畢艷穎 (長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130021)

缺血后處理具有縮小心肌梗死面積、保護(hù)冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮功能及減輕缺血心肌炎癥反應(yīng)等與缺血預(yù)處理相似的心臟保護(hù)作用〔1〕。厄貝沙坦是近年臨床廣泛應(yīng)用的血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)受體(AT1)拮抗劑(ARB)，抑制AngⅠ與AT1受體結(jié)合的IC50分別為0.9 nmol/L與5.5 nmol/L，而且高達(dá)10 nmol/L時(shí)對(duì)AT2仍無(wú)抑制作用，對(duì)心率、醛固酮無(wú)影響〔2〕。本研究采用在體大鼠結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支30 min，再灌注4 h制備實(shí)驗(yàn)性心肌缺血再灌注損傷模型，觀察厄貝沙坦聯(lián)合缺血后處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 40只Wistar大鼠，雌雄各半，體重240～260 g。

1.1.2 藥品及試劑 厄貝沙坦，南京長(zhǎng)澳制藥有限公司，實(shí)驗(yàn)時(shí)以0.5%羧甲基纖維素鈉配制成所需濃度;氯化硝基四氮唑藍(lán)(NB-T)由上海前進(jìn)試劑廠生產(chǎn);丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)測(cè)定試劑盒由南京建成生物工程研究所提供;6-酮-前列腺素 F1α(6-Keto-PGF1α)放免藥盒及血栓素B2(TXB2)放免藥盒由中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院東亞免疫技術(shù)研究所提供。

1.2 方法 40只Wistar大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、厄貝沙坦組、厄貝沙坦與缺血后處理聯(lián)合作用組(聯(lián)合組)，每組10只。厄貝沙坦組于結(jié)扎后立即給藥，聯(lián)合組結(jié)扎后立即給藥，阻斷 30 min，再通 30 s，阻斷 30 s，重復(fù) 3 次，再灌注 4 h;假手術(shù)組及模型組給予等體積0.5%羧甲基纖維素鈉。大鼠冠脈結(jié)扎按文獻(xiàn)〔3〕方法稍加改進(jìn)，在乙醚麻醉下仰位固定于手術(shù)臺(tái)，自左側(cè)3～4肋間開(kāi)胸，暴露心臟，于肺動(dòng)脈圓錐及左心房間找出冠脈左前降支，除假手術(shù)組僅穿線(xiàn)不結(jié)扎外，其余各組均以0號(hào)線(xiàn)立即結(jié)扎冠脈，結(jié)扎時(shí)用一細(xì)小乳膠管墊于血管與結(jié)扎線(xiàn)之間，將心臟送回胸腔，并擠出胸腔內(nèi)血液和氣體，迅速關(guān)閉胸腔，開(kāi)胸時(shí)間不超過(guò)30 s。各組動(dòng)物在結(jié)扎30 min后松解結(jié)扎線(xiàn)進(jìn)行再灌注，再灌注4 h后，以戊巴比妥鈉30 mg/kg腹腔注射麻醉，每組動(dòng)物腹主動(dòng)脈插管取血，通過(guò)7150型生化自動(dòng)分析儀(日本)檢測(cè)血清天冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)和心肌型肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性;按試劑盒方法測(cè)血清MDA含量，SOD、GSH-Px活性;用放免法〔4〕測(cè)血漿前列環(huán)素(PGI2)和TXA2的代謝產(chǎn)物6-Keto-PG F1α和TXB2水平;腹主動(dòng)脈取血 1.5 ml，以 109mmol/L枸櫞酸鈉抗凝。1 500 r/min離心 5 min，取上層富血小板血漿(PRP)，余血3 000 r/min離心10 min，取貧血小板血漿(PPP)，用PPP調(diào)PRP至血小板數(shù)6×1011/L～7×1011/L。取血后剖取大鼠心臟，用生理鹽水洗凈心腔內(nèi)積血，去掉心房組織及脂肪，稱(chēng)重，將左心室心肌橫切4～5片，然后浸入氯化硝基四氮唑藍(lán)(NB-T)磷酸緩沖液中，置37℃恒溫水浴，待染色完全后取出，正常組織染色，缺血組織不染色。切下缺血心肌稱(chēng)重，用缺血心肌與左心室濕重的百分比計(jì)算心肌梗死范圍(MIS)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)資料以s表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)性心肌缺血再灌注損傷大鼠MIS及心肌酶學(xué)變化 與假手術(shù)組相比，模型組大鼠的MIS及AST、LDH、CK-MB均顯著升高(P＜0.01)。與模型組比較，厄貝沙坦組與聯(lián)合組可見(jiàn)大鼠的MIS明顯縮小(P＜0.01)，血清AST、LDH及CK-MB活性明顯降低(P＜0.05，P＜0.01)。與厄貝沙坦組比較，聯(lián)合組大鼠的MIS及血清心肌酶學(xué)均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 實(shí)驗(yàn)性心肌缺血再灌注損傷大鼠血清 MDA、SOD及GSH-Px變化 與假手術(shù)組相比，模型組血清 MDA含量、GSH-Px活性明顯增加，而SOD明顯降低(P＜0.05，P＜0.01)。與模型組比較，厄貝沙坦組與聯(lián)合組均可見(jiàn)血清MDA含量顯著降低(P＜0.05)，SOD活性顯著提高(P＜0.05，P＜0.01)。與厄貝沙坦組比較，聯(lián)合組血清MDA含量及SOD及GSH-Px活性均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。見(jiàn)表2。

