鄭為騫，傅超美，胡慧玲，劉婧，劉芳

點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川 成都 610075

中藥湯劑能體現(xiàn)中醫(yī)辨證施治、隨癥加減的優(yōu)勢，為中醫(yī)臨床廣泛應(yīng)用的劑型［1］。湯劑一般使用中藥傳統(tǒng)飲片制備，但需加大量水，長時(shí)間煎煮，造成藥材資源和能源的較大浪費(fèi)?，F(xiàn)代飲片系將中藥材粉碎為適宜粒度的粉末后制成顆粒并壓制成片的一種新型中藥飲片［2，3，4］。本文以陳皮(蕓香科植物橘 Citrus reticulata Blanco及其栽培變種的干燥成熟果皮)的現(xiàn)代飲片和傳統(tǒng)飲片為研究對象，以其有效成分橙皮苷的溶出量和干膏收率為指標(biāo)，對陳皮兩種飲片在不同時(shí)間點(diǎn)的溶出效果進(jìn)行綜合比較，旨在為中藥現(xiàn)代飲片的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

Shimadzu LC－20AT型高效液相色譜儀(配有SPD－M20AT檢測器，LC Solution工作站，日本島津公司);DiamonsilTMC18色譜柱(250×4.6 mm，5 μm，美國迪馬公司);Sartorius－BS110S分析天平(德國賽多利斯公司);BSY－1－4電熱恒溫水浴鍋(浙江余姚工業(yè)儀表二廠);AS10200A超聲波清洗器(南京昕航科學(xué)儀器有限公司)。

陳皮現(xiàn)代飲片(試驗(yàn)室自制，批號 1102119、1102120、1102121);陳皮藥材，購于四川新荷花中藥飲片股份有限公司，批號:1102052;橙皮苷，購于中國藥品生物制品檢定所，批號:110721－200613;色譜甲醇(美國天地公司);水為超純水(試驗(yàn)室自制);其他試劑均為分析純。

2 方法

2.1 兩種陳皮飲片煎液的制備

分別稱取陳皮傳統(tǒng)飲片10份，每份10 g，加入15倍量水，浸泡30 min，取其中5份，分別煎煮5 min、10 min、15 min、20 min、30 min 后，濾過，濾液定容至 250 mL，得1至5號樣品煎液，備用。取剩下5份樣品，先煎煮30分鐘，濾過，收集濾液備用，再將濾渣加入10倍量水，分別煎煮 5 min、10 min、15 min、20 min、30 min，濾過，合并兩次濾液，定容至250 mL，得6至10號樣品煎液，備用。

另外分別稱取陳皮現(xiàn)代飲片10份，每份10 g，同法制備陳皮現(xiàn)代飲片1到10號樣品煎液。

2.2 橙皮苷的含量測定

參照中國藥典2010年版一部“陳皮”項(xiàng)下橙皮苷含量測定色譜條件［5］:檢測波長283 nm，流動(dòng)相:甲醇－水－乙酸(35 ∶61 ∶4)，流速:1.0 mL·min－1，柱溫:30℃，理論塔板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)應(yīng)不低于2000。

2.2 .1 供試品溶液的制備

取“2.1”項(xiàng)下各樣品溶液，搖勻，經(jīng)0.45 μm 微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

2.2 .2 對照品溶液的制備

精密稱取橙皮苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.4 mg的溶液，即得。

2.2 .3 含量測定方法學(xué)考察

(1)線性關(guān)系考察

精密吸取橙皮苷對照品溶液 2 μL、4 μL、5 μL、8 μL、10 μL、20 μL，分別進(jìn)樣分析。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，對照品含量(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，在0.8 μg～8.0 μg范圍內(nèi)，橙皮苷峰面積與進(jìn)樣量呈良好線性關(guān)系，回歸方程為:Y=555884X+6838.2，R=0.9999。

(2)精密度試驗(yàn)

精密吸取濃度為0.4 mg·mL－1的橙皮苷對照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，按照上述色譜條件進(jìn)行檢測，記錄橙皮苷峰面積，計(jì)算RSD。試驗(yàn)結(jié)果表明，RSD為0.7%，儀器精密度良好。

