李小燕，李 梅，陳其鋒，韋升艷，羅 予，仝海娟

(1.廣西民族大學(xué)化學(xué)與生態(tài)工程學(xué)院，廣西 南寧 530006；2.廣西林產(chǎn)化學(xué)品開(kāi)發(fā)與應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530006)

固相萃取-高效液相色譜檢測(cè)葡萄酒中羅丹明B

李小燕1,2，李 梅1，陳其鋒1，韋升艷1，羅 予1，仝海娟1

(1.廣西民族大學(xué)化學(xué)與生態(tài)工程學(xué)院，廣西 南寧 530006；2.廣西林產(chǎn)化學(xué)品開(kāi)發(fā)與應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530006)

建立固相萃取富集凈化，高效液相色譜紫外檢測(cè)葡萄酒中禁用色素羅丹明B的方法。葡萄酒樣品中的羅丹明B經(jīng)C18固相萃取，40%乙醇溶液清洗凈化，80%的甲醇溶液洗脫后，用高效液相色譜紫外檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明：羅丹明B在1.0～10.0μg/mL范圍呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)0.9924；在1.5～3.5μg/mL添加水平時(shí)，平均回收率為72.06%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.87%(n=5)；定量測(cè)出限為0.25μg/mL。表明該方法靈敏度高，重復(fù)性良好，操作簡(jiǎn)便快速，適用于葡萄酒中羅丹明B的檢測(cè)。

固相萃??；高效液相色譜；羅丹明B；葡萄酒

色彩是食品感官品質(zhì)的一個(gè)重要標(biāo)志。因此，人們?cè)谥谱魇称窌r(shí)常使用食用色素來(lái)改善食品的外觀及品質(zhì)，使食品賞心悅目。食用色素有天然色素和合成色素兩大類(lèi)。相對(duì)于天然色素，合成色素具有價(jià)格低廉，色澤鮮艷，著色穩(wěn)定等特點(diǎn)，但合成色素的使用必須遵循國(guó)家有關(guān)規(guī)定。然而，一些不法商家為了用低成本換取高收入，向食品中添加一些違禁色素、香精等，給人們的生活帶來(lái)了極大的安全隱患，也使我國(guó)的出口貿(mào)易受到一定的限制。因此，食品中違禁色素成為食品安全檢測(cè)的重點(diǎn)[1-5]。

羅丹明B(rhodamine B)，又名四乙基羅丹明，玫瑰紅B，堿性玫瑰精，俗名花粉紅，是一種具有鮮桃紅色的人工合成的染料；由間羥基二乙基苯胺和鄰苯二甲酐縮合而成，通常使用的是它的氯化物(分子式為C28H31ClN2O3Cl)。主要用于造紙、制漆、紡織、皮革和瓷器的工業(yè)染色；同時(shí)它也是一種常見(jiàn)的分析試劑，廣泛應(yīng)用于環(huán)保、礦業(yè)、鋼鐵、醫(yī)藥等領(lǐng)域[6-7]。羅丹明B是一種有機(jī)污染物，可通過(guò)食入、吸入或皮膚接觸等三種途徑進(jìn)入人體，使人產(chǎn)生頭痛、頭暈、咽干、咽痛、惡心、嘔吐、腹痛、四肢酸痛、乏力、白細(xì)胞增高等不同程度的中毒癥狀。因此我國(guó)和歐盟等都不允許在食品中使用[8-9]。

目前葡萄酒中添加人工合成色素(如胭脂紅、莧菜紅、檸檬黃、日落黃、亮藍(lán)等)的檢測(cè)已有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[10-11]，在海蝦米、辣椒粉、臘腸等食品中檢出羅丹明的事件也時(shí)有發(fā)生[12-14]，而我國(guó)目前尚無(wú)檢測(cè)食品中羅丹明B 的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于食品中羅丹明B的測(cè)定尚未見(jiàn)葡萄酒的檢測(cè)報(bào)道。為有效地控制工業(yè)染料在食品中的濫用，有必要建立葡萄酒中羅丹明B等違禁色素的檢測(cè)方法，防患于未然，以從容應(yīng)對(duì)突發(fā)的食品安全事件。

