肖安菊，尹美珍，喻 昕，林 靜（黃石理工學(xué)院醫(yī)學(xué)院，黃石市 435003）

前文報(bào)道[1]的古蔡氏法、二乙氨基二硫代甲酸銀分光光度（DDC-Ag）法測定雄黃和牛黃解毒片中可溶性砷的含量，方法雖然簡單，成本低廉，但測定過程中影響因素太多，極易影響到數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。本文擬報(bào)道石墨爐原子吸收分光光度（GF-AAS）法測定水溶性砷的條件、方法。

1 儀器與試藥

AA240FS原子吸收分光光度計(jì)、GTA120型石墨爐控制器、石墨管、空心陰極燈（美國VARIAN公司）。

雄黃（產(chǎn)地山東，分裝批號(hào)：081028）；牛黃解毒片（北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠，批號(hào)：9120196，以下簡稱“同仁堂”；修正藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)：090704，以下簡稱“修正”；廣西廣明藥業(yè)有限公司，批號(hào)：091203，以下簡稱“廣明”。）；三氧化二砷（基準(zhǔn)試劑，北京化工廠，批號(hào)：81046）；硝酸鎳（分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20070716）；硝酸為優(yōu)級(jí)純），水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 稀鹽酸溶液的制備 取濃鹽酸234 mL，加水稀釋至1 000 mL，即得。

2.1.2 硝酸鎳溶液的制備 精密稱取2.48 g硝酸鎳（分析純）在純水中溶解并稀釋至50 mL，此溶液含鎳離子濃度為10 mg·mL－1[2]。

2.1.3 砷標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 將1.32 g三氧化二砷，置于1 000 mL容量瓶中，加20%氫氧化鈉溶液5 mL溶解后，用適量稀硫酸中和，再加稀硫酸10 mL，用水稀釋至刻度，作為貯備液（100 μg·mL－1）。

2.1.4 砷標(biāo)準(zhǔn)使用液的制備 精密量取貯備液10 mL，置于1 000 mL容量瓶中，加稀硫酸10 mL，用水稀釋至刻度，即得（1 μg·mL－1）。

2.1.5 人工胃液的制備 取稀鹽酸5.9 mL，加水至1 000 mL，用pH酸度計(jì)測得pH＝1.34即可。

2.2 樣品的處理

2.2.1 藥品粉碎 分別取雄黃、去包衣的牛黃解毒片適量，于乳缽內(nèi)研末，過50目篩，備用。

2.2.2 稀鹽酸提取 分別精密稱取雄黃0.259 8 g、牛黃解毒片0.762 5 g[3]，置于4個(gè)燒杯中，各加稀鹽酸20 mL，振搖提取1 h，濾過，濾渣用稀鹽酸洗2次，每次10 mL，攪拌10 min，濾過，洗液與濾液合并后置于500 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻[4]。取雄黃提取液1 mL，置于100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 人工胃液提取 分別精密稱取雄黃、牛黃解毒片（取樣量同上）適量，置于4個(gè)燒杯中，各加“2.1.4”項(xiàng)下方法配制的人工胃液300 mL，電磁攪拌提取4 h，濾過，濾液加水定容為500 mL，搖勻。取雄黃提取液1 mL，置于100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 儀器工作條件

光源發(fā)射波長：193 nm；燈電流：10 mA；狹縫寬度：0.2 nm；進(jìn)樣體積：50 μL；保護(hù)氣體：氬氣。石墨爐的工作條件見表1，每個(gè)樣品儀器自動(dòng)按表中9個(gè)步驟進(jìn)行檢測。

表1 石墨爐工作條件Tab 1 Operating conditions of graphite furnace

2.4 線性關(guān)系考察

母液是砷標(biāo)準(zhǔn)使用液，內(nèi)含40 μg硝酸鎳[2]；稀釋液是2%硝酸溶液。儀器自動(dòng)配標(biāo)，濃度分別為0、2、4、6、8、10 μg·L－1，測得平均吸光度分別是 0.006 0、0.055 6、0.116 1、0.180 2、0.238 9、0.299 3。以吸光度（A）為橫坐標(biāo)，濃度（C）為縱坐標(biāo)，得回歸方程C＝33.611A－0.019 8（r＝0.999 0），可溶性砷檢測濃度在0～10 μg·L－1范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取砷標(biāo)準(zhǔn)使用液50 μL，按“2.3”項(xiàng)下儀器工作條件重復(fù)進(jìn)樣5次，測定并記錄吸光度，計(jì)算RSD值。結(jié)果，RSD＝0.52%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取已知含量的雄黃粉末5份，每份約0.26 g（可溶性砷含量為8.723 mg·g－1），按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試液，按“2.3”項(xiàng)下儀器工作條件進(jìn)樣測定。結(jié)果，可溶性砷吸光度的RSD＝2.72%，表明方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.6”項(xiàng)下供試品溶液適量，按“2.3”項(xiàng)下條件分別于0、2、4、6 h進(jìn)樣測定。結(jié)果，可溶性砷吸光度RSD＝1.53%，表明樣品在6 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的牛黃解毒片（修正）粉末9份，每份約0.762 5 g（可溶性砷含量為0.915 mg·g－1），分別精密添加一定量的砷（分別相當(dāng)于樣品含量的80%、100%、120%），按“2.2.3”項(xiàng)下方法處理后進(jìn)樣測定。結(jié)果，可溶性砷平均加樣回收率分別為99.20%、98.67%、100.77%，RSD＝2.01%，詳見表2。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 2Recovery results of soluble arsenic（n＝9）

