(duì)照組比較，P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù)(只) 股骨重(mg) 股骨長(zhǎng)(mm) 身長(zhǎng)(cm) 666±53.6 36.6±0.68 23.4±8.5 665±47.2 35.8±0.63 20.0±6.8去卵巢對(duì)照組 10 703±48.7 37.1±1.2# 24.4±5.1#低劑量實(shí)驗(yàn)組 9 696±88.9 37.2±1.7# 24.1±6.0#中劑量實(shí)驗(yàn)組 10 667±22.8 36.6±0.56 23.7±14高劑量實(shí)驗(yàn)組偽手術(shù)對(duì)照組9 9

1.2 復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊的制備

復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊是以天然的大豆提取物為主要原料，并添加了碳酸鈣、膠原蛋白、維生素D3、亞麻籽油等營(yíng)養(yǎng)成分，經(jīng)過(guò)微生物發(fā)酵技術(shù)和現(xiàn)代工藝精制而成。其中，每100g成品中含大豆異黃酮7.5g，鈣20.8g。

本實(shí)驗(yàn)中的復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊由吉林修正藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司提供。人體口服推薦劑量為300mg/粒×4粒/d，以每人60kg體重計(jì)算，折合劑量為20mg/kg·bw·d(即大豆異黃酮攝入量90mg/d，鈣攝入量250mg/d)。實(shí)驗(yàn)時(shí)，取膠囊內(nèi)容物配成水溶液作為灌胃應(yīng)用液。

1.3 動(dòng)物飼料的配制

基礎(chǔ)飼料配方［10］：玉米淀粉32%，酪蛋白23%，蔗糖10%，纖維5%，玉米胚芽油5%，DL-蛋氨酸0.3%，氯化膽堿0.2%，AIN-93M配方混合鹽3.5%，AIN-93M混合維生素1.0%，葡萄糖20%。由吉林省長(zhǎng)春市綠園區(qū)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料廠軋制，低溫保存。

1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

16周齡雌性SD大鼠57只，體重180～200g，清潔級(jí)，由北京大學(xué)(醫(yī)學(xué)部)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室溫度22～24℃，相對(duì)濕度52%～58%。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

SD大鼠經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)后，按體重隨機(jī)分為偽手術(shù)對(duì)照組和去卵巢組。使用消毒器械在乙醚麻醉狀態(tài)下從背側(cè)開(kāi)刀，偽手術(shù)對(duì)照組切除卵巢部分脂肪，去卵巢組切除卵巢。然后對(duì)切口分層縫合，手術(shù)3d后，按體重將切除卵巢動(dòng)物隨機(jī)分為去卵巢對(duì)照組、低劑量組、中劑量組和高劑量組，計(jì)入偽手術(shù)對(duì)照組共5組，每組9～10只。

實(shí)驗(yàn)期間，各組動(dòng)物除喂飼基礎(chǔ)飼料外，去卵巢低、中、高劑量組大鼠分別給予0.1、0.2、0.6g/kg·bw復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊(分別相當(dāng)于人體推薦量的5、10、30倍)，實(shí)驗(yàn)時(shí)，將復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊內(nèi)容物配制成10mL灌胃應(yīng)用液，兩個(gè)對(duì)照組大鼠以等體積清水灌胃，每日一次，每周定期稱(chēng)體重一次。

喂飼期間，SD大鼠單籠飼養(yǎng)，可自由攝食與飲水。喂養(yǎng)12周后處死動(dòng)物，剝離右側(cè)股骨，去除肌肉和軟組織，進(jìn)行有關(guān)指標(biāo)測(cè)量和檢驗(yàn)［11-12］。

1.6 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.6.1 體重 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后，每周定期稱(chēng)量各組大鼠體重并記錄。

1.6.2 股骨重、股骨長(zhǎng)和身長(zhǎng) 使用游標(biāo)卡尺直接測(cè)定各組大鼠股骨重、股骨長(zhǎng)和身長(zhǎng)。

1.6.3 骨鈣含量 采用鄰甲酚酞絡(luò)合酮比色法測(cè)定骨鈣含量［13］。

1.6.4 骨密度 采用雙能X線骨密度掃描儀測(cè)定股骨中點(diǎn)及股骨遠(yuǎn)心端骨密度。

1.7 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS10.0 Windows統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和組間比較。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以SD表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊對(duì)大鼠體重的影響

