張珍珍， 趙 氚， 陳 思， 季 暉*

(1.中國藥科大學(xué)藥理學(xué)教研室，江蘇 南京 210009;2.海軍總醫(yī)院藥劑科，北京 100048)

三萜類化合物為一類基本母核由30個碳原子組成的萜類化合物，其結(jié)構(gòu)根據(jù)異戊二烯定則可視為6個異戊二烯單位聚合而成。該類化合物廣泛分布于自然界，在菌類、植物和動物中均有存在，其生物合成途徑是由鯊烯通過不同環(huán)化方式轉(zhuǎn)變而來。研究顯示，三萜類化合物具有多種生理活性，如溶血、抗腫瘤、抗炎、抗菌、抗病毒、降膽固醇及抗生育等。目前，從自然界中分離獲得的三萜類化合物已超過2萬種，其中多種化合物，如齊墩果烷型五環(huán)三萜類化合物齊墩果酸(OA，1)和烏蘇烷型五環(huán)三萜類化合物熊果酸(UA)被證實(shí)具有抗炎和抗腫瘤活性。近年來，三萜類化合物中抗腫瘤活性最強(qiáng)的齊墩果烷型類化合物引起了國內(nèi)外學(xué)者的普遍關(guān)注，通過對該類化合物的結(jié)構(gòu)修飾和構(gòu)效關(guān)系研究，現(xiàn)已獲得一系列活性更好的衍生物［1］，與此同時(shí)，其抗腫瘤的機(jī)制探究也在不斷深入。本文對齊墩果烷型三萜類化合物的抗腫瘤活性及其作用機(jī)制研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，旨在為該類化合物作用機(jī)制的闡明及相關(guān)藥物研發(fā)提供參考。

1 齊墩果烷三萜類化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)及抗腫瘤活性

齊墩果酸分子結(jié)構(gòu)中有3個可供修飾的官能團(tuán)——C17位羧基、C12位和C13位間的雙鍵以及C3位羥基。研究人員通過對該化合物進(jìn)行改造，得到了抗腫瘤活性更強(qiáng)的結(jié)構(gòu)類似物，如2-氰基-3，12-二氧代齊墩果烷-1，9-二烯-28-酸(2-cyano-3，12-dioxooleana-1，9-dien-28-oic acid，CDDO，2)及其 C17位取代的一系列衍生物 CDDO-Me(3)、CDDO-Im(4)、CDDO-MA(5)、CDDO-EA(6)和 Di-CDDO(7)等。在體外，這些化合物對多種腫瘤(如乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、卵巢癌、脂肉瘤、骨肉瘤和神經(jīng)細(xì)胞瘤等實(shí)體瘤，以及白血病、淋巴瘤和骨髓瘤等非實(shí)體瘤)細(xì)胞均具有促進(jìn)凋亡和增殖抑制作用［3-12］，其中，CDDO-Me 對骨肉瘤 HOB-c、KHOS、KHOSR2、U-2OS 和 U-2OSTR細(xì)胞的 IC50分別為 0.8、0.15、0.33、0.17 和 0.39 μmol·L－1［7］，對成神經(jīng)瘤 LAN1、NBEB、SKNAS、SKNDZ和SKNSH細(xì)胞株的 IC50分別為160、305、418、525 和 630 nmol·L－1［9］;CDDO 對 B 細(xì)胞淋巴瘤OCI-Ly19和OCI-Ly10細(xì)胞的IC50分別為1.25 和 2.0 μmol·L－1［10］;CDDO-Im 對耐地塞米松的骨髓瘤 MM.1R 細(xì)胞的 IC50為 0.15 μmol·L－1，CDDO-Me對耐伊馬替尼的慢性粒細(xì)胞白血病KBM5-R 細(xì)胞的 IC50為 0.22 μmol·L－1［13-14］。值得一提的是，該類化合物安全性較高，如 CDDO和CDDO-Me在誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的濃度下，對取自急性髓系白血病患者或健康受試者的正常淋巴細(xì)胞均無明顯毒性［15］，故而極具開發(fā)為抗腫瘤藥物的潛力。