(3)穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取對照品溶液和陳皮現(xiàn)代飲片供試品溶液 10 μL，按照上述色譜條件分別于 0 h，4 h，8 h，12 h，16 h，20 h，24 h 時(shí)進(jìn)樣測定分析，記錄橙皮苷峰面積，計(jì)算RSD。試驗(yàn)結(jié)果表明，RSD分別為1.1%和1.6%，對照品和供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

(4)重復(fù)性試驗(yàn)

取同批號陳皮傳統(tǒng)飲片和現(xiàn)代飲片各5份，每份10 g，按照“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測定并計(jì)算橙皮苷含量。試驗(yàn)結(jié)果表明，RSD值分別為1.6%和2.3%，該方法重復(fù)性良好。

(5)加樣回收率試驗(yàn)

精密稱定已知含量的陳皮傳統(tǒng)飲片和現(xiàn)代飲片樣品各5份，精密加入橙皮苷對照品適量，按照“2.2.1”項(xiàng)下制備供試品溶液，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果表明，本方法的平均回收率分別為98.60%和98.1%，RSD為1.4%和2.2%，符合含量測定要求。

2.2 .4 樣品的含量測定

精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下方法所制得的供試品溶液10 μL，按照含量測定色譜條件測定峰面積，計(jì)算橙皮苷含量，記錄數(shù)據(jù)。

2.3 干膏收率的測定

分別吸取“2.1”項(xiàng)下飲片煎液各30 mL，置已恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量，記錄數(shù)據(jù)。

3 結(jié)果

3.1 橙皮苷含量測定結(jié)果

在不同煎煮時(shí)間點(diǎn)下，陳皮兩種飲片的橙皮苷含量測定結(jié)果見表1、圖1。

表1 不同時(shí)間點(diǎn)橙皮苷含量測定結(jié)果(，n=3)

表1 不同時(shí)間點(diǎn)橙皮苷含量測定結(jié)果(，n=3)

樣品編號 煎煮時(shí)間(min) 傳統(tǒng)飲片橙皮苷含量(mg·g－1) 現(xiàn)代飲片橙皮苷含量(mg·g－1)1 9.54±0.22 12.24±0.45 2 10 9.76±0.27 12.55±0.36 3 15 9.93±0.32 12.98±0.40 4 20 10.11±0.28 13.47±0.52 5 30 10.37±0.29 14.50±0.31 6 30+5 16.02±0.41 18.68±0.62 7 30+10 16.26±0.47 18.73±0.58 8 30+15 16.51±0.39 18.98±0.49 9 30+20 16.57±0.55 19.04±0.67 5 10 30+30 16.65±0.42 19.15±0.58

圖1 陳皮飲片中橙皮苷含量測定HPLC圖譜

試驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)過相同時(shí)間煎煮，陳皮現(xiàn)代飲片的橙皮苷含量高于傳統(tǒng)飲片。

3.2 干膏收率的測定結(jié)果

在不同煎煮時(shí)間點(diǎn)下，陳皮兩種飲片的干膏收率試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 不同時(shí)間點(diǎn)干膏收率測定結(jié)果表(，n=3)

表2 不同時(shí)間點(diǎn)干膏收率測定結(jié)果表(，n=3)

樣品編號 煎煮時(shí)間(min)傳統(tǒng)飲片干膏收率(%)現(xiàn)代飲片干膏收率(%)1 13.39±0.82 28.53±1.10 2 10 15.57±0.91 29.86±1.11 3 15 17.29±0.79 30.03±1.37 4 20 19.63±1.06 31.06±0.98 5 30 21.43±1.15 32.16±1.29 6 30+5 24.66±0.92 33.04±0.95 7 30+10 24.79±1.24 33.79±1.02 8 30+15 24.84±1.05 34.25±0.92 9 30+20 24.99±0.83 34.69±1.24 5 10 30+30 25.18±1.27 35.15±1.07

