黃海東,李新娟,王立瑞,蔣更如,朱 淳

(上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院腎臟內(nèi)科,上海,200092)

IgA腎病(IgAN)是臨床最為常見的原發(fā)性腎小球疾病[1],病理上表現(xiàn)為免疫球蛋白A(IgA)為主的免疫球蛋白在腎小球系膜區(qū)的沉積,但其臨床表現(xiàn)多樣,預(yù)后相差懸殊,高血壓、大量蛋白尿、較重的病理損害是影響其預(yù)后的危險因子[2]。近年來,越來越多的研究表明遺傳因素在IgAN的發(fā)病機制中起重要作用。腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)可以調(diào)節(jié)機體的水、鈉平衡,在血壓調(diào)控、腎損傷及慢性腎功能不全進展中起重要作用。研究發(fā)現(xiàn)IgAN患者血管緊張素Ⅱ活性升高,應(yīng)用血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACEI)和血管緊張素受體抑制劑(ARB)治療可以減少蛋白尿,延緩腎功能進展,證實RAAS系統(tǒng)在IgAN中的作用。血管緊張素原(AGT)是RAAS的重要組成部分,AGT基因M235T的多態(tài)性影響RAAS的活性。本研究旨在對本院I-gAN患者的AGT M235T基因多態(tài)性進行分析,以探討該多態(tài)性與IgAN患者的臨床表現(xiàn)和病理特點的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2009年1月～2011年3月上海市新華醫(yī)院腎臟內(nèi)科IgAN患者共105例。所有患者經(jīng)腎穿刺病理活檢證實。排除過敏性紫癜性腎炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、慢性肝病等繼發(fā)性腎臟IgA沉積患者。其中男 45例,女60例,年齡14～73歲,平均(43.2±12.9)歲。另選擇120例正常體檢者作為對照組。

1.2 方法

基因型檢測:抽取空腹靜脈血5 mL,提取外周血基因組DNA。采用聚合鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性技術(shù)(PCR-RFLP)檢測AGT M235T基因多態(tài)性[4]。引物序列:引物1:5′-CCG TTT GTG CAG GGC CTG GCT TCT T-3′;引物 2:5′-CAG GGT GCT GTC CAC ACT GGA CCC C-3′。對 IgAN 患者的年齡 、性別 、血壓、血清肌酐、24 h尿蛋白定量、初始的估算腎小球濾過率(eGFR)[3]、腎穿刺活檢的病理進行觀察和檢測。計算出IgAN患者AGT各基因亞型的頻率,經(jīng)Hardy-Weinberg遺傳平衡定律檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 AGT M235T基因型分析

AGT基因第2外顯子編碼產(chǎn)物第235號氨基酸由蛋氨酸(M)變異為蘇氨酸(T),即核苷酸704處堿基T被C代替,丟失了TthⅢ限制性酶切位點:GACNNNGTC,故酶切產(chǎn)物電泳后可出現(xiàn)3種情況:T T純合型(有酶切位點):141 bp,24 bp;MM純合型(無酶切位點):165 bp;MT雜合型:165 bp,141 bp,24 bp。見圖1。

圖1 ACT M235T基因型

2.2 IgAN患者和正常對照AGT M235T基因頻率的比較

本院的105例IgAN患者中,MM基因型、MT基因型、TT基因型的患者分別占2.9%、20.0%、77.1%,120例健康體檢者中,MM基因型、MT基因型、TT基因型的人數(shù)分別占0.8%、31.7%、67.5%,2組人群的基因型分布無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。見表1。

表1 IgA腎病患者和正常對照組AGT M235T基因頻率的比較[n(%)]

2.3 AGT M235T多態(tài)性與IgAN臨床特征的比較

IgAN患者的發(fā)病年齡、性別、平均動脈壓、24 h尿蛋白定量、血清肌酐值、初始的eGFR值在AGT M 235T基因型之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。見表2。

表2 AGT M235T基因多態(tài)性與IgAN患者主要臨床特征的關(guān)系( x±s)

2.4 AGT M235T多態(tài)性與IgAN病理特征的比較

在AGT M235T 基因MM 、MT、TT 3種基因亞型的患者中,有腎小球硬化的患者所占的比例之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。有球性硬化或節(jié)段性硬化的患者所占的比例在3種基因亞型間也無統(tǒng)計學(xué)差異。在3種基因亞型的患者間,腎小球硬化程度(球性硬化+節(jié)段性硬化比例)無統(tǒng)計學(xué)差異。有腎間質(zhì)纖維化、腎小管萎縮、腎血管病變的患者在3種基因亞型間的分布同樣無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。見表3。

表3 AGT M235T基因多態(tài)性與IgAN患者病理情況的關(guān)系[n(%)]

3 討 論

IgA腎病的發(fā)病率有明顯的地區(qū)和種族差異,亞洲是IgA腎病的高發(fā)地區(qū)。在我國、日本和新加坡,IgA腎病占腎活檢診斷原發(fā)性腎小球腎炎的30%～50%,在印度其發(fā)病率僅為4%～7%,泰國為9.2%[5]。黃種人是IgA腎病的高發(fā)人群,而黑人極少見IgA腎病,同時IgA腎病還有家族聚集現(xiàn)象,這些提示該病可能與遺傳因素密切相關(guān)。鑒于IgA腎病發(fā)病的地區(qū)和種族差異,本文就上海人群的IgA腎病患者做一研究。

