王慧艷,虞 斌,張雅英,江 華,楊宇奇,李 莉,陳 麗,錢(qián)琴玉

(江蘇省常州市婦幼保健院,1.婦產(chǎn)科;2.實(shí)驗(yàn)室,江蘇常州,213003)

胎盤(pán)可分泌參與血管新生和滋養(yǎng)層細(xì)胞功能調(diào)節(jié)的多種血管生長(zhǎng)因子及其受體,其中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、胎盤(pán)生長(zhǎng)因子(PLGF)及其可溶性酪氨酸激酶受體(sFlt-1)在胎盤(pán)絨毛血管的生成和發(fā)育中具重要作用。近年來(lái)它們對(duì)子癇前期發(fā)病和預(yù)測(cè)中的作用引起了廣泛的重視[1]。循環(huán)中血管生長(zhǎng)因子的水平隨著胎盤(pán)絨毛血管的發(fā)育和子宮胎盤(pán)血流的改變而改變。本研究觀察正常孕婦隨著孕周改變尿PLGF的自身動(dòng)態(tài)變化,為研究病理妊娠如子癇前期的尿PLGF變化奠定基礎(chǔ)。

1 資料與方法

2008年9月～2010年9月在常州市婦幼保健院進(jìn)行正規(guī)產(chǎn)前檢查的孕婦中,征募自愿參加研究的單胎初產(chǎn)婦200名,簽署知情同意書(shū);于孕12周進(jìn)行定期產(chǎn)前檢查,一般觀察指標(biāo)包括年齡、孕次、產(chǎn)次、體重、身高 、血壓 、尿蛋白 、肝腎功能等常規(guī)產(chǎn)檢內(nèi)容,直至分娩后24h。同時(shí)收集這些孕婦在孕15～19周、孕 20～24周、孕 25～30周的隨機(jī)尿樣。在對(duì)這200名婦女尿樣研究中,有73例因尿樣不全或分娩信息丟失或出現(xiàn)妊娠合并癥、并發(fā)癥予剔除,其余127例均有3個(gè)尿樣且分娩信息完整,無(wú)妊娠合并癥和并發(fā)癥,她們的平均年齡(27.28±2.42)歲,平均分娩孕周(39.68±1.09)周,新生兒平均出生體重(3340.20±357.32)g。

自孕15周始,每隔4～5周,收集孕婦隨機(jī)尿10 mL,直至孕30周,標(biāo)本經(jīng)4℃低溫離心后將其上清液置-80℃冰箱凍存待測(cè)。

采用ELISA檢測(cè)尿液PLGF水平,試劑盒購(gòu)自無(wú)錫雷賽科技生物有限公司,操作均按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。所有標(biāo)本均行雙復(fù)孔檢測(cè)且為同批測(cè)定,均值為最終濃度,批內(nèi)變異<5%。用意大利ALISA全自動(dòng)酶免疫分析儀測(cè)定吸光度值D,波長(zhǎng)為450 nm。

2 結(jié) 果

中晚孕期尿PLGF水平呈峰形,孕15周水平較低,隨著孕周增加逐漸升高,孕23～24周達(dá)高峰(P<0.05)后逐漸下降(表1,圖1)。

表1 不同孕周尿PLGF的濃度

3 討 論

3.1 PLGF在胎盤(pán)形成和發(fā)育中的作用

PLGF最早于1991年由Maglione等[2]從人的胎盤(pán)cDNA文庫(kù)中分離純化而得。它是VEGF家族中的一員。胎盤(pán)的正常生長(zhǎng)需要滋養(yǎng)葉細(xì)胞的充分浸潤(rùn)和胎兒胎盤(pán)血管網(wǎng)絡(luò)的建立,所以胎盤(pán)組織所分泌的與血管新生和滋養(yǎng)葉細(xì)胞功能相關(guān)的生長(zhǎng)因子在胎盤(pán)形成和發(fā)育中起到重要作用。PLGF豐富表達(dá)于胎盤(pán),主要合成部位是滋養(yǎng)細(xì)胞,其特異性結(jié)合的受體位于血管內(nèi)皮細(xì)胞和滋養(yǎng)細(xì)胞,這些特點(diǎn)使PLGF成為對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞功能有關(guān)鍵的自分泌作用和對(duì)血管生長(zhǎng)有旁分泌作用的蛋白分子,從而引起人們的注意。正常妊娠胎盤(pán)形成早期,一方面滋養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)歷了從細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞增殖活性向絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)活性的轉(zhuǎn)化,進(jìn)而侵入母體螺旋小動(dòng)脈使之轉(zhuǎn)化為高流量、低阻力的子宮胎盤(pán)動(dòng)脈,即血管重鑄;另一方面,建立并維持有效的胎兒胎盤(pán)血管網(wǎng)絡(luò),這一過(guò)程包括血管新生,分枝及非分枝狀血管生成。因此滋養(yǎng)葉細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞在胎盤(pán)發(fā)育過(guò)程中存在著微妙的相互協(xié)調(diào)的關(guān)系,而這一關(guān)系的維持是局部生長(zhǎng)因子作用的結(jié)果。

