趙建忠,李智山,許東強(qiáng),洪 波

(襄陽(yáng)市中心醫(yī)院1.醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)部;2.消化科,湖北 襄陽(yáng)441021)

原發(fā)性肝癌(Primary liver cancer,PLC)指肝細(xì)胞或肝內(nèi)膽管細(xì)胞發(fā)生癌變,是臨床上常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一。我國(guó)是肝癌大國(guó),也是全球肝癌發(fā)病率最高的國(guó)家,在常見(jiàn)腫瘤中僅次于肺癌居第二位,且發(fā)病率仍在呈上升勢(shì)頭[1]。由于肝癌起病隱襲,早期診斷困難,大多數(shù)患者在確診時(shí)已達(dá)局部晚期或發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移;因此早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是提高肝細(xì)胞癌患者生存率的最佳途徑[2]。

迄今為止,被廣泛認(rèn)可的原發(fā)性肝癌血清標(biāo)志物是甲胎蛋白(AFP),但其在病毒性肝炎和慢性肝臟疾病中亦可見(jiàn)不同程度升高,臨床檢測(cè)的敏感度較低[3]。近年來(lái),其它許多分子也相繼被報(bào)道可以作為原發(fā)性肝癌早期診斷的腫瘤標(biāo)志物,如甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3),異常凝血酶原(DCP),高爾基體蛋白 73(GP73),α-L-巖藻糖苷酶(α fu),磷脂酰肌醇蛋白多糖3(GPC3)等[4]。其中AFP-L3為肝癌細(xì)胞特有,而GP73在原發(fā)性肝癌組織中的表達(dá)敏感度高于AFP,因此他們被廣泛用于原發(fā)性肝癌早期診斷[5-7]。本研究以原發(fā)性肝癌,肝硬化,慢性肝炎,健康對(duì)照樣本為試驗(yàn)材料,測(cè)定血清中AFP-L3和GP7含量,評(píng)估它們?cè)谠l(fā)性肝癌診斷中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 資料

本研究共收集來(lái)自本醫(yī)院2008年12月-2009年12月住院患者血清標(biāo)本116例,年齡在20-69歲(48.63±13.79),其中男性76例,女性 40例。包括原發(fā)性肝癌45例,肝硬化35例,慢性肝炎36例。選擇本醫(yī)院同期體檢健康者40例,排除相關(guān)肝病,平均年齡42.24±11.84歲。原發(fā)性肝癌診斷根據(jù)中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)肝癌專業(yè)委員會(huì)(2001)修訂的《原發(fā)性肝癌的診斷與分期標(biāo)準(zhǔn)》進(jìn)行[8]。肝硬化和肝炎的診斷按照中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)、肝病學(xué)分會(huì)(2000)聯(lián)合修訂的《病毒性肝炎防治方案》進(jìn)行[9]。

1.2 主要試劑和儀器

耦聯(lián)有小扁豆凝集素微球的AFP-L3親和吸附離心管(南京英科新創(chuàng)),GP73蛋白酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒(上海泛柯生物)。美國(guó) BioTek公司ELX800酶標(biāo)儀和 Bio-Rad 1575洗板機(jī),美國(guó)雅培I2000全自動(dòng)免疫分析儀及配套試劑。

1.3 檢測(cè)方法

AFP-L3測(cè)定:按照甲胎蛋白異質(zhì)體親和吸附離心管說(shuō)明書(shū)洗脫AFP-L3,洗脫液與原血清標(biāo)本共同上機(jī)(雅培I2000全自動(dòng)免疫分析儀)定量檢測(cè)AFPL3和AFP,計(jì)算AFP-L3占總AFP的比例(%)。以AFP-L3(%)＞15%作為AFP-L3比值異常升高的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)。

GP73測(cè)定:采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定GP73蛋白含量(ng/ml),嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。GP73含量＞100 ng/ml為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

各組數(shù)據(jù)均以平均數(shù)(ˉx)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示。用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件,對(duì)各組的腫瘤標(biāo)志物濃度和陽(yáng)性率進(jìn)行F檢驗(yàn)或 χ2檢驗(yàn);用受試者工作特征曲線(ROC曲線)自動(dòng)分析AFP-L3和GP73血清檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌診斷的敏感性、特異性、曲線下面積等指標(biāo)。

2 結(jié)果

2.1 各組血清AFP-L3和GP73含量比較

本研究中各組血清AFP-L3和GP73含量檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。AFP-L3比值(%)在肝癌組為15.60±5.28,顯著高于肝硬化組(7.86±2.33)、肝炎組(7.27±2.43)和健康組(6.42±1.56);而在肝硬化組、肝炎組和健康組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異(P＞0.05)。血清GP73含量(ng/ml)變化范圍為38.06±7.03(健康組)-129.16±28.68(肝癌組),統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異顯著(P＜0.05)。肝硬化組和肝炎組GP73含量分別為87.27±16.44和76.44±18.19,顯著低于肝癌組(P＜0.05),顯著高于健康組(P＜0.05),但肝硬化組與肝炎組間差異不顯著。

表1 各組血清AFP-L3和 GP73檢測(cè)結(jié)果(±s)

表1 各組血清AFP-L3和 GP73檢測(cè)結(jié)果(±s)

注:右上標(biāo)中有相同字母的為均值差異不顯著(P＞0.05)。

組別 n AFP-L3(%) GP73(ng/ml)肝癌組 45 15.60±5.28a 129.16±28.68a肝硬化組 35 7.86±2.33b 87.27±16.44b肝炎組 36 7.27±2.43b 76.44±18.19b健康組 40 6.42±1.56b 38.06±7.03c F檢驗(yàn) F=68.84 P＜0.05 F=133.40 P＜0.05