固相萃取是一種基于色譜分離的樣品前處理技術(shù)，相對(duì)于傳統(tǒng)的液液萃取而言此法能更有效的將目標(biāo)化合物從復(fù)雜樣品體系中分離，減少樣品預(yù)處理步驟，操作簡(jiǎn)單、快速，更能提高分析結(jié)果的重現(xiàn)性。近年來(lái)已被廣泛應(yīng)用于食品安全檢測(cè)、水質(zhì)環(huán)保監(jiān)測(cè)、臨床醫(yī)學(xué)、新藥開(kāi)發(fā)、刑事鑒定、生命科學(xué)等眾多領(lǐng)域[15-16]。本實(shí)驗(yàn)采用固相萃取技術(shù)對(duì)樣品進(jìn)行萃取凈化處理，用高效液相色譜紫外檢測(cè)葡萄酒中的痕量羅丹明B的方法，為食品安全檢測(cè)提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

干紅葡萄酒及其他葡萄酒 市售。

羅丹明B對(duì)照品(含量99.5%) 中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上海試劑公司；乙腈(色譜純) 美國(guó)飛試公司；無(wú)水乙醇、冰醋酸(均為分析純) 天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠；甲醇(分析純) 西瓏化工股份有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Series200型高效液相色譜儀(配有Series 200紫外檢測(cè)器、Series 200二元泵、600 Series接口及色譜工作站) 美國(guó)Perkin Elmer公司；UV/VIS 916型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) 澳大利亞GBC科學(xué)儀器公司；Phenomenex Gemini C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)；SupelcleanTMLC-C18固相萃取柱(1g，6mL)。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確稱(chēng)取羅丹明B對(duì)照品適量，用無(wú)水乙醇溶解，制成質(zhì)量濃度為100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液。再分別準(zhǔn)確量取貯備液適量，用水稀釋成0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μg/mL 系列標(biāo)準(zhǔn)溶液(Ⅰ)，和1.0、2.5、5.0、7.5、10.0μg/mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液(Ⅱ)，使用前配制。

1.4 試樣的處理

將SupelcleanTMLC-C18固相萃取柱用5mL甲醇活化，5mL水平衡后，將葡萄酒樣品注入固相萃取柱，分別用體積分?jǐn)?shù)40%的乙醇溶液清洗(5mL×3)，體積分?jǐn)?shù)80%的甲醇溶液洗脫(5mL×3)，收集洗脫液，加水定容至20mL，經(jīng)0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后，供高效液相色譜測(cè)定用。

1.5 紫外-可見(jiàn)分光光度法標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

取2.0μg/mL羅丹明B溶液在200～700nm進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，最大吸收波長(zhǎng)為553nm。在553nm波長(zhǎng)處，以水為參比，分別測(cè)定1.3節(jié)系列標(biāo)準(zhǔn)溶液(Ⅰ)的吸光度，以質(zhì)量濃度C(μg/mL)為橫坐標(biāo)，吸光度(A)為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：A=0.226C＋0.0008，相關(guān)系數(shù)r=0.9999。

1.6 高效液相色譜條件

色譜條件(Ⅰ)：流動(dòng)相A：乙腈；B：水。梯度洗脫程序：0～5min，A:B(V/V)=15:85；5～30min，A:B(V/V)=45:55。流速：1.0mL/min；柱溫：40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；進(jìn)樣量：20μL。

色譜條件(Ⅱ)：流動(dòng)相：乙腈:水=45:55(V/V)；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：20μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 固相萃取條件的選擇

2.1.1 清洗劑和清洗次數(shù)的選擇

將C18固相萃取柱用甲醇活化(5mL×2)，用蒸餾水平衡(5mL×2)；取5mL葡萄酒注入C18固相萃取柱，收集萃取后的濾液。再分別用5mL蒸餾水、體積分?jǐn)?shù)10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%的乙醇溶液和無(wú)水乙醇連續(xù)清洗，分別收集各個(gè)清洗液，用水定容至10mL。在553nm波長(zhǎng)下以水為參比分別測(cè)定它們的吸光度和葡萄酒原液及萃取后濾液的吸光度，分別計(jì)算每個(gè)清洗劑所對(duì)應(yīng)的單次清洗率，結(jié)果見(jiàn)表1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，清洗至乙醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)40%時(shí)葡萄酒基質(zhì)的總清洗率已接近90%，因此，選擇40%的乙醇溶液作清洗劑較為適宜。