齊墩果烷型三萜類化合物的體內(nèi)抗腫瘤活性也已通過多種荷瘤動物模型得到了證實(shí)。如Liby等［16］給乙烯基氨基甲酸酯所致的肺癌模型小鼠飼以含有 CDDO-ME(60 mg·kg－1·d－1)或 CDDO-EA(400 mg·kg－1·d－1)的飼料，15 周后處死小鼠，取其肺進(jìn)行觀察，結(jié)果顯示，CDDO-ME和CDDO-EA組小鼠肺表面的平均瘤體數(shù)分別為7.4和7.8個，而未給藥組小鼠肺表面平均瘤體數(shù)為15.8個，表明CDDO-ME和CDDO-EA均可顯著抑制小鼠肺部腫瘤生長;Jutooru等［17］給荷有胰腺癌L3.6pL細(xì)胞的裸鼠灌胃給予 CDDO-Me(7.5 mg·kg－1·d－1)或空白溶劑，連續(xù)給藥4周，結(jié)果，CDDO-Me組和空白溶劑對照組小鼠瘤體積分別約為500和2400 mm3，瘤重分別為1和2 g;Deeb等［18］給前列腺癌轉(zhuǎn)基因模型小鼠灌胃給予 CDDO(10 μmol·kg－1，每周第 1 ～5天給藥)，20周后，空白溶劑對照組和CDDO組中發(fā)生腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的小鼠比例分別為63%和27%。

2 齊墩果烷三萜類化合物的抗腫瘤作用機(jī)制

凋亡為細(xì)胞的內(nèi)源性死亡程序，對保持組織內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定具有重要作用，且這一特性在不同物種中均具有高度保守性。凋亡在多種正常生理過程中可起到調(diào)節(jié)作用，若此功能出現(xiàn)異常或缺失則可導(dǎo)致一系列病理情況發(fā)生。腫瘤細(xì)胞的特征之一就是缺乏這種程序性的死亡過程，提示腫瘤細(xì)胞中存在某種可避開凋亡途徑的機(jī)制。而現(xiàn)有研究表明，齊墩果烷型三萜類化合物的抗腫瘤活性與激活腫瘤細(xì)胞凋亡的線粒體途徑有關(guān)［2］。腫瘤細(xì)胞經(jīng)齊墩果烷三萜類化合物處理后，線粒體膜通透性顯著增加，其內(nèi)部多種促凋亡物質(zhì)如細(xì)胞色素C或AIF隨之大量釋放，從而啟動下游反應(yīng)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

2.1 細(xì)胞凋亡的線粒體途徑

凋亡是細(xì)胞生理性死亡的普遍形式，該過程受到一系列信號通路的調(diào)節(jié)，其中線粒體途徑起著至關(guān)重要的作用。線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔(mitochondrial permeability transition pore，MPTP)是線粒體內(nèi)外信息交流的樞紐，其開放后可導(dǎo)致線粒體許多功能發(fā)生致命性變化，從而啟動凋亡途徑。MPTP位于線粒體內(nèi)外膜之間，主要由外膜的電壓依賴性陰離子通道(voltage dependent anion channel，VDAC)、內(nèi)膜的腺苷酸轉(zhuǎn)移酶(adenine nucleotide translocator，ANT)、基質(zhì)中的親環(huán)蛋白D(cyclophilin D)及其他蛋白(如外周苯二氮受體、己糖激酶和肌酸激酶等)組成［19］。MPTP在正常生理?xiàng)l件下處于關(guān)閉狀態(tài);在應(yīng)激狀態(tài)下則開放通道，并允許相對分子質(zhì)量小于1500的物質(zhì)通過，進(jìn)而使線粒體基質(zhì)滲透壓升高。隨著MPTP的開放，線粒體內(nèi)外H+梯度消失，線粒體膜電位降低，呼吸鏈解偶聯(lián)，無法產(chǎn)生能量，此時(shí)解偶聯(lián)的呼吸鏈會產(chǎn)生大量活性氧簇(ROS)，氧化線粒體內(nèi)膜上的還原型心肌磷脂，使線粒體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性大大降低。由于水和溶質(zhì)大量涌入，線粒體發(fā)生腫脹，外膜破裂，一系列促凋亡物質(zhì)如細(xì)胞色素C、第二線粒體源性Caspase激活因子(second mitochondria-derived activator of Caspase，Smac，也稱DIABLO)和凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)從中釋放。細(xì)胞色素C釋放到細(xì)胞質(zhì)后與凋亡蛋白酶激活因子(Apaf-1)結(jié)合，使得Apaf-1與dATP的親和力增加，進(jìn)而促進(jìn)Apaf-1構(gòu)象變化并不斷招募Procaspase-9，細(xì)胞色素 C、dATP、Apaf-1 和 Procaspase-9形成聚合體即凋亡復(fù)合體(apoptosome)。凋亡復(fù)合體促進(jìn)其招募的大量Procaspase-9發(fā)生剪切反應(yīng)，形成活化的Caspase-9，后者可作為剪切因子使Procaspase-3活化為Caspase-3。Caspase-3是執(zhí)行凋亡的關(guān)鍵蛋白，可進(jìn)一步激活下游級聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。Smac蛋白釋放至胞質(zhì)后，可與凋亡抑制蛋白(IAP)特異性結(jié)合，解除IAP對Caspase-9和Caspase-3的阻遏作用，從而激活各級Caspase引起級聯(lián)反應(yīng);而AIF和內(nèi)切核酸酶G(Endo G)可轉(zhuǎn)位進(jìn)入胞核，不依賴于Caspase途徑直接引起染色質(zhì)濃縮及DNA斷裂［20］。目前，已知可直接或間接參與 MPTP調(diào)控的內(nèi)源性物質(zhì)有 Bcl-2家族蛋白、Ca2+、ROS、ATP和ADP等。隨著研究的不斷深入，研究人員發(fā)現(xiàn)砷化物、蒼術(shù)苷、二酰胺以及齊墩果烷三萜類化合物等物質(zhì)均可刺激MPTP開放，而環(huán)孢素A(CsA)可抑制MPTP開放。細(xì)胞凋亡的線粒體途徑基本原理如圖1所示。