試驗(yàn)結(jié)果表明，在第一次加水煎煮中和第二次加水煎煮中，現(xiàn)代飲片的干膏收率均高于傳統(tǒng)飲片。

3.3 綜合加權(quán)評分分析

根據(jù)藥物性質(zhì)和臨床療效，選擇橙皮苷含量和干膏收率為評價(jià)指標(biāo)，對陳皮現(xiàn)代飲片不同時(shí)間點(diǎn)的溶出效果進(jìn)行綜合加權(quán)評分［6］。橙皮苷含量給予權(quán)重系數(shù)0.6，干膏收率作為煎煮工藝的參考指標(biāo)給予權(quán)重系數(shù)0.4。溶出效果經(jīng)綜合加權(quán)評分后，結(jié)果見表3和圖2。

表3 綜合加權(quán)評分結(jié)果表(，n=3)

表3 綜合加權(quán)評分結(jié)果表(，n=3)

樣品編號 不同煎煮時(shí)間(min)傳統(tǒng)飲片綜合得分現(xiàn)代飲片綜合得分1 45.12±2.03 70.81±1.93 2 10 48.29±1.69 73.3±3.44 3 15 50.78±1.82 74.84±1.82 4 20 54.01±2.21 77.94±2.67 5 30 56.87±1.60 82.02±3.23 6 30+5 79.05±1.95 99.12±3.08 7 30+10 79.15±2.64 99.43±2.53 8 30+15 79.99±3.29 99.44±2.48 9 30+20 80.05±3.01 99.13±2.31 5 10 30+30 80.12±2.94 99.62±2.74

圖2 陳皮兩種飲片煎出效果加權(quán)評分結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明，相同的煎煮時(shí)間下，陳皮現(xiàn)代飲片的煎出效果高于傳統(tǒng)飲片，其煎出效果評分在1.24～1.57倍之間。陳皮現(xiàn)代飲片6號的煎出效果總體評分值與同組的7、8、9、10號相比無明顯變化，故選擇現(xiàn)代飲片6號樣品作為陳皮現(xiàn)代飲片最佳評分值樣品。陳皮傳統(tǒng)飲片6號的煎出效果總體評分值與同組的7、8、9、10號相比無明顯變化，故選擇傳統(tǒng)飲片6號作為陳皮傳統(tǒng)飲片最佳評分值樣品。對比兩者6號的綜合評分，陳皮現(xiàn)代飲片溶出效果得分是傳統(tǒng)飲片的1.25倍。故陳皮現(xiàn)代飲片1 g約相當(dāng)于傳統(tǒng)飲片1.25 g的煎出效果。

3.4 結(jié)論

通過對陳皮現(xiàn)代飲片和傳統(tǒng)飲片在不同時(shí)間點(diǎn)下橙皮苷煎出量和干膏收率的測定，表明陳皮現(xiàn)代飲片煎出效果是傳統(tǒng)飲片的1.25倍。陳皮現(xiàn)代飲片煎出效果明顯優(yōu)于傳統(tǒng)飲片。

4 討論

中藥現(xiàn)代飲片是在傳統(tǒng)中藥“煮散”理論指導(dǎo)下［7］，結(jié)合現(xiàn)代制劑技術(shù)而研制成的新型飲片?，F(xiàn)代飲片在水中易崩解，使藥物成分溶出更快更完全，對減少藥材的用量、保護(hù)中藥材資源具有重要的意義，同時(shí)也節(jié)約時(shí)間與能源，符合現(xiàn)代社會需求。

橙皮苷為陳皮藥材主要有效成分，其含量的高低對陳皮的臨床療效影響較大，故選擇橙皮苷含量作為評價(jià)指標(biāo)之一，權(quán)重系數(shù)相應(yīng)較高，以0.6為宜。干膏收率能側(cè)面反映出陳皮速煎飲片固體成分的煎出率，綜合評價(jià)時(shí)權(quán)重系數(shù)相應(yīng)較小，以0.4為宜。本試驗(yàn)采集不同時(shí)間點(diǎn)的煎液中橙皮苷含量和干膏收率，能直觀的體現(xiàn)陳皮兩種飲片達(dá)到最大煎出效果的時(shí)間和量的關(guān)系，客觀公正的評價(jià)兩種飲片的煎出效果。本試驗(yàn)從陳皮化學(xué)成分溶出方面探討現(xiàn)代飲片與常規(guī)飲片溶出效果之間的關(guān)系，至于兩者的量效關(guān)系，有待藥效學(xué)的進(jìn)一步研究。

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