表1 清洗劑的選擇Table 1 Selection of washing solvent for Supelclean- C18 SPE column

另取葡萄酒5mL，注入C18固相萃取柱，用40%乙醇溶液5mL，多次清洗，分別收集清洗液，用水定容至10mL，在553nm波長(zhǎng)處以水為參比分別測(cè)定它們的吸光度。計(jì)算清洗率，結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明，清洗至第3次時(shí)清洗液已無(wú)色，總清洗率已達(dá)93.28%。

表2 清洗次數(shù)的選擇Table 2 Selection of washing times for Supelclean-C18 SPE column

取5.0μg/mL羅丹明B對(duì)照品溶液5mL，經(jīng)C18固相萃取柱吸附后，分別用40%的乙醇溶液5mL清洗多次，分別收集清洗液并定容至10mL，在553nm波長(zhǎng)下分別測(cè)定它們的吸光度，以驗(yàn)證上述清洗程序是否對(duì)羅丹明B產(chǎn)生影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 清洗劑和清洗次數(shù)的驗(yàn)證Table 3 Verification of optimal washing solvent and washing times

驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，羅丹明B不受清洗過(guò)程的影響，可完全保留在萃取柱中。選擇40%的乙醇清洗3次，葡萄酒中的基質(zhì)成分的總清洗率可達(dá)93.28%，而目標(biāo)化合物羅丹明B仍保留在萃取柱中，不受清洗過(guò)程的影響。因此確定40%的乙醇為清洗劑，清洗次數(shù)為3次。2.1.2 洗脫劑和洗脫次數(shù)的選擇

取5.0μg/mL羅丹明B對(duì)照品溶液5mL，分別注入3支C18固相萃取柱中進(jìn)行吸附后，分別用5mL乙腈、甲醇、無(wú)水乙醇洗脫，分別收集洗脫液并用水定容至10mL，按1.5節(jié)方法分別測(cè)定吸光度，計(jì)算洗脫率(洗脫率/%=洗脫量/吸附量×100)，結(jié)果見(jiàn)表4。表明甲醇的洗脫能力大于無(wú)水乙醇和乙腈，因此，選擇甲醇為洗脫劑。

表4 洗脫劑種類(lèi)的選擇Table 4 Selection of elution solvent for Supelclean-C18 SPE column

取4.0μg/mL羅丹明B對(duì)照品溶液5mL，經(jīng)C18固相萃取柱吸附后，分別用5mL體積分?jǐn)?shù)10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%的甲醇溶液和甲醇連續(xù)洗脫，分別收集各洗脫液，用水定容至10mL，按1.5節(jié)方法分別測(cè)定吸光度，計(jì)算每個(gè)洗脫劑所對(duì)應(yīng)的單次洗脫率，結(jié)果見(jiàn)表5。結(jié)果表明：體積分?jǐn)?shù)為80%的甲醇溶液對(duì)應(yīng)的洗脫率最大，因此，確定洗脫劑中甲醇的體積分?jǐn)?shù)為80%。

表5 洗脫劑比例的選擇Table 5 Selection of methanol concentration for Supelclean-C18 SPE column

取4.0μg/mL羅丹明B對(duì)照品溶液5mL，經(jīng)C18固相萃取柱吸附后，用80%的甲醇溶液5mL洗脫多次，分別收集洗脫液，用水定容至10mL；按1.5節(jié)方法分別測(cè)定吸光度，計(jì)算各次的洗脫率，前3次的總洗脫率為103.9%，結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 洗脫次數(shù)的選擇Table 6 Selection of elution times for Supelclean-C18 SPE column

由表6可知，選擇80%的甲醇溶液為洗脫劑洗脫3次，可將羅丹明B 洗脫。因此可確定固相萃取條件為：以40%的乙醇溶液作為清洗劑，清洗3次；以80%的甲醇溶液作為洗脫劑，洗脫3次。