圖1 細(xì)胞凋亡的線粒體途徑示意圖Figure 1 Schematic diagram of mitochondrial pathway of apoptosis

2.2 齊墩果烷三萜類化合物對腫瘤細(xì)胞凋亡線粒體途徑的作用

2.2.1 增大線粒體膜通透性 線粒體凋亡途徑的激活通常以線粒體膜通透性增大為起點(diǎn)。值得一提的是，齊墩果烷三萜類化合物激活線粒體膜通透性增加的機(jī)制不同于內(nèi)源性物質(zhì)，如Brookes等［2］發(fā)現(xiàn) CDDO(2.5 μmol·L－1)能夠誘導(dǎo) B 細(xì)胞淋巴瘤OCI-Ly19細(xì)胞凋亡，凋亡率為80%;將 CDDO(2.5 μmol·L－1)、CsA(1μmol·L－1)與 OCI-Ly19 細(xì)胞共孵育后，細(xì)胞凋亡率仍為80%左右。為進(jìn)一步考察化合物對線粒體結(jié)構(gòu)和功能的影響，他們將大鼠肝細(xì)胞破碎后，通過密度梯度離心獲得線粒體，然后分別用 Ca2+、Ca2++CDDO、Ca2++CDDO-Im 和Ca2++DI-CDDO(CDDO、CDDO-Im和 DI-CDDO終濃度為1或5 μmol·L－1)進(jìn)行處理，發(fā)現(xiàn)上述各組MPTP均開放;其中，Ca2+組以及Ca2++低濃度藥物組線粒體發(fā)生的通透性增大現(xiàn)象可被CsA抑制，而Ca2++高濃度藥物組無法被抑制，提示齊墩果烷三萜類化合物與Ca2+均可激活MPTP開放但兩者機(jī)制不同。此外，在完整OCI-Ly19細(xì)胞中進(jìn)行的研究也獲得了相同結(jié)果。已知Ca2+可破壞線粒體呼吸鏈酶復(fù)合物Ⅰ，影響ATP合成，增加細(xì)胞毒性自由基的釋放，最終激活MPTP，該過程可被CsA抑制。

