劉兆龍 聶繼紅 張艷君

1.新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部，新疆 烏魯木齊 830000;

2.新疆自治區(qū)人民醫(yī)院科研教育中心，新疆 烏魯木齊 830000

芪紅膠囊水提工藝研究

劉兆龍1聶繼紅1張艷君2

1.新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部，新疆 烏魯木齊 830000;

2.新疆自治區(qū)人民醫(yī)院科研教育中心，新疆 烏魯木齊 830000

目的:優(yōu)選芪紅膠囊水提工藝。方法:以丹酚酸B提取量和浸膏得率為指標，采用L9(34)正交設(shè)計試驗，對提取時間、提取次數(shù)、加水倍量等因素進行考察，以確定最優(yōu)提取工藝。結(jié)果:最優(yōu)工藝為用12倍量水，回流提取2次，每次1h。結(jié)論:優(yōu)選得到的芪紅膠囊水提工藝穩(wěn)定、可行。

芪紅膠囊;水提工藝;正交試驗;高效液相色譜法

芪紅膠囊為新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院心內(nèi)一科主任王曉峰主任醫(yī)師的臨床經(jīng)驗方，由紅景天、丹參、黃芪、紅花等七味藥組成，處方中黃芪具有補氣升陽、益衛(wèi)固表、利水消腫、托瘡生肌等作用，尤以補中益氣、升舉清陽為主要功效，是補氣之要藥［1］。紅花味辛，微苦，性溫，歸心，肝經(jīng)，是活血通絡(luò)，去瘀止痛之良藥，為傳統(tǒng)而又珍貴的中藥［2］。丹參具有活血化瘀、養(yǎng)血安神、涼血消痛的功效。在治療方面，如冠心病、心肌梗塞、缺血性中風(fēng)等疾病方面有比較明顯的療效［3］。本實驗是對該方中丹參、紅花、黃芪用水提取，采用單因素及正交試驗設(shè)計優(yōu)選其水提工藝。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters 2695高效液相色譜儀 (美國 Waters公司);AL204電子天平 ［梅特勒 －托利多儀器 (上海)有限公司］;AG135電子天平 ［梅特勒－托利多儀器 (上海)有限公司］;SK3300LH超聲清洗器 (上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司);Direct－QTM5超純水儀 (Millipore Corporation，Bedford，MA，U.S.A.)。

1.2 試藥

丹酚酸B對照品 (中國藥品生物制品檢定所，批號111562－200302);甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，試驗中其它試劑均為分析純。紅花、黃芪、丹參等藥材由新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院提供，經(jīng)檢驗均符合中國藥典2010年版一部項下規(guī)定。

2 方法與結(jié)果

根據(jù)試驗設(shè)計，紅花、黃芪、桂枝采用水提法進行提取。在工藝研究中，擬采用HPLC法測定水提液中丹酚酸B的含量，以丹酚酸B提取量及水提浸膏得率為指標，進行綜合評價，利用單因素及正交實驗對以上三味藥材進行水提工藝篩選，采用綜合評分優(yōu)選水提工藝組合，其中丹酚酸B提取量及水提浸膏得率的權(quán)重系數(shù)分別為0.8、0.2。

綜合評分=(各樣品中丹酚酸B提取量∕該組中丹酚酸B最大提取量) ×0.8×100+(該組中最小浸膏得率∕各樣品浸膏得率) ×0.20×100

2.1 水提液中丹酚酸B的含量測定

2.1.1 色譜條件:

色譜柱:VP－ODS柱 (4.6mm×150mm，5μm);流動相:甲醇－乙腈 －2%甲酸 (24∶9∶67)，檢測波長為286nm，柱溫35℃，流速1ml/min。

2.1.2 供試品溶液的制備及測定

按處方量稱取各味藥材分別粉碎至過1號篩，加水回流提取一定時間，濾過，定容。樣品溶液經(jīng)微孔濾膜(0.45μm)過濾后，取5μL注入高效液相色譜儀測定，供試品溶液高效液相色譜圖，見圖1。

2.1.3 對照品儲備液的制備

精密稱取丹酚酸B對照品適量，置于25ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度線，搖勻得到對照品儲備液 (濃度為0.139mg/ml)。

2.1.4 標準曲線的繪制

分別吸取該對照品儲備液 1ml、2ml、3ml、4ml置于5ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，取10μl進樣，測定。以峰面積積分值 (Y)為縱坐標，對照品濃度 (X)為橫坐標進行回歸，得回歸方程為:Y=12035181X－44053;相關(guān)系數(shù)r=0.9999。結(jié)果顯示在0.0277mg/ml～0.139mg/ml范圍內(nèi)，丹酚酸B峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。對照品溶液高效液相色譜圖見圖2。