2.2 固相萃取條件的驗(yàn)證

在同一條件下，比較固相萃取時(shí)選擇的最大吸收波長(zhǎng)553nm和254nm兩個(gè)波長(zhǎng)下的色譜圖，并兼顧葡萄酒中其他組分的檢出，確定檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm；按色譜條件(Ⅰ)測(cè)定羅丹明B對(duì)照品、陰性葡萄酒樣品和加標(biāo)樣品的色譜圖，如圖1所示。在色譜條件(Ⅰ)下羅丹明B的保留時(shí)間為9.90min。

圖1 羅丹明B對(duì)照品、陰性葡萄酒樣品和加標(biāo)樣品的色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of spiked sample (a)，standard rhodamine B (b) and unspiked sample (c)

由圖1可知，色譜條件(Ⅰ)能使葡萄酒中的基質(zhì)峰與羅丹明B的色譜峰基線分離。取葡萄酒原液5mL，注入C18固相萃取柱，按照以上確定的固相萃取條件和步驟進(jìn)行處理，分別收集其萃取后的濾液、清洗液、洗脫液并用水定容至20mL；另取葡萄酒原液5mL，加水稀釋至20mL；將各溶液經(jīng)0.45μm的有機(jī)濾膜過(guò)濾，取濾液，按1.6節(jié)色譜條件(Ⅰ)進(jìn)行測(cè)定。葡萄酒上柱后的萃取濾液、清洗液、洗脫液和葡萄酒原液的色譜圖如圖2所示。

圖2 葡萄酒濾液、清洗液、洗脫液和原液色譜圖Fig.2 HPLC chromatograms of flow-through (a), effluent (b), eluate (c)as a result of SPE separation and raw wine sample (d)

從圖2可以看出，葡萄酒中的大部分色素物質(zhì)不被固相萃取柱保留，而隨濾液流出萃取柱；少部分被保留的物質(zhì)在用40%乙醇溶液清洗3次即被完全除去，洗脫液中已無(wú)基質(zhì)物質(zhì)存在。說(shuō)明清洗條件可行。

取10.0μg/mL的羅丹明B對(duì)照品溶液5mL，注入C18固相萃取柱，按照以上確定的固相萃取條件和步驟進(jìn)行處理，分別收集其萃取后的濾液、清洗液、洗脫液，加水定容至20mL；另取10.0μg/mL羅丹明B對(duì)照品溶液5mL，加水定容至20mL(含羅丹明B 2.5μg/mL)；將各溶液經(jīng)0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾，取濾液，按1.6節(jié)色譜條件(Ⅰ)進(jìn)行測(cè)定。羅丹明B對(duì)照品溶液上柱后的萃取濾液、清洗液、洗脫液和羅丹明B對(duì)照品溶液的色譜圖如圖3所示。從圖3可以看出，上柱后的濾液及清洗液中不含羅丹明B，說(shuō)明羅丹明B上柱后可完全保留在柱中，并且在清洗過(guò)程中不被清洗；羅丹明B只出現(xiàn)在洗脫液中，說(shuō)明其只在洗脫步驟中被洗脫。

圖3 羅丹明B對(duì)照品萃取濾液、清洗液、洗脫液和對(duì)照品溶液色譜圖Fig.3 HPLC chromatograms of flow-through (a), effluent (b), eluate (c)as a result of SPE separation and standard rhodamine B (h)

取羅丹明B貯備液適量，用葡萄酒稀釋?zhuān)瞥少|(zhì)量濃度10.0μg/mL的加標(biāo)樣品溶液。取該加標(biāo)樣品溶液5mL，注入C18固相萃取柱，按照以上確定的固相萃取條件和步驟進(jìn)行處理，分別收集其萃取后的濾液、清洗液、洗脫液，分別用水定容至20mL；另取10.0μg/mL加標(biāo)樣品溶液5mL，加水定容至20mL(含羅丹明B 2.5μg/mL)。將上述各溶液經(jīng)0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾，取濾液，按1.6節(jié)色譜條件(Ⅰ)進(jìn)行測(cè)定。加標(biāo)樣品上柱后的萃取濾液、清洗液、洗脫液和加標(biāo)樣品原液的色譜圖如圖4所示。由圖4可以看出，葡萄酒中的基質(zhì)峰和羅丹明B的色譜峰基線分離，且峰形尖銳。葡萄酒中的基質(zhì)色素物質(zhì)只出現(xiàn)在過(guò)柱萃取后的濾液和清洗液中，而洗脫液中除羅丹明B外無(wú)其他雜質(zhì)峰，說(shuō)明經(jīng)過(guò)固相萃取和清洗步驟，已將樣品基質(zhì)中的雜質(zhì)物除去，不會(huì)干擾羅丹明B的測(cè)定。

