胡行前,周 雄,竇慧強(qiáng),張科明,王 彤

(江蘇省無(wú)錫市人民醫(yī)院腔鏡外科,江蘇無(wú)錫,214000)

肝癌是我國(guó)常見(jiàn)惡性腫瘤之一,死亡率高。早期診斷、早期治療、根據(jù)不同病情進(jìn)行綜合治療是提高療效的關(guān)鍵,但總體療效不甚理想,治療失敗和死亡的主要原因是肝癌細(xì)胞具有轉(zhuǎn)移的特性。其中survivin、cappase-3、NF-kB等參與了肝癌發(fā)生、發(fā)展的調(diào)控[1]。最近研究發(fā)現(xiàn)[2],細(xì)胞外基質(zhì)蛋白聚糖(Versican)參與細(xì)胞黏附、遷移、細(xì)胞通訊、增殖、血管生成等多種功能,在腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移機(jī)制中起到關(guān)鍵作用。本研究通過(guò)免疫組化方法對(duì)肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)及其癌旁組織測(cè)定Versican的表達(dá)水平,證實(shí)其在腫瘤中的高表達(dá)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取本院2008年～2010年臨床與病理資料完整的HCC患者標(biāo)本40例(男30例,女10例;年齡41～67歲,平均59.4歲),另取相應(yīng)癌旁0.5～1.0 cm內(nèi)肝組織和肝血管瘤旁正常肝臟組織(9例)作為對(duì)照。所有標(biāo)本均經(jīng)過(guò)40 g/L甲醛固定,石蠟包埋,5 μ m 厚連續(xù)切片。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

試劑均購(gòu)自上海索萊寶生物科技有限公司。采用免疫組織化學(xué)染色法(SP法),分別檢測(cè)3組標(biāo)本中Versican的表達(dá)情況,實(shí)驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作。用已知陽(yáng)性組織切片作陽(yáng)性對(duì)照,每一個(gè)指標(biāo)以PBS液代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 免疫組化結(jié)果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

使用Leica Qwin病理圖像分析系統(tǒng),采用雙盲法閱片。

Versican指標(biāo)以細(xì)胞內(nèi)特定部位出現(xiàn)黃色顆粒,染色強(qiáng)度高于背景的非特異性染色判定為陽(yáng)性細(xì)胞。陽(yáng)性結(jié)果參照文獻(xiàn)進(jìn)行腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性記分。選擇10個(gè)高倍視野(×400)進(jìn)行計(jì)數(shù)。根據(jù)染色程度和染色細(xì)胞百分率進(jìn)行綜合評(píng)分,染色程度按癌細(xì)胞著色的深淺記分為:基本不著色為0分,呈淺黃色1分,呈棕黃色為2分,呈棕褐色為3分;染色細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞百分率≤5%為0分,6%～25%為1分,26%～50%為2分,≥51%為3分。將每張切片平均染色程度得分與平均染色細(xì)胞百分率得分各自相乘,得出該例標(biāo)本的免疫組化的陽(yáng)性分度:0～1分為陰性(-),2～3為(+),4～6分為( ),6分以上( )。

2 結(jié) 果

Versican陽(yáng)性率肝癌組織明顯高于癌旁組織(χ2=5.20,P<0.05)及肝正常組織(χ2=17.71,P<0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;癌旁組織高于肝正常組織(χ2=6.06,P<0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。

表1 Versican在肝癌組織、癌旁組織、肝正常組織中的表達(dá)

3 討 論

Versican[3-4]是一種分子量很大的硫酸軟骨素蛋白聚糖,由一個(gè)氨基端的G1亞基、一個(gè)羧基端的G3亞基和二者之間的GAG鏈結(jié)合區(qū)域所組成。G1區(qū)包含一個(gè)類(lèi)免疫球蛋白基元、兩個(gè)蛋白聚糖串聯(lián)重復(fù)序列,又稱(chēng)透明質(zhì)酸結(jié)合重復(fù)序列(HABR)。G3區(qū)則由兩個(gè)類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子重復(fù)序列、一個(gè)碳水化合物識(shí)別區(qū)域又稱(chēng)為類(lèi)凝集素基元(CRD)及一個(gè)互補(bǔ)結(jié)合蛋白基元(CBP)所組成。GAG側(cè)鏈在不同的組織和分子中都有所不同,根據(jù)GAG鏈結(jié)合區(qū)的不同可分為4個(gè)亞型V0、V1、V2和V3。Versican的不同亞型以及能與多種細(xì)胞因子結(jié)合決定了其功能多樣性。