齊墩果烷三萜類化合物主要通過以下兩個機(jī)制提高線粒體膜通透性，進(jìn)而促進(jìn)凋亡的發(fā)生。

1)降低線粒體中還原型谷胱甘肽水平 還原型谷胱甘肽(GSH)是細(xì)胞內(nèi)重要的抗氧化劑，可清除線粒體新陳代謝和凋亡過程中產(chǎn)生的ROS，以避免ROS對線粒體內(nèi)膜的破壞，對于線粒體穩(wěn)態(tài)的維持具有重要意義。然而，線粒體自身不能合成GSH，只能利用從細(xì)胞質(zhì)中轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)來的GSH。GSH的氧化產(chǎn)物——氧化型谷胱甘肽(GSSG)可在谷胱甘肽還原酶與NADPH的共同作用下轉(zhuǎn)變?yōu)镚SH。GSH與GSSG含量比值反映了細(xì)胞內(nèi)的氧化水平，當(dāng)該比值顯著下降時(shí)，提示細(xì)胞可能已進(jìn)入凋亡階段。Chernyak等(Biosci Rep，1997年)研究發(fā)現(xiàn)，GSH可保持MPTP中巰基的還原態(tài)，從而使MPTP處于關(guān)閉狀態(tài)。為了探究齊墩果烷三萜類化合物誘導(dǎo)線粒體內(nèi)膜通透性增強(qiáng)的分子機(jī)制，Samudio等［21］發(fā)現(xiàn)，將 CDDO-Im(1 μmol·L－1)與胰腺癌 COLO357細(xì)胞孵育20～120 min后，COLO357細(xì)胞線粒體GSH水平降低，細(xì)胞總GSH水平無顯著變化，ROS聚集增強(qiáng)，線粒體膜電位下降，提示CDDO-Im有可能通過降低線粒體GSH開放MPTP孔道，從而使線粒體膜通透性增強(qiáng)。2-巰基乙醇(BME)可逆轉(zhuǎn)CDDO-Im的這種作用，有趣的是，其僅能徹底清除由CDDO-Im誘導(dǎo)產(chǎn)生的ROS，而不能清除由過氧化氫誘導(dǎo)產(chǎn)生的ROS，提示CDDO-Im引起線粒體GSH流失是導(dǎo)致ROS聚集增強(qiáng)的直接原因，BME并不能直接清除ROS，而是通過阻止由CDDO-Im引起的線粒體GSH流失來下調(diào)ROS水平。

心肌磷脂為線粒體磷脂的重要組成部分，對線粒體內(nèi)膜穩(wěn)定性的維持有著重要作用。Samudio等［22］發(fā)現(xiàn)，CDDO-Me可使人白血病U937細(xì)胞線粒體內(nèi)膜中的還原型心肌磷脂含量大幅度降低，進(jìn)而使線粒體膜電位下降，且這一過程不可被Caspase廣譜抑制劑z-VAD-fmk逆轉(zhuǎn);而星形孢菌素、紫外線和腫瘤壞死因子等誘導(dǎo)的線粒體膜電位下降及細(xì)胞凋亡均依賴于Caspase途徑，因此，上述結(jié)果提示CDDO-Me能不依賴于Caspase途徑作用于線粒體內(nèi)膜中的心肌磷脂，使線粒體內(nèi)膜通透性增大。在慢性粒細(xì)胞白血病KBM5細(xì)胞及KBM5R細(xì)胞中進(jìn)行的研究結(jié)果亦表明:CDDO-Me能使線粒體內(nèi)膜中的還原型心肌磷脂含量減少，其原因是CDDO-Me選擇性降低了線粒體GSH水平，使氧化應(yīng)激反應(yīng)蛋白——血紅素加氧酶1(HO-1)表達(dá)水平升高，導(dǎo)致ROS增多，從而引起還原型心肌磷脂被氧化，線粒體穩(wěn)定性下降，膜通透性增大［14］。