圖4 加標(biāo)樣品萃取濾液、清洗液、洗脫液和加標(biāo)樣品原液色譜圖Fig.4 HPLC chromatograms of flow-through (a), effluent (b), eluate (c)as a result of SPE separation and spiked wine sample (d)

由圖2～4可知：葡萄酒中的大部分色素物質(zhì)不被固相萃取柱保留，而隨濾液流出萃取柱；少部分被保留的物質(zhì)在用40%乙醇溶液清洗3次后即被完全除去，而目標(biāo)化合物羅丹明B不受清洗過(guò)程的影響仍保留在萃取柱上；洗脫液中除了羅丹明B外無(wú)其他雜質(zhì)峰，說(shuō)明80%甲醇溶液洗脫3次能將目標(biāo)化合物羅丹明B洗脫。

以上驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，所選擇的固相萃取條件能將葡萄酒中雜質(zhì)物質(zhì)和目標(biāo)化合物羅丹明B分離，從而達(dá)到對(duì)樣品的凈化和對(duì)目標(biāo)化合物的富集作用。符合實(shí)驗(yàn)要求。

2.3 HPLC法標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍及檢出限

取1.3節(jié)質(zhì)量濃度1.0～10.0μg/mL的羅丹明系列標(biāo)準(zhǔn)溶液(Ⅱ)，按1.6節(jié)色譜條件(Ⅱ)進(jìn)行測(cè)定，以質(zhì)量濃度C/(μg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為A=87884C－4654，相關(guān)系數(shù)R=0.9924。表明在1.0～10.0μg/mL范圍內(nèi)，質(zhì)量濃度與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，符合定量要求。以RSN=3計(jì)算方法的最低檢出線為0.25μg/mL。

2.4 加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

取羅丹明B儲(chǔ)備液適量，用葡萄酒稀釋?zhuān)瞥少|(zhì)量濃度分別為1.5、2.0、2.5、3.0、3.5μg/mL系列加標(biāo)溶液。各取20mL注入C18固相萃取柱。在所選擇的固相萃取條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將各系列加標(biāo)溶液的洗脫液用水定容至20mL，按1.6節(jié)色譜條件(Ⅱ)測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 7 Results of spike recovery test

由表7可知，加標(biāo)質(zhì)量濃度在1.5～3.5μg/mL之間回收率較穩(wěn)定，平均回收率為72.06%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為2.87%。

2.5 精密度和重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取5.0μg/mL羅丹明B對(duì)照品溶液，按1.6節(jié)色譜條件(Ⅱ)平行測(cè)定5次，峰面積的RSD為0.87%，表明該方法精密度良好。

配制5份加標(biāo)水平為2.0μg/mL羅丹明B的加標(biāo)樣品溶液20mL，按1.6節(jié)色譜條件(Ⅱ)分別對(duì)洗脫液進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表8?；厥章实腞SD為2.34%，表明該方法的重復(fù)性良好。SupelcleanTMLC-C18固相萃取柱至少可以重復(fù)使用10次。

表8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 8 Results of repeatability test

表9 固相萃取柱使用壽命實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 9 Effect of repeated use of Supelclean-C18 SPE column on rhodamine B recovery

2.7 實(shí)際樣品的測(cè)定

經(jīng)2.2節(jié)固相萃取條件驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)證明，加標(biāo)樣品經(jīng)過(guò)固相萃取及清洗步驟后，洗脫液已很純凈，因此實(shí)際樣品分析可按1.6節(jié)色譜條件(Ⅱ)進(jìn)行。在色譜條件(Ⅱ)下羅丹明B的保留時(shí)間為6.40min，其色譜圖見(jiàn)圖5。