2.9 樣品含量測定

按照“2.3”項(xiàng)下儀器工作條件，測定8個(gè)樣品的吸光度值（每份樣品平行操作3份），在砷標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得樣品砷的濃度，通過計(jì)算得樣品中可溶性砷的含量，結(jié)果詳見表3。

表3 樣品含量測定結(jié)果Tab 3 Content determination of samples

2.10 與DDC-Ag法測定結(jié)果比較

將文獻(xiàn)[1]中DDC-Ag法測定的數(shù)據(jù)與本文中GF-AAS法測定的砷含量結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果見表4。

表4 2種方法測定結(jié)果比較（±s）Tab 4Results of determination by 2 methods（±s）

表4 2種方法測定結(jié)果比較（±s）Tab 4Results of determination by 2 methods（±s）

與稀鹽酸提取液比較：＊P＜0.05；與DDC-Ag法測定結(jié)果比較：#P＞0.05vs.diluted hydrochloric acid；＊ P＜0.05；vs.determination by DDC-Ag：#P＞0.05

樣品名稱同仁堂稀鹽酸提取液同仁堂人工胃液提取液廣明稀鹽酸提取液廣明人工胃液提取液DDC-Ag法/mg·g－1 0.784±0.025 2.008±0.036＊0.800±0.031 1.140±0.040＊GF-AAS法/mg·g－1 0.659±0.019#2.096±0.037＊1.144±0.023#1.580±0.041＊

3 討論

3.1 基體改進(jìn)劑的作用與選擇

石墨爐的灰化溫度一般在500～800℃，灰化作用是將樣品中的基體在灰化階段破壞并排出爐外。砷元素很不穩(wěn)定，在500℃時(shí)就破壞隨基體揮發(fā)了，損失相當(dāng)嚴(yán)重，必須加入基體改進(jìn)劑。有文獻(xiàn)報(bào)道[5]用二氯化鈀能產(chǎn)生較為穩(wěn)定的吸光度；也有文獻(xiàn)報(bào)道[1]用硝酸鎳能明顯提高砷的吸光度。本文采用了加40 μg·L－1硝酸鎳作為基體改進(jìn)劑。

3.2 溶劑的選擇

因?yàn)闊o機(jī)砷毒性最大，而砷酸鈉、亞砷酸鈉均易溶于水；三氧化二砷微溶于水，溶于酸、堿，故2005年版《中國藥典》采用稀鹽酸提取。本試驗(yàn)根據(jù)藥物進(jìn)入人體后的真實(shí)情況設(shè)定用人工胃液提取，對(duì)人工胃液的用量和提取時(shí)間也進(jìn)行了探討。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用300 mL，提取4 h是最佳選擇。古蔡氏法、DDC-Ag法和GF-AAS法所測結(jié)果比較后發(fā)現(xiàn)，人工胃液提取的可溶性砷含量均高于稀鹽酸。

3.3 檢測方法比較

由表4可見，對(duì)于同一供試液而言，GF-AAS法測得的砷含量數(shù)據(jù)大多高于DDC-Ag法，但無顯著性差異。可能是因?yàn)镚F-AAS法測定時(shí)可以直接用提取液進(jìn)樣，減少了很多中間步驟帶來的誤差。

綜上所述，建議對(duì)于雄黃和含雄黃的復(fù)方制劑，其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中均應(yīng)有可溶性砷含量測定項(xiàng)目，采用GF-AAS法測定，提取溶劑用人工胃液。

[1] 肖安菊，喻 昕，尹美珍，等.2種方法測定雄黃及牛黃解毒片中可溶性砷含量的比較[J].中國藥房，2011，22（8）：747.

[2] 張貴馬，花長庚，鄧 艷，等.基體改進(jìn)劑原子吸收光譜法直接測定水中砷[J].實(shí)用醫(yī)技雜志，2004，11（7B）：1 293.

[3] 楊志強(qiáng)，李鳳艷，李慶杰，等.砷斑法測定砷含量[J].北京石油化工學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，13（2）：57.

[4] 國家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄ⅨF.

[5] 唐 虹，黃 薇，王延琦，等.石墨爐原子吸收分光光度法測定中藥中微量砷[J].職業(yè)與健康，2001，17（8）：42.