IgA腎病的發(fā)病機制目前尚未完全清楚,然而越來越多的研究證據(jù)表明,遺傳因素對IgA腎病的發(fā)病起著重要的作用,其機制可能是一種多基因、多因素參與的復(fù)雜的遺傳性疾病。研究與IgA腎病發(fā)生、發(fā)展有關(guān)的基因變異是當(dāng)前的一個熱點,其中RAAS的基因變異也與IgA腎病密切相關(guān)。RAAS在腎臟疾病的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了重要影響[6]。AGT是RAAS的重要組成部分。AGT是RAAS中唯一的限速反應(yīng)初始底物,血漿中AGT水平的高低直接影響RAS的強弱。AGT基因M235T多態(tài)性影響RAAS的活性,有報道TT型人群血漿ACT水平明顯高于MM型[7]。近年來雖然研究結(jié)論并不一致,但大多數(shù)研究不支持AGT M235T基因多態(tài)性與IgA腎病的發(fā)生有關(guān)[4,8-9],即AGT基因并非IgA腎病的易感基因。本研究通過比較105例IgA腎病患者與120例正常人群的AGT M235T各基因亞型的分布頻率,發(fā)現(xiàn)其差異并無統(tǒng)計學(xué)意義,與以往研究結(jié)果一致,再次驗證了AGT M235T的基因多態(tài)性與IgA腎病的發(fā)病無關(guān)。

研究表明,大量蛋白尿、發(fā)病時已有血肌酐升高、持續(xù)性高血壓、發(fā)病時年齡較大及腎臟病理損害嚴(yán)重均是IgA腎病患者預(yù)后不良的重要指標(biāo)[10]。但在本研究中,性別、發(fā)病年齡、血壓、蛋白尿、發(fā)病時學(xué)肌酐、GFR等臨床指標(biāo),AGT各基因型均無明顯差異,提示AGT基因型在IgA腎病發(fā)展中可能不起主要作用。腎小球硬化、腎間質(zhì)纖維化、腎小管萎縮和腎血管病變是IgA患者預(yù)后不良的重要病理指標(biāo),但本研究發(fā)現(xiàn)AGT各基因型的病理表現(xiàn)并無差別,再次驗證AGT基因型在IgA腎病法中不起主要作用。提示IgA腎病是一個受多基因、多因素影響的疾病,發(fā)病過程涉及多個環(huán)節(jié),需要進一步研究不同多態(tài)位點的交互作用,才能揭示遺傳多態(tài)性在IgA腎病發(fā)生發(fā)展中的作用。

綜上所述,IgA腎病是一個多基因、多因素影響的疾病,本研究需要進一步加大樣本量,并隨訪患者的病情進展,才能正確判斷AGT基因多態(tài)性和IgA腎病的關(guān)系。

[1] GONG R,LIU Z,CHEN Z,et al.Genetic variation of mannose-binding protein associated with glomerular immune deposition in IgA nephropathy[J].Chinese Medical Journal,2002,115(2):192.

[2] 陳香美,陳以平,李 平,等.1016例IgA腎病患者中醫(yī)證候的多中心流行病學(xué)調(diào)查及相關(guān)因素分析[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2006,26(3):197.

[3] M a YC,Li Z,Chen JH,et al.Modified glomerular filtration rate estimating equation for Chinese patients with chronic kidney disease[J].J Am Soc Nephrol,2006,17(10):2937.

[4] 張 怡,初少莉,高平進,等.腎素血管緊張素系統(tǒng)基因多態(tài)性與低腎素性高血壓的相關(guān)性研究[J].中國分子心臟病學(xué)雜志,2010,10(4):229.

[5] 錢雅新,趙燕俐,彭 文,等.柴芩腎安方對IgA腎病大鼠腎小球TGF-β1和CTGF表達的影響[J].實用臨床醫(yī)藥雜志,2008,12(3):78.

[6] 章曉燕,呂文律,滕 杰,等.慢性腎臟病患者尿血管緊張素原與腎臟腎素血管緊張素系統(tǒng)活性的相關(guān)性[J].中華腎臟病雜志,2011,27(5):327.

[7] 孫洪英,和姬苓,楊玉蓉,等.腎素基因G10631A和血管緊張素原基因T704C多態(tài)性與腦梗死的關(guān)系[J].國際腦血管病雜志,2011,19(6):442.

[8] 孟 群,沈 穎,江載芳,等.原發(fā)性腎病綜合征患兒血管緊張素原和血管緊張素轉(zhuǎn)換酶基因多態(tài)性的檢測與臨床分析[J].中國實用兒科雜志,2007,22(6):420.

[9] 于克洲,孫 晶,王 榮,等.8例伴惡性高血壓的IgA腎病臨床與病理分析[J].山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2007,45(8):864.

[10] HUANG Hai-dong,LIN Fu-jun,et al.Genetic polymorphisms of the renin-angiotensin-aldosterone system in Chinese patients with end-stage renal disease secondary to IgA nephropathy[J].Chinese Medical Journal,2010,123(22):3238.