2)動員凋亡蛋白Bax的遷移 細(xì)胞色素C對于生命活動的重要性不僅體現(xiàn)在其參與細(xì)胞能量的生成，且在凋亡中也發(fā)揮著重要作用。大量研究表明細(xì)胞色素C與Apaf-1的結(jié)合是凋亡進(jìn)程中的關(guān)鍵步驟［23-24］。關(guān)于細(xì)胞色素C釋放的具體機(jī)制，目前主要存在2種假說。一是與MPTP的開放有關(guān):當(dāng)MPTP被激活時(shí)，線粒體膜發(fā)生破裂，從而釋放細(xì)胞色素C［25］;二是與 Bcl-2蛋白家族的參與有關(guān):Bcl-2蛋白家族屬于信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白，可參與線粒體外膜通透性的調(diào)節(jié)。該家族包括抗凋亡蛋白(如Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-w 和 Mcl-1)與促凋亡蛋白(如 Bax、Bak及Bok)，Bcl-2定位于MPTP，可抑制MPTP的開放，當(dāng)各種刺激因子作用于細(xì)胞時(shí)，Bax從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移至線粒體外膜并發(fā)生聚集，在線粒體外膜磷脂層中形成孔道，這些孔道可使小分子蛋白如細(xì)胞色素C 通過［26］。Konopleva 等［27］發(fā)現(xiàn)，CDDO-Me 能增加人白血病HL-60和U937細(xì)胞中bax mRNA水平，進(jìn)而使Bax表達(dá)增多，且線粒體中Bax水平上升，細(xì)胞質(zhì)中Bax水平下降，表明CDDO-Me能誘導(dǎo)Bax從胞質(zhì)向線粒體遷移。此外，齊墩果烷三萜類化合物也能誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌H460和A549細(xì)胞和卵巢癌A2780細(xì)胞中Bax表達(dá)增多，進(jìn)而促進(jìn)線粒體釋放細(xì)胞色素 C［28-29］。Samudio 等［22］發(fā)現(xiàn)，在 CDDO-Me誘導(dǎo)U937細(xì)胞發(fā)生凋亡的過程中，細(xì)胞色素C達(dá)到最大釋放量時(shí)可見大量Bax發(fā)生轉(zhuǎn)運(yùn)，然而Bax轉(zhuǎn)運(yùn)至線粒體之前，細(xì)胞色素C就已開始從線粒體中釋放，由此推測，Bax轉(zhuǎn)運(yùn)在齊墩果烷三萜類化合物促腫瘤細(xì)胞凋亡過程中發(fā)揮了重要作用，但并非促使細(xì)胞色素C釋放的唯一原因，即細(xì)胞色素C的釋放可能存在多種機(jī)制。

2.2.2 促進(jìn)凋亡誘導(dǎo)因子釋放 AIF為線粒體蛋白中的一種，在凋亡過程中也能從線粒體膜間隙釋放至胞質(zhì)中，且該過程不依賴于Caspase。AIF前體蛋白可通過其N末端的線粒體定位信號穿入線粒體內(nèi)外膜間隙，然后被線粒體內(nèi)肽酶加工為成熟的蛋白分子，此時(shí)分子N末端錨定于線粒體內(nèi)膜。當(dāng)AIF與一些細(xì)胞凋亡因子發(fā)生作用后，可從線粒體膜上的錨定位點(diǎn)脫離;隨著線粒體外膜通透性增加，該分子可從線粒體膜間隙中釋放至胞質(zhì)中，然后通過分子自身攜帶的核定位信號轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞核內(nèi)，從而激活核酸內(nèi)切酶，對細(xì)胞核內(nèi)DNA進(jìn)行水解，造成大范圍的DNA片段化及染色質(zhì)凝集［30］。研究顯示，CDDO和CDDO-Im可促使A2780和U937細(xì)胞線粒體內(nèi)的 AIF濃度下降，細(xì)胞核 AIF濃度上升［21，29］。Konopleva 等［31］通過免疫熒光技術(shù)觀察到在未經(jīng)藥物處理的U937細(xì)胞中，AIF呈散點(diǎn)狀分布于細(xì)胞質(zhì)中，而經(jīng)CDDO處理后，AIF則主要聚集于細(xì)胞核中。由此推測，齊墩果烷三萜類化合物能促使AIF大量釋放，從很大程度上說是MPTP被激活的結(jié)果。

AIF信號通路并非存在于所有形式的細(xì)胞凋亡中，但在某些細(xì)胞的凋亡中的作用尤為關(guān)鍵［32］。AIF從線粒體中釋放往往早于細(xì)胞色素C，若用抗體封閉AIF或敲除AIF基因均可使受試細(xì)胞免于死亡，且線粒體不再釋放細(xì)胞色素 C。Konopleva等［31］采用siRNA技術(shù)沉默U937細(xì)胞中的AIF基因，使AIF表達(dá)水平下調(diào)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CDDO對U937細(xì)胞的抑制率顯著降低，胞內(nèi)DNA片段化程度也明顯減小。上述研究表明:齊墩果烷三萜類化合物激活U937細(xì)胞MPTP開放后觸發(fā)的一系列下游反應(yīng)中，AIF介導(dǎo)的凋亡通路發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。