3.2 正常妊娠時(shí)PLGF的分泌變化

連續(xù)測(cè)定血清血管生成因子的濃度在孕婦的常規(guī)產(chǎn)前檢查中是個(gè)挑戰(zhàn)。研究發(fā)現(xiàn)[3-4],PLGF和VEGF易于過(guò)濾至尿中,尿中PLGF完全來(lái)源于血循環(huán),但尿中VEGF主要來(lái)源于腎臟細(xì)胞本身(腎小球足突狀細(xì)胞和腎小管細(xì)胞,故檢測(cè)孕婦尿中PLGF水平是個(gè)可以替代抽血且侵入性更小的方法,易于為孕婦接受。參照 Levine等[5]在尿PLGF和子癇前期發(fā)生的危險(xiǎn)中的研究結(jié)果,尿PLGF值與肌酐矯正后濃度(pg/mg)變化是一致的,隨機(jī)尿和晨尿的改變是一致的,區(qū)別僅為晨尿與子癇前期發(fā)生的相關(guān)性更強(qiáng)些(OR值39.5 VS.13.5),故本研究采用隨機(jī)尿測(cè)定尿PLGF濃度,未用肌酐值矯正。研究結(jié)果表明,尿PLGF水平在中晚孕期呈峰形,這種波動(dòng)與胎盤(pán)的發(fā)育、血管重鑄、供氧變化及PLGF生理功能相關(guān)。孕早期胚胎生長(zhǎng)發(fā)育時(shí),母體血對(duì)絨毛供給極少,處于相對(duì)缺氧狀態(tài),此時(shí)PLGF水平較低[6];隨著胎盤(pán)的發(fā)育,在妊娠10～12周絨毛間血流建立,子宮動(dòng)脈血流阻力下降顯著,氧分壓上升,PLGF水平亦隨之上升;妊娠中期時(shí),胎盤(pán)血流豐富、供氧充足,從23周始,胎盤(pán)絨毛間質(zhì)細(xì)胞更多地向成熟中間型絨毛轉(zhuǎn)換,胎盤(pán)血管生成也由分支結(jié)構(gòu)向非分支結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變,以形成最有效的母胎彌散交換的結(jié)構(gòu)[7],而PLGF主要促進(jìn)非分支血管的生成,故PLGF水平在該階段達(dá)峰值;胎盤(pán)血管重鑄在孕28周后速度趨緩,子宮動(dòng)脈血流阻力下降幅度減小[8],從而下調(diào)PLGF的分泌,引起PLGF水平逐漸下降。

3.3 尿PLGF檢測(cè)的意義

胎盤(pán)的正常發(fā)育對(duì)正常妊娠的維持至關(guān)重要。循環(huán)中血管內(nèi)皮生成因子的失衡可導(dǎo)致病理妊娠如子癇前期、胎兒生長(zhǎng)受限的發(fā)生。這些循環(huán)中血管生成蛋白的異?，F(xiàn)象不僅出現(xiàn)在臨床子癇前期,而且在子癇前期出現(xiàn)臨床癥狀前數(shù)周就已存在。2004年Levine等[9]證實(shí)在子癇前期患者出現(xiàn)高血壓、蛋白尿的臨床表現(xiàn)前5周,胎盤(pán)分泌的內(nèi)源性sFlt-1水平急劇升高,同時(shí)伴有促血管生成因子PLGF和VEGF水平下降。此后Levine等研究發(fā)現(xiàn),子癇前期患者中,尿PLGF的改變?cè)诔霈F(xiàn)臨床癥狀前與血壓正常者相似,但在25～28周迅速下降,這種改變?cè)谠绨l(fā)型子癇前期和子癇前期并發(fā)小于孕齡兒中尤為明顯,認(rèn)為在中孕期下降的尿PLGF水平與隨后較早發(fā)生的子癇前期關(guān)系密切。

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