由表1可知，實(shí)驗(yàn)各組大鼠初始體重不存在顯著差異(P＞0.05);給藥4周后，卵巢切除組(包括去卵巢對(duì)照組和3個(gè)劑量組)大鼠體重顯著高于偽手術(shù)對(duì)照組(P＜0.05)，且去卵巢各組之間大鼠體重差異無(wú)顯著性(P＞0.05);給藥8周后，喂飼復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊的高劑量組大鼠體重顯著低于去卵巢對(duì)照組(P＜0.05);至第12周實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組大鼠體重顯著增加，其中以去卵巢對(duì)照組增重幅度最大，低劑量組次之，最后是中劑量組和高劑量組。

2.2 復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊對(duì)大鼠股骨重、股骨長(zhǎng)和身長(zhǎng)的影響

由表2可知，復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊低劑量組與去卵巢對(duì)照組大鼠股骨長(zhǎng)度和身長(zhǎng)均顯著高于偽手術(shù)對(duì)照組(P＜0.05);復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊各劑量組與對(duì)照組間大鼠股骨重量無(wú)顯著差別(P＞0.05)。

2.3 復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊對(duì)大鼠骨密度和骨鈣含量的影響

復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊中、高劑量組和偽手術(shù)對(duì)照組大鼠股骨鈣含量顯著高于去卵巢對(duì)照組(P＜0.05)，說(shuō)明復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊能夠補(bǔ)充鈣質(zhì)，抑制骨鈣丟失。

表3 復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊對(duì)去卵巢大鼠骨鈣含量和骨密度(BMD)的影響(SD)

表3 復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊對(duì)去卵巢大鼠骨鈣含量和骨密度(BMD)的影響(SD)

注：*與去卵巢對(duì)照組比較，P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù)(只) 股骨鈣含量(mg/g) 股骨中點(diǎn)BMD(mg/cm2) 股骨遠(yuǎn)心端BMD(mg/cm2)偽手術(shù)對(duì)照組 9 254±32* 131±8.2* 152±9.5*去卵巢對(duì)照組 10 200±28 118±6.0 133±11低劑量實(shí)驗(yàn)組 9 209±40 126±6.5* 138±14中劑量實(shí)驗(yàn)組 10 234±30* 124±7.4 145±11*高劑量實(shí)驗(yàn)組 9 245±45* 129±9.6* 150±13*

復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊低、高劑量組和偽手術(shù)對(duì)照組大鼠股骨中點(diǎn)骨密度值顯著高于去卵巢對(duì)照組(P＜0.05);中、高劑量組和偽手術(shù)對(duì)照組股骨遠(yuǎn)心端骨密度值顯著高于去卵巢對(duì)照組(P＜0.05)，說(shuō)明復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊具有增加去卵巢大鼠骨密度的功能作用，且存在量效關(guān)系。

3 結(jié)論

本文以SD模型大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，每天分別經(jīng)口給予復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊0.1、0.2、0.6g/kg· bw，連續(xù)喂養(yǎng)12周，研究復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊對(duì)去卵巢大鼠骨密度的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，卵巢切除大鼠股骨密度和骨鈣含量顯著低于卵巢未切除(偽手術(shù))大鼠，說(shuō)明本次實(shí)驗(yàn)成功地建立了骨丟失模型。卵巢切除大鼠的體重明顯高于偽手術(shù)動(dòng)物，這是因?yàn)槁殉睬谐髮?dǎo)致體內(nèi)雌激素水平下降或缺乏，無(wú)法參與體內(nèi)的物質(zhì)代謝，致使脂肪分解紊亂，體重顯著增加。

同時(shí)，本研究還發(fā)現(xiàn)，復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊可顯著增加卵巢切除大鼠股骨的鈣含量，這種功效可能主要是由受試物中大豆異黃酮和鈣元素共同發(fā)揮的作用引起的。另外，復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊雖然能在一定程度上增加卵巢切除大鼠股骨中點(diǎn)和股骨遠(yuǎn)心端的BMD，但并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊能有效抑制雌激素缺乏所誘發(fā)的小梁骨和皮質(zhì)骨的骨丟失，可能對(duì)絕經(jīng)后女性的骨丟失具有潛在的預(yù)防作用。根據(jù)本研究結(jié)果和《保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法》的判斷標(biāo)準(zhǔn)，確定復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊具有增加去卵巢大鼠骨密度的功能作用。

［1］劉海全，秦佳佳，趙王林，等.中醫(yī)藥治療原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥現(xiàn)狀與展望［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，21(6):1494-1495.

［2］趙剛.骨質(zhì)疏松癥社區(qū)干預(yù)及防治探討［J］.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2010，13(1B):219-220.

［3］來(lái)小彬.預(yù)防老年骨質(zhì)疏松［J］.護(hù)士進(jìn)修雜志，2010，25 (5):387-389.

［4］許潔，趙東寶，劉文斌.老年性骨質(zhì)疏松癥的防治進(jìn)展［J］.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2010，13(11):1246-1248.