研究發(fā)現(xiàn)[5],增強(qiáng)的Versican表達(dá)已在多種不同的人類(lèi)腫瘤中檢測(cè)得到,包括乳房癌、前列腺癌、腦瘤、胃癌、腸癌和皮膚癌。多功能蛋白聚糖可與成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子等多種因子結(jié)合在細(xì)胞黏附,遷移,增殖和分化過(guò)程中都發(fā)揮作用[6-7]。

研究人員發(fā)現(xiàn)[8-9],Versican通過(guò)Toll樣受體TLR2和TLR6刺激宿主免疫系統(tǒng)中的炎性反應(yīng)細(xì)胞,產(chǎn)生白介素-6和炎性蛋白 TNF-a,TNF-a能增強(qiáng)轉(zhuǎn)移酶的功能,極大地促進(jìn)癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)。其中受體 TLR2和 TNF-a是Lewis肺癌(lewis lung carcinoma,LLC)轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素。Versican通過(guò)刺激炎癥細(xì)胞活性來(lái)促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。

本研究結(jié)果顯示:Versican在HCC組織中陽(yáng)性表達(dá)率72.5%,而在癌旁組織和肝正常組織的表達(dá)率分別為47.5%、22.2%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);在癌旁組織陽(yáng)性表達(dá)率高于肝正常組織(P<0.05)。我們觀(guān)察到Versican陽(yáng)性表達(dá)主要位于癌細(xì)胞的胞質(zhì)和核膜周?chē)?偶見(jiàn)核內(nèi)表達(dá)(圖1)。這表明HCC組織中Versican呈異常高表達(dá),并且接觸越接近腫瘤浸潤(rùn)區(qū)域,Versican表達(dá)越高。提示Versican在HCC的發(fā)生發(fā)展中可能有重要作用,是預(yù)后的不良因子。但Versican陽(yáng)性表達(dá)率是否與肝癌分化程度、有無(wú)門(mén)靜脈浸潤(rùn)、腫瘤病灶的單發(fā)與多發(fā)、腫瘤直徑等有關(guān)需進(jìn)一步研究。

由此可見(jiàn):①Versican在HCC中特異性高表達(dá),在癌旁組織和肝正常組織的弱表達(dá)或者不表達(dá),提示它參與了肝癌的發(fā)生與發(fā)展;②通過(guò)搶奪宿主免疫系統(tǒng)中的炎癥因子,Versican建立了一個(gè)炎癥環(huán)境,幫助癌癥轉(zhuǎn)移擴(kuò)散[10]。Verscican、TLR2的拮抗劑可以抑制腫瘤細(xì)胞的活性,因此可以通過(guò)改變腫瘤細(xì)胞的微環(huán)境,來(lái)抑制腫瘤的擴(kuò)散,為腫瘤的治療提供一個(gè)新思路。

[1] 秦 安,王 彤.生存素(survivin)在肝癌治療中的研究進(jìn)展[J].中華肝膽外科雜志,2009,15(12):951.

[2] Wang W,Xu G L,Jia W D,et al.Ligation of T LR2 by versican:a link between inflammation and metastasis[J].Arch Med Res,2009,40(4):321.

[3] Du W W,Yang B B,Shatseva T A,et al.Versican G3 promotes mouse mammary tumor cell growth,mig ration,and metastasis by influencing EGF receptor signaling[J].PLoS One,2010,5(11):e13828.

[4] Ju H,Lim B,Kim M,et al.Genetic variants A1826H and D2937Y in GAG-beta domain of versican influence susceptibility to intestinal-type gastric cancer[J].J Cancer Res Clin Oncol,2010,136(2):195.

[5] Cattaruzza S,Schiappacassi M,Kimata K,et a1.The globular domains of PG—M/versican modulate the proliferationapop-tosis equilibrium and invasive capabilities of tumor cells[J].FASEB J,2005,18(6):779.

[6] Kischel P,Waltregny D,Dumont B,et al.Versican overexpression in human breast cancer lesions:known and new isoforms for stromal tumor targeting[J].Int J Cancer,2010,126(3):640.

[7] Ricciardelli C,Sakko A J,Ween M P,et al.The biological role and regulation of versican levels in cancer[J].Cancer Metastasis Rev,2009,28(1-2):233.

[8] Kim S,Takahashi H,Lin WW,et al.Carcinoma-produced factors activate myeloid cells through T LR2 to stimulate metastasis[J].Nature,2009,457(7225):102.

[9] Domenzain-Reyna C,Hernández D,Miquel-Serra L,et al.Structure and regulation of the versican promoter:the versican promoter is regulated by AP-1 and TCF transcription factors in invasive human melanoma cells[J].J Biol Chem,2009,284(18):12306.

[10] Wang W,Xu G L,Jia W D,et al.Ligation of T LR2 by versican:a link between inflammation and metastasis[J].Arch M ed Res,2009,40(4):321.