方 燦

貴州省藥檢所，貴州 貴陽 550004

泌淋膠囊收載于國家藥品標(biāo)準(zhǔn)［1］，具有清熱解毒，利濕通淋之功效，臨床上用于泌尿系感染等疾病的治療。全方由頭花蓼、車前草、酢漿草、石椒草四味藥組成，標(biāo)準(zhǔn)中該制劑項下僅有TLC鑒別，無含量測定項。方中頭花蓼為主藥，其主要活性成分為沒食子酸［2］［3］。目前，文獻(xiàn)報道的沒食了酸定量分析方法多采用高效液相色譜法［4～7］測定。以沒食子酸作為質(zhì)量控制的指標(biāo)，建立高效液相色譜法測定泌淋膠囊中沒食子酸含量測定方法，則可以建立較為有效可靠的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對于生產(chǎn)和使用中的質(zhì)量檢驗和控制，都有較大的意義。本法操作簡便，精密度高，分離良好。

1 儀器、試藥及試劑

LC-10Avp高效液相色譜儀及其色譜數(shù)據(jù)工作站;METTLER TOLEDO電子天平;CHXIN-CH-300型超聲震蕩儀。沒食子酸對照品 (批號110831-200302，中國生物制品藥品檢定所);泌淋膠囊 (10批)、泌淋膠囊陰性樣品(缺頭花蓼)(均由貴州百祥制藥有限責(zé)任公司提供);甲醇、乙腈 (色譜純);磷酸 (分析純);水 (重蒸水)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗Diamonsil C18色譜柱(5μm，150×4.6mm，迪馬公司生產(chǎn))，流動相：甲醇 -0.4%磷酸溶液 (1：99)，檢測波長：272nm，流速：1.0ml/min。在上述色譜條件下，沒食子酸峰與其他相鄰蜂基線分離，其分離度符合要求。見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatogram

2.2 線性關(guān)系考察 精密稱取沒食子酸對照品0.01290g， 置100ml量瓶中，加甲醇溶解至刻度，作為對照品溶液(0.1290mg/ml)。精取上述對照品溶液分別用甲醇稀釋制成0.01290、0.02580、0.05160、0.07740、0.1290mg/ml的對照品溶液。分別各吸取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以進(jìn)樣量 (mg/ml)為橫坐標(biāo)，峰面積 (A)為縱坐標(biāo)。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：Y=24352727.41X+15348.36，r=0.9999。沒食子酸在 0.1290 ～ 1.290μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3 精密度實驗 取對照品溶液 (51.60μg/ml) 重復(fù)進(jìn)樣6次，RSD為0.75%，表明精密度良好。

2.4 重復(fù)性考察 取供試品0.1g，6份，精密稱定，照含量測定項下的方法測定，含量分別為 13.76、13.51、13.73、13.51、13.76mg/g，平均含量為 13.66mg/g，RSD為 0.88%。

2.5 穩(wěn)定性考察 取供試品溶液，分別于0、1、2、4、8、12小時進(jìn)樣，測定峰面積，RSD為0.43%，供試品溶液在12小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 加樣回收試驗 取已測定含量供試品0.05g各6份，精密稱定，置25ml量瓶中，分別精密加入對照品溶液(0.1290mg/ml)5ml，照含量測定項下的方法操作及測定，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗 (n=6)Tab1 Results of determination of average recovery(n=6)

表2 供試品含量測定.結(jié)果 (n=3)Tab2 Results of samples determination(n=3)

2.7 供試品含量測定對照品溶液的制備 取沒食子酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml中含50μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備 取本品0.1g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理1小時，放冷，加甲醇至刻度。搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

測定法 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算樣品中沒食了酸的含量，見表2。

3 討論

3.1 頭花蓼為泌淋膠囊的君藥，沒食子酸為頭花蓼的主要活性成分之一［2～3］，為提高藥品質(zhì)量，確保療效，我們對泌淋膠囊中沒食子酸含量測定方法進(jìn)行了研究。

3.2 沒食子酸的含量測定方法目前主要是高效液相色譜法，根據(jù)文獻(xiàn)［4～7］報道的主要方法，選擇乙腈-0.4%磷酸溶液、甲醇-0.025mol/L磷酸溶液、甲醇-水-N，N二甲基甲酰胺-冰乙酸等系列流動相分別測定供試品溶液，沒食子酸峰與其他相鄰蜂分離均不理想，不適合于泌淋膠囊中沒食子酸的測定。經(jīng)多次實驗研究，我們選擇甲醇-0.4%磷酸溶液 (1：99)作為流動相，沒食子酸與其它組分色譜峰分離良好。

3.3 泌淋膠囊由頭花寥等4味中藥組成，成分較復(fù)雜，根據(jù)沒食子酸的理化性質(zhì)［8］和文獻(xiàn)［4～7］方法，曾用甲醇、50%甲醇、甲醇-25%鹽酸 (4：1)等溶劑進(jìn)行超聲及回流提取沒食子酸實驗。結(jié)果表明，本文選擇75%甲醇超聲提取1小時的方法可行，所得供試品溶液其它雜質(zhì)峰較少。同時對泌淋膠囊陰性樣品溶液 (缺頭花蓼)測定，結(jié)果表明其他成分不干擾測定。

通過實驗研究，本文建立了泌淋膠囊中沒食子酸含量的HPLC測定法，方法簡便并具有良好的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性，有利于藥品的質(zhì)量控制。

［1］ 國家藥品標(biāo)準(zhǔn) (試行) ［S］：WS-10516(ZD-0516)-2002.

［2］全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編 (下冊) ［M］.北京人民出版社，1978，282～283.

［3］吳居，王德仁.石莽草化學(xué)成分的研究［J］.中草藥，1985，16(4).

［4］HPLC測定不同產(chǎn)地的頭花蓼中沒食子酸的含量［J］.華西藥學(xué)雜志，2007，22(2)：204～205.

［5］茅向軍，許乾麗，熊慧林，等.高效液相色譜法測定熱淋清膠囊中沒食子酸的含量［J］.中國中藥雜志，2002，27(8)：589～591.

［6］沙明，曹愛民，往冰，等.高效液相色譜法測定地膠囊榆中沒食子酸的含量［J］.中國中藥雜志，1999，24(2)：99～100.

［7］ 健民咽喉片.中國藥典一部［S］.2005：565.

［8］國家醫(yī)藥局中草藥情報中心站.植物藥有效成分分冊［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1986，479.