黃 雷 李 壯 閔 奇 張春宏

（1 錦州市食品藥品檢驗所，遼寧 錦州 121000；2 大連市食品藥品檢驗所，遼寧 大連 116021）

在檢驗過程中，發(fā)現(xiàn)的問題是：照原標準做（國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標準73冊），對照品溶液不顯斑點。于是從：①對照品溶液配制；②顯色條件，這兩方面進行一些考察。

1 儀器與材料

硅膠GF254薄層板（青島海洋化工廠分廠，批號：20100525），紫外分析儀（WD-9403B），BP-211D型電子天平，異山梨醇對照品（批號：1352008）

2 試驗方法及結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

精密稱取本品內(nèi)容物的細粉適量（約相當(dāng)于單硝酸異山梨酯125mg），置25mL量瓶中，加無水乙醇適量，超聲處理10min，加無水乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取異山梨醇對照品10mg，置200mL量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.3 薄層檢查

照薄層色譜法（中國藥典2005年版二部附錄V B）[1]試驗，吸取上述兩種溶液各20μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-無水乙醇（2∶1）為展開劑，展開后，晾干，噴以新鮮制備的堿性高錳酸鉀溶液（取高錳酸鉀0.25g，氫氧化鈉2g，加水100mL溶解，即得），置105℃加熱約5min，立即檢視。供試品溶液如顯與異山梨醇相應(yīng)的雜質(zhì)斑點，其顏色與對照品溶液的主斑點比較，不得更深（1.0%）。

試驗結(jié)果證明兩點：①點樣量（或者配制的濃度）至少是原標準的4倍，對照品溶液才可以得到確定清晰的斑點。②顯色條件，綜合進行254nm與顯色劑兩方面的考察，發(fā)現(xiàn)最佳顯色條件是噴顯色劑后，在105℃溫度下稍微加熱。而不是如標準規(guī)定，即噴顯色劑后，在105℃溫度下加熱5min。如果按照標準操作，不論多大濃度的標準品斑點都看不清楚。見圖1～圖4。

圖1 完全按標準操作，一倍量濃度，噴顯色劑，于105℃加熱5min，未顯對照品斑點

圖2 圖中顯示的是加大對照品溶液濃度，展開未噴顯色劑的情況。于254nm紫外燈下檢視。從圖中可以看出，異山梨醇對照液其濃度為標準規(guī)定濃度的二倍與四倍量時未出現(xiàn)斑點，八倍量斑點模糊，十六倍量斑點清晰。所有的供試品溶液斑點清晰

圖3 圖中顯示的是展開后，噴顯色劑，在白光下立即檢視的情況。從圖中可以看出，異山梨醇對照液濃度為標準規(guī)定的濃度的二倍點未出現(xiàn)，四倍、八倍、十六倍點清晰，在Rf=0.2處。所有的供試品溶液斑點清晰

圖4 圖中顯示的是噴顯色劑，于105℃稍稍加熱，在白光下立即檢視的情況。此時的各個斑點最為清晰。顯示出的對照液系列斑點已經(jīng)用鉛筆做標注

在試驗中，點樣量的倍增是通過極大的增加溶液的濃度，極大的減小點樣體積來實現(xiàn)的。這樣做有兩點目的：①通過減少點樣的時間來防止氧化；②減少點樣體積來減少點的擴散。

3 討 論

由于按原標準方法檢驗，未能達到檢驗?zāi)康?，?jīng)過反復(fù)實驗摸索其結(jié)果證明兩點：①點樣量（或者配制的濃度）至少是原標準的4倍，對照品溶液得到確定清晰的斑點，才可以作為供試品的對照和參考。②顯色條件，最佳顯色條件是噴顯色劑后，在105℃溫度下稍微加熱，呈清晰的斑點。此方法重現(xiàn)性好，簡單便捷[1]。

[1] 中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典二部(2005年版)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.