陳學軍 劉孝武 王 英

血液涂片細胞形態(tài)學檢查是血常規(guī)檢驗的主要內(nèi)容，是檢驗學科最基本的技能，也是臨床實驗室診斷最簡便、最快捷、最特異和最經(jīng)濟實用的常規(guī)檢驗方法[1]。近年來的實踐證明血細胞分析儀容易引起臨床上漏診和誤診，并且這一問題已經(jīng)引起專家的關(guān)注，應重視血涂片細胞形態(tài)學檢查[2]。傳統(tǒng)制作血液涂片技術(shù)，絕大多數(shù)醫(yī)院用載物片作推片，涂片角度在30o～45o之間不固定，做出的血液涂片大小不等、厚薄不均、長短不齊、細胞分布不均，無法進行質(zhì)量控制，給疾病的診斷帶來了很多困難[3]。針對這一情況，經(jīng)過反復制片研究，從13o～30o固定角度推片中篩出17o或18o推片，用血量固定在5 uL制作血液涂片，排除了一些影響因素，該涂片符合標準血液涂片(厚薄適宜，頭、體、尾顯明，細胞分布均勻，血膜邊緣整齊，兩邊和兩端空隙各0.3 cm和1.5 cm，血膜長約4 cm)的要求。

1 材料與方法

1.1 材料

正常人EDTA抗凝靜脈全血、2 cm厚的有機玻璃片、載物玻片。

1.2 方法

用有機玻璃扳分別切割和磨制成一銳角10o～30o直角三角形各兩個，去除推片兩角各0.3 cm，裝制推片21個。

取正常人EDTA抗凝靜脈全血5 uL，加之于清潔干燥的載玻片離右側(cè)1.5 cm中間處，左手持載玻片的兩端，迅速用右手拿一固定角度推片的一端放于血滴前方，輕輕向后移動接觸血滴，使血滴沿推片與載物片均勻散開成一直線，保持一定角度由前向后平穩(wěn)推進，即制備出血液涂片。用13o～30o固定角度的推片各制作出50張血液涂片，比較血膜的厚薄、形態(tài)及細胞分布情況(見表1)。

選擇17o固定角度推片和傳統(tǒng)推片各制作血液涂片各50張，經(jīng)瑞氏染色后用顯微鏡進行白細胞分類(見表2)。

2 結(jié)果

用13o～30o不同固定角度的推片，血量固定在5 uL，各制備50張血液涂片，經(jīng)比對，17o或18o固定推片所制備血液涂片，血膜長度x和s為4.081，3.987；0.015，0.0103；細胞分布均勻區(qū)x和s為3.033，2.971；0.015，0.0101，100%符合標準血液涂片要求。

選擇17o固定角度推片和傳統(tǒng)推片各制作血液涂片各50張，經(jīng)瑞氏染色后用顯微鏡進行白細胞分類比較，中性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞P＜0.001，有顯著性差異，嗜酸性粒細胞P＞0.05，無顯著性差異。

17o或18o固定推片所制備血液涂片與傳統(tǒng)法制備的血液涂片相比，制片質(zhì)量明顯提高，100%符合標準血液涂片要求，它在細胞形態(tài)檢查中能有效進行質(zhì)量控制，加大了對疾病診斷的準確率。

表1 10 o～30 o角度推片制作50張血涂片血膜長度(cm)比較表

表2 17 o固定角度推片和傳統(tǒng)推片各50張瑞氏染色后用顯微鏡分類比較

3 討論

傳統(tǒng)制作血液涂片不能有效控制推片角度及血量，做出的血液涂片大小不等、厚薄不均、長短不齊、細胞分布不均，僅有20%～30%符合標準血液涂片，無法進行質(zhì)量控制，給疾病的診斷帶來了很多困難。為此我們進行反復制片研究，改進傳統(tǒng)血液涂片制片技術(shù)，使其統(tǒng)一標準化。1986年張紹林主編的全國中等衛(wèi)生學校教材《臨床檢驗》關(guān)于血液涂片制作中提出：一張良好的血片，厚薄適宜，頭體尾顯明，細胞分布均勻，兩邊和兩端留有空隙各0.3 cm和1.5 cm，血膜長約4 cm，血膜邊緣整齊[4]。我們用17o或18o固定角度推片，血量固定在5 uL所制備血液涂片符合良好的血片要求。良好標準的血涂片厚薄適宜，頭體分明，細胞分布均勻，血膜邊緣整齊，能更好地反映血液中細胞的分布情況，較普通血涂片有不可比擬的優(yōu)勢[5]。