2.1.5 精密度試驗

取同一對照品溶液在同一天內(nèi)重復(fù)進樣6次，并連續(xù)測定5d，計算日內(nèi)及日間精密度，結(jié)果分別為日內(nèi)精密度RSD=0.9156%;日間精密度RSD=0.5023%。表明本方法精密度良好。

2.1.6 加樣回收率試驗

按處方量稱取各味藥材分別粉碎至過1號篩，加入適量的丹酚酸B對照品溶液，制備相應(yīng)的樣品共6份，按2.1.1項下色譜條件進行含量測定，結(jié)果平均加樣回收率為99.76%，RSD為1.43%(n=6)。

2.1.7 陰性對照試驗

精密稱取芪紅膠囊處方中醇提部分除丹參以外的藥材，按照相應(yīng)方法制備缺丹參的陰性對照溶液。用高效液相色譜法測定，進樣量5μl。結(jié)果表明，芪紅膠囊處方中水提部分中其余藥材對丹酚酸B的含量測定沒有干擾。陰性對照溶液見圖3。

2.2 提取工藝篩選［4］

根據(jù)單因素試驗結(jié)果，以丹酚酸B提取量及水提液的浸膏得率為考察指標，加水倍數(shù)分別為10、12、14倍;提取時間分別為0.5、1.0、1.5h;提取次數(shù)為1、2、3次。因此確定因素水平見表1。

表1 正交實驗設(shè)計因素水平表

以丹酚酸B提取量及浸膏得率為指標，采用綜合評分的方法，權(quán)重系數(shù)為丹酚酸B提取量為80，浸膏得率為20，滿分為100。進行正交試驗，結(jié)果見表2。

表2 L9(34)正交試驗設(shè)計表

NO A B C D丹酚酸B提取量(mg/g)浸膏得率(%)綜合評分7 3 1 3 2 26.55 32.53 92.04 8 3 2 1 3 25.36 23.68 93.08 9 3 3 2 1 25.45 22.69 94.09 K1 272.65 277.05 276.58 278.10 K2 283.03 279.27 281.28 277.72 K3 279.21 278.57 277.03 279.07 R 10.38 2.22 4.70 1.35

對正交試驗結(jié)果進行方差分析，分析結(jié)果見表3。

表3 方差分析

由表2極差分析結(jié)果可知，對提取影響大小順序為A＞C＞B，最佳提取工藝為A2C2B2。表3方差分析結(jié)果表明，加水倍數(shù)對提取效果有顯著性影響 (P=0.0173)。結(jié)合工業(yè)大生產(chǎn)，確定最優(yōu)工藝確定為A2C2B2，即12倍量水，回流提取2次，每次1h。

2.3 驗證實驗

取一定處方量藥材，按正交試驗篩選出的提取條件A2B2C2進行驗證，結(jié)果見表4。

表4 驗證實驗結(jié)果

3 討論

在確定供試品溶液的HPLC色譜條件時，首先采用了藥典方法［5］，結(jié)果樣品峰與雜質(zhì)峰未能有效分離。在查閱大量資料后反復(fù)試驗，當流動相改為甲醇－乙腈－2%甲酸(24∶9∶67)時，丹酚酸B峰與其他組分色譜峰能較好地分離，并且峰形較好，基線平穩(wěn)。

本試驗采用單因素試驗及正交設(shè)計試驗，最終確定12倍量水，回流提取2次，每次1h的方法為最優(yōu)工藝。優(yōu)選得到的芪紅膠囊水提工藝簡易、穩(wěn)定、可行，為工業(yè)化生產(chǎn)提供了一定的依據(jù)。

［1］周慧生.黃芪的臨床應(yīng)用［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2007，5:37－38.

［2］楊曉君.吳桂榮.紅花的現(xiàn)代研究 ［J］.農(nóng)墾醫(yī)學(xué)，2004，26(4):301－304.

［3］陳冠軍.張瑞紅，王莉.淺析丹參的藥理作用［J］.中外醫(yī)療，2010，23:125.

［4］ 張榮泉.丹參水溶性出發(fā)提取工藝研究 ［J］.中藥材，2001，24(11):818.

［5］ 中國藥典 (一部) ［S］.2005:71.

The study of extraction process by water on qi hong capsule

Liu Zhao－long1，Nie Ji－h(huán)ong1，Zhang Yan－jun2

1.Pharmaceutical preparation section of Traditional Medical Hospital，Urumqi 830000，China

Objective:To optimize the extraction process by water of qi hong Capsule.Methods:We use the extraction content of salvianolic acid B and extractum yield as the index and orthogonal test design to choose the best extraction process.The optimum extraction condition consists of the extraction time，the time of extraction and the volume of water.Results:The best extraction process was 12 times the volume of water，extracted 2 times，1 hour each time.Conclusion:The optimized process is feasible and stabilization for extraction of qi hong Capsule.

qi hong Capsule;extraction process by water;orthogonal test design;HPLC

R284.2

A

1007－8517(2011)20－0028－03

2011.09.12)