但是，MPTP開放并非促進(jìn)AIF釋放的唯一原因，多聚ADP核糖聚合酶1(PARP-1)也可促進(jìn)線粒體釋放AIF。線粒體中多種信號通路如AIF和細(xì)胞色素C各自誘導(dǎo)的凋亡通路雖然互不依賴，但也并非完全相互獨(dú)立——AIF可促使線粒體釋放更多的細(xì)胞色素C，細(xì)胞色素C活化的Caspase亦可促進(jìn)線粒體釋放AIF。因此，齊墩果烷三萜類化合物也有可能通過激活其他信號通路促進(jìn)AIF釋放。

2.3 齊墩果烷三萜類化合物對其他細(xì)胞凋亡途徑的作用

現(xiàn)有研究表明:除作用于線粒體途徑外，齊墩果烷三萜類化合物還能調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞凋亡中的其他信號通路，例如，CDDO可通過直接作用于過氧化物酶體增殖物活化受體γ(peroxisome proliferator-activated receptor γ，PPARγ)激活 Caspase 8 和 Caspase3，最終誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡［33］;核轉(zhuǎn)錄因子 κB(NF-κB)可調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖和分化，尤其在腫瘤細(xì)胞的抗凋亡機(jī)制中發(fā)揮著重要作用，Shishodia等［34］發(fā)現(xiàn)CDDO-Me可抑制KBM5細(xì)胞中NF-κB通路中的關(guān)鍵激酶——NF-κB 抑制物(IκB)激酶(IKK)，進(jìn)而阻斷NF-κB通路，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;Janus激酶－信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子(Jak-STAT)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑參與細(xì)胞的增殖、分化、凋亡及免疫調(diào)節(jié)等過程，Duan等［35］發(fā)現(xiàn) CDDO-Me能抑制耐紫杉醇的卵巢癌OVCAR8TR細(xì)胞中的酪氨酸蛋白激酶——Jak2激酶和Scr激酶，進(jìn)而抑制下游STAT3的磷酸化及核轉(zhuǎn)運(yùn)，導(dǎo)致受STAT3調(diào)節(jié)的相關(guān)抗凋亡蛋白(如BclxL)水平下降，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;Deeb等［36］發(fā)現(xiàn)CDDO-Me可通過抑制胰腺癌PC-3細(xì)胞中的抗凋亡通路——絲氨酸/蘇氨酸激酶［AKT，也稱為蛋白激酶B(PKB)］通路和哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Liby等［37］推測齊墩果烷三萜類化合物母核的C1和C9充當(dāng)了邁克爾加成反應(yīng)的電子受體，易被包括巰基在內(nèi)的電子供體進(jìn)攻，PPARγ和IKK等蛋白質(zhì)的活性中心均含有半胱氨酸，故而可與齊墩果烷三萜類化合物形成加合物，從而觸發(fā)下游促凋亡反應(yīng)。

3 結(jié)語

目前，對齊墩果烷三萜類化合物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制的研究還在進(jìn)行中，有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道不斷問世，但最終定論尚未闡明。

中國藥科大學(xué)新藥研究中心 Ding等［38］曾對CDDO進(jìn)行內(nèi)酯化，合成了一系列結(jié)構(gòu)新穎的2-氰基-3，12-二氧代齊墩果烷-1，9-二烯-28，13β-內(nèi)酯化合物。筆者所在課題組對此類化合物進(jìn)行了抗腫瘤活性初篩，并初步探討了其可能的作用機(jī)制。初步研究結(jié)果表明:其中化合物8對肝癌細(xì)胞HepG2 的抑制活性最強(qiáng)，IC50為 1.86 μmol·L－1。初步機(jī)制研究結(jié)果顯示，HepG2細(xì)胞經(jīng)該化合物處理后，線粒體膜電位降低，細(xì)胞抗氧化能力減弱，線粒體中c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)信號通路和p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信號通路被激活，進(jìn)而使Bax與Bcl-2比值升高，促發(fā)細(xì)胞色素C和AIF的釋放。今后還將進(jìn)一步研究該類化合物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制及其體內(nèi)抗腫瘤作用，以期為相關(guān)藥物的開發(fā)提供依據(jù)。

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