固定角度17o或18o的推片制作出的血液涂片，血膜長度x和s為4.081，3.987；0.015，0.0103。用17o固定角度推片和傳統(tǒng)的推片比較：中性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞P＜0.001有顯著性差別；在制作推片時己經(jīng)去除推片的兩角各0.3 cm，在涂片時自然留有0.3 cm邊緣，因此，17o或18o固定角度的推片，血量固定在5 μL，制作出的血液涂片100%符合標準血涂片要求。該制片法改變了傳統(tǒng)制備血液涂片30o～45o的錯誤概念，同時通過制作血涂片的推片，使新老檢驗人員均可制備標準化的血液涂片，大大提高了制片質(zhì)量，也提高了對細胞分類的準確性，降低了誤差，加大了對疾病診斷的準確率。

目前，各地普遍采用自動化血液分析儀，大大提高了工作效率，但各類儀器仍有不足，不能對單個細胞完全識別，必要時仍需顯微鏡涂片檢查復檢[6]。因此，任何先進的血液分析儀，都無法完全準確地識別血液中所有細胞，尤其是異常細胞，要解決這一問題，必須依靠血細胞涂片形態(tài)學檢查[7]。自動分析技術(shù)是目前血細胞常規(guī)檢查的主要手段，有很多研究結(jié)果顯示，常規(guī)的血細胞分析，自動檢測技術(shù)不能完全取代手工血涂片鏡檢分析[8]。血涂片細胞形態(tài)學檢查是觀察血液病的一個及其重要、無法替代、必不可少的檢查手段，沒有血涂片細胞形態(tài)學的檢查，很多血液系統(tǒng)的疾病難以確診[9]。血液涂片顯微鏡檢查是白細胞分類的金標準，血細胞分析儀白細胞分類結(jié)果僅供參考[10]。

血液涂片檢查是細胞形態(tài)學檢查的基礎，在疾病的診斷中發(fā)揮著不可替代的作用，有著極其重要的臨床意義，而標準統(tǒng)一的血液涂片能夠給臨床應用帶來廣闊前景。

[1]李順義.血細胞形態(tài)學漏診分析與對策[J].中華檢驗醫(yī)學雜志，2005，28(2)：140-141.

[2]盧興國，叢玉隆.應重視和提升傳統(tǒng)血液形態(tài)學檢驗診斷水平[J].中華檢驗醫(yī)學雜志，2006，29(6)：481-482.

[3]劉孝武，趙會芹，賀信祥，等.制作標準化血液涂片建議與研究[J].中國血液流變學雜志，2007，17(1)：130-131.

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[5]劉孝武，陳學軍，王英.血液分析儀異常細胞報警與標準血涂片檢驗結(jié)果分析[J].中國健康月刊，2011，30(6)：16-17.

[6]叢玉隆，王淑娟.今日臨床檢驗[M].北京：中國科學技術(shù)出版社，1998：14-15.

[7]朱忠勇.使用血液分析儀后復檢標準的商榷[C].全國血液體液學質(zhì)量保證學術(shù)會議專題報告資料，2005：40.

[8]中華醫(yī)學會檢驗分會全國血液學復檢專家小組，中華檢驗醫(yī)學雜志編輯委員會.全國血液學復檢專家小組工作會議紀要暨血細胞自動計數(shù)復檢標準釋義[J].中華檢驗醫(yī)學雜志，2007，30(4)：380-382.

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