［5］羅躍中，李忠英.大豆異黃酮的研究概況［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38(12):6506-6508.

［6］Ishimi Y，Yoshida M，Wakimoto S，et al.Genistein，a soybean isoflavone，affects bone marrow lymphopoiesis and prevents bone loss in castrated male mice［J］.Bone，2002，31(1):180-185.

［7］Ishda H，Uesugi T，Hirai k，et al.Preventive effects of the plantisofiavones，daidzin and genistin，on bone loss in ovariectomized rats fed a calcium-deficient diet［J］.Biol Pharm Bull 1998，21(1):62-66.

［8］張國(guó)莉，陳文鶴.運(yùn)動(dòng)和補(bǔ)鈣對(duì)成年女性骨密度的影響［J］.沈陽(yáng)體育學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，26(1):51-53.

［9］孫曉紅，詹國(guó)瑛.補(bǔ)鈣對(duì)大鼠峰值骨量形成和預(yù)防骨質(zhì)疏松的作用［J］.營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2001，23(1):40-43.

［10］李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.上海:上?？茖W(xué)出版社，1991:276.

［11］盧鈺，柴巍中，林曉明.牛乳堿性蛋白對(duì)大鼠骨密度的影響［J］.衛(wèi)生研究，2007，36(1):37-40.

［12］肖本熙，黃憶明.白藜蘆醇對(duì)去卵巢大鼠骨密度的影響［J］.營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2005，27(6):510-513.

［13］李艷.生物化學(xué)檢驗(yàn)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2003:307.

Effects of soft capsule of soy isoflavones and calcium on rat bone mineral density

PEI Yi-kun
(College of Chemistry and Life Science，Changchun University of Technology，Changchun 130012，China)

Objective:In order to study the effects of soft capsule of soy isoflavones and calcium on bone mineral density in ovariectomized rats.Methods:Sprague-Dawley(SD)female rats，16 weaks old，were ovariectomized and randomized into 5 groups:sham-operated group，ovx control group，ovx low-does，ovx media-does and ovx high -does groups.Rats in 3 treatment groups were treated by gavage using 0.1，0.2，0.6g/kg·bw of soft capsule of soy isoflavones and calcium respectively everyday.Bone mineral density(BMD)and calcium contents were measured after 12-week administration.Results:Rats treated with 0.1，0.6g/kg·bw of soft capsule of soy isoflavones and calcium had significantly higher BMD in middle of femur than those in ovx control group(P＜0.05). Rats treated with 0.2，0.6g/kg·bw of soft capsule of soy isoflavones and calcium had significantly higher femur BMD of distal end and calcium contents than those in ovx control group(P＜0.05).Conclusion:The soft capsule of soy isoflavones and calcium had the function of increasing BMD in ovariectomized rats.

softcapsule ofsoy isoflavones and calcium;ovariectomized rats;bone mineraldensity; calcium contents

TS201.4

A

1002-0306(2011)12-0444-03

骨質(zhì)疏松癥是一種骨量降低、骨組織顯微結(jié)構(gòu)退化，導(dǎo)致骨脆性增加，骨折危險(xiǎn)性增高的全身性慢性疾?。?-2］，該病女性多于男性，常見(jiàn)于絕經(jīng)后的婦女和老年人［3］。目前，補(bǔ)充鈣質(zhì)和雌激素是防治骨質(zhì)疏松癥的有效途徑［4］。大豆異黃酮富含于大豆發(fā)芽部分的“胚芽”中，是植物多酚類(lèi)的一種，由于是從植物中提取，與雌激素有相似結(jié)構(gòu)，故又稱(chēng)“植物雌激素”［5］。它能夠彌補(bǔ)女性雌性激素分泌不足的缺陷，改善皮膚水分及彈性狀況，緩解更年期綜合癥，有效抑制骨骼內(nèi)鈣流失，增加骨密度和預(yù)防骨質(zhì)疏松［6-7］。另外，補(bǔ)鈣對(duì)維持絕經(jīng)婦女的骨質(zhì)健康也起著重要作用［8-9］。然而，有關(guān)大豆異黃酮與鈣共同對(duì)絕經(jīng)期后女性骨質(zhì)疏松的影響還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。因此，本文擬用卵巢切除大鼠模型，研究復(fù)方大豆異黃酮鈣軟膠囊對(duì)去卵巢大鼠增加骨密度功能的作用，為其在預(yù)防骨質(zhì)疏松癥方面的廣泛應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。

2010-10-19

裴軼琨(1973-)，女，碩士，講師，主要從事功能性食品研究。

吉林省教育廳“十一五”科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2009394)。