2.2 各組血清AFP-L3和GP73檢測(cè)陽(yáng)性率分布

各組血清AFP-L3和GP73檢測(cè)陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。AFP-L3比值陽(yáng)性率在不同組間存在顯著差異(P＜0.05),肝癌組(82.22%)顯著高于其它組;健康組中沒(méi)檢測(cè)到AFP-L3比值陽(yáng)性個(gè)體;肝硬化組和肝炎組的AFP-L3比值陽(yáng)性率分別為17.14%和16.67%,與肝癌組和健康組差異顯著(P＜0.05)。45例肝癌組中,GP73陽(yáng)性率為86.67%,顯著高于其它組(P＜0.05);健康組中也沒(méi)檢測(cè)到GP73陽(yáng)性個(gè)體。肝硬化組和肝炎組的GP73陽(yáng)性率分別為14.29%和11.11%。在45例肝癌患者中,AFP-L3和GP73均為陰性的有5例,即當(dāng)AFP-L3與GP73聯(lián)合檢測(cè)原發(fā)性肝癌時(shí),陽(yáng)性率達(dá)到88.89%,但與單項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果比較差異不顯著(P＞0.05)。

表2 各組血清AFP-L3和 GP73檢測(cè)陽(yáng)性率

2.3 ROC曲線分析

以各組血清AFP-L3(%)和GP73檢測(cè)結(jié)果繪制受試者工作特征曲線(Receiver operating characteristic curve,ROC),見(jiàn)圖1。AFP-L3(%)診斷原發(fā)性肝癌的ROC曲線下面積為0.933(95%的置信區(qū)間為:0.884-0.981);GP73診斷原發(fā)性肝癌的ROC曲線下面積為0.936(95%的置信區(qū)間為:0.896-0.975)。AFPL3診斷原發(fā)性肝癌的最佳臨界值為10.32(%),其對(duì)應(yīng)的敏感度性0.82,特異性為0.93,Youden指數(shù)0.75。GP73診斷原發(fā)性肝癌的最佳臨界值112.13,其對(duì)應(yīng)的敏感性為0.76,特異性為0.96,Youden指數(shù)0.72。

圖1 AFP-L3與GP73診斷原發(fā)性肝癌的ROC曲線

3 討論

已有的研究表明,單純使用AFP監(jiān)測(cè)原發(fā)性肝癌的發(fā)生、發(fā)展已經(jīng)不能滿足臨床需要,很容易造成誤診,因此開(kāi)發(fā)新的可靠分子標(biāo)志物具有重要臨床意義。AFP可分為小扁豆凝集素(LCA)非結(jié)合型(AFP-L1、AFP-L2)、LCA 結(jié)合型(AFP-L3),其中 AFPL1主要存在于良性肝病中,AFP-L2來(lái)自孕婦,AFPL3為肝癌細(xì)胞所特有;因此AFP-L3被廣泛作為原發(fā)性肝癌的分子標(biāo)志物[6,10]。賈志凌等(2010)研究發(fā)現(xiàn),AFP-L3的診斷靈敏度是75.00%,特異度達(dá)到91.67%[11]。本研究在不同組中也發(fā)現(xiàn),肝癌組的平均AFP-L3比值(%)與陽(yáng)性率均顯著高于其它各組(P＜0.05),支持可以作為原發(fā)性肝癌臨床檢測(cè)的有效分子標(biāo)志物。ROC曲線分析,AFP-L3診斷原發(fā)性肝癌的最佳臨界值為10.32(%),與目前采用的＜10.0的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)相一致。

朱國(guó)民等(2010)應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫定量測(cè)定方法檢測(cè)肝癌、慢性肝炎血清中GP73的含量,結(jié)果發(fā)現(xiàn)GP73可以作為惡性肝病的獨(dú)立指標(biāo)與AFP互補(bǔ)應(yīng)用于臨床[12]。機(jī)體正常情況下,GP73是高爾基體順面膜囊上的一種整合膜蛋白,疾病狀態(tài)時(shí)候GP73可從游離于胞內(nèi)體以及細(xì)胞表面,其作為肝癌標(biāo)志物的分子機(jī)制由 Bachert等(2007)報(bào)道[13]。本研究發(fā)現(xiàn),與AFP-L3相比,原發(fā)性肝癌組中具有更高的GP73陽(yáng)性率,而肝硬化組和肝炎組GP73的陽(yáng)性率則低于AFP-L3。因此,血清中GP73含量可能是比AFP-L3更好的一個(gè)分子標(biāo)志物,用于原發(fā)性肝癌的臨床診斷。多個(gè)腫瘤分子標(biāo)志同時(shí)檢測(cè)被認(rèn)為可以提高臨床檢測(cè)的敏感度?？紫閬兊?2011)發(fā)現(xiàn),將血清中GP73和AFP-L3濃度兩個(gè)指標(biāo)結(jié)合在一起對(duì)原發(fā)性肝癌進(jìn)行臨床診斷,具有更高的靈敏度,可提高原發(fā)性肝癌的診斷率[7]。然而,本研究的結(jié)果發(fā)現(xiàn),當(dāng)AFP-L3與GP73聯(lián)合檢測(cè)原發(fā)性肝癌時(shí),陽(yáng)性率可達(dá)到88.89%,高于單獨(dú)使用AFP-L3和GP73檢測(cè)結(jié)果,但統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異不顯著(P＞0.05)。

本研究通過(guò)檢測(cè)血清中AFP-L3和GP73濃度,探討了它們作為原發(fā)性肝癌臨床診斷分子標(biāo)志物的可靠性,結(jié)果支持它們都具有較好的診斷效果,單獨(dú)使用和二者聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率沒(méi)有顯著差異。本研究結(jié)果有助于提高原發(fā)性肝癌的診斷率,及早采取有效治療措施改善患者預(yù)后。

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