圖5 羅丹明B色譜圖Fig.5 HPLC chromatogram of standard Rhodamine B

對(duì)市售的多個(gè)葡萄酒樣品按1.4節(jié)步驟進(jìn)行萃取、凈化、洗脫，洗脫液按1.6節(jié)色譜條件(Ⅱ)進(jìn)行分析，將這些樣品的色譜圖和羅丹明B對(duì)照品色譜圖進(jìn)行比較，樣品在6～7min之間均無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明這些市售葡萄酒樣品不含羅丹明B。各樣品色譜圖分別見(jiàn)圖6。

2.6 固相萃取柱使用壽命實(shí)驗(yàn)

用一支固相萃取柱，取加標(biāo)水平為12μg/mL的樣品5mL，按1.4節(jié)方法進(jìn)行試樣處理，按1.6節(jié)色譜條件(Ⅱ)測(cè)定。對(duì)一支固相萃取柱進(jìn)行多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)(固相萃取柱可用9:1的甲醇/冰醋酸(V/V)再生)，計(jì)算各次的回收率，結(jié)果見(jiàn)表9。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在加標(biāo)水平高達(dá)12μg/mL的情況下，固相萃取柱重復(fù)使用10次，回收率仍可達(dá)67%～63%，變化較小。因此，可以判定

圖6 冰玫瑰(A)、貴族全汁(B)、紅房子(C)、赤霞珠(D)、情人醉(E)葡萄酒樣品色譜圖Fig.6 HPLC chromatogram of Bingmeigui (A), Guizu (B), Hongfangzi(C), Chixiazhu (D) and Qingrenzui (E) grape wine samples

3 結(jié) 論

3.1 本實(shí)驗(yàn)建立固相萃取凈化、富集，高效液相色譜檢測(cè)葡萄酒中禁用色素羅丹明B的方法。該方法靈敏度高，精密度和重復(fù)性好。

3.2 對(duì)C18固相萃取柱進(jìn)行使用壽命測(cè)試，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在羅丹明B添加質(zhì)量濃度高達(dá)12μg/mL時(shí)LC-C18固相萃取柱至少可以重復(fù)使用10次。

3.3 雖然在市售葡萄酒樣品中未發(fā)現(xiàn)含羅丹明B的陽(yáng)性樣品，但本實(shí)驗(yàn)建立的方法可以作為快速檢測(cè)葡萄酒中羅丹明B的依據(jù)。

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Determination of Rhodamine B in Red Wine by Solid Phase Extraction-High Performance Liquid Chromatography

LI Xiao-yan1,2，LI Mei1，CHEN Qi-feng1，WEI Sheng-yan1，LUO Yu1，TONG Hai-juan1
(1. College of Chemistry and Ecological Engineering, Guangxi University for Nationalities, Nanning 530006, China；2. Key Laboratory of Development and Application of Forest Chemicals of Guangxi Province, Nanning 530006, China)

A solid phase extraction followed by high performance liquid chromatographic method was developed for the analysis of the prohibited colorant rhodamine B in red wine. The separation of rhodamine B from wines was achieved on a Supelclean-C18SPE column washed with 40% ethanol aqueous solution (V/V) and eluted with 80% methanol aqueous solution (V/V) prior to analysis on a high performance liquid chromatography equipped with a UV detector. The calibration curve of the method was linear over the range of 1.0 to 10.0μg/mL with a correlation coefficient of 0.9924. The recoveries for rhodamine B standard spiked in the range of 1.5 to 3.5μg/mL were between 69.67% and 75.00% with a relative standard deviation (RSD) of 2.87% (n = 5).The detection limit was 0.25μg/mL. Owing to advantages of good linearity, low limit of detection, high precision and rapidity,this method is suitable for the determination of rhodamine B in red wine.

solid phase extraction；high performance liquid chromatography；rhodamine B；red wine

O657.72

A

1002-6630(2011)08-0238-06

2010-07-04

廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2010GXNSFA013047)；廣西教育廳科研項(xiàng)目(200911LX84)

李小燕(1961—)，女，研究員，主要從事現(xiàn)代分離分析技術(shù)研究。E-mail：lixiaoyan73515@163.com