表1 四組MIS及心肌酶活性變化(n=10s)

表1 四組MIS及心肌酶活性變化(n=10s)

與假手術(shù)組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;與模型組比較:3)P＜0.05，4)P ＜0.01;下表同

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表2 四組氧化應(yīng)激指標(biāo)的變化(n=10±s)

表2 四組氧化應(yīng)激指標(biāo)的變化(n=10±s)

組別 MDA(CB/nmol/L)SOD(ρB/mg/L)GSH-Px(λB/U/ml)假手術(shù)組6.06±1.5 269.3±29.4 43.5±10.3模型組 8.6±2.32) 224.0±25.12) 56.1±14.91)厄貝沙坦組 6.2±1.93) 262.0±35.03) 44.4±8.83)聯(lián)合組 6.2±1.73) 264.3±26.94) 39.1±14.93)

2.3 實(shí)驗(yàn)性心肌缺血再灌注損傷大鼠血漿PGI2及TXA2變化 與假手術(shù)組相比，模型組血漿TXA2水平明顯升高，PGI2水平及PGI2/TXA2比值明顯降低(P＜0.05，P＜0.001)。與模型組比較，厄貝沙坦組與聯(lián)合組均可見(jiàn)血漿TXA2水平顯著降低(P＜0.05，P＜0.01)，血漿 PGI2水平及 PGI2/TXA2比值顯著提高(P＜0.05，P＜0.01)。與厄貝沙坦組比較，聯(lián)合組血漿TXA2和 PGI2水平及 PGI2/TXA2比值均無(wú)明顯變化(P＞0.05)。見(jiàn)表3。

表3 各組血漿PGI2及TXA2變化(n=10±s)

表3 各組血漿PGI2及TXA2變化(n=10±s)

組別 PGI2(ρB/ng/L) TXA2(ρB/ng/L) PGI2/TXA2假手術(shù)組458.1±86.20 185.7±20.7 2.5±0.6模型組 344.5±52.42) 267.8±36.11) 1.3±0.32)厄貝沙坦組 400.6±57.73) 223.0±51.53) 1.9±0.63)聯(lián)合組 403.4±58.73) 207.2±27.24) 2.0±0.44)

3 討論

急性心肌梗死日益威脅著人類(lèi)的生命，其主要的治療方法為梗死相關(guān)動(dòng)脈的再灌注即急診經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療(PCI)，但有時(shí)缺血心肌的再灌注損傷可能會(huì)抵消PCI所達(dá)到的效果。有研究表明，心肌缺血再灌注損傷會(huì)進(jìn)一步加大MIS，其心功能障礙程度比急性心肌梗死還嚴(yán)重，病死率更高〔5〕。心肌酶存在于細(xì)胞質(zhì)中，當(dāng)心肌缺血再灌注損傷時(shí)細(xì)胞壞死，造成心肌細(xì)胞各種酶釋放入血。因此，血清CK-MB、LDH及AST的活性測(cè)定可用來(lái)判斷心肌缺血再灌注損傷程度及藥物抗心肌缺血再灌注損傷療效和預(yù)后的指標(biāo)之一。本實(shí)驗(yàn)表明，厄貝沙坦及聯(lián)合組能明顯縮小心肌缺血再灌注損傷大鼠的MIS，降低血清CK-MB、LDH及AST活性，證實(shí)其對(duì)缺血再灌注心肌具有明顯保護(hù)作用。但是厄貝沙坦組和聯(lián)合組的作用無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

氧化應(yīng)激是心肌缺血再灌注損傷的主要機(jī)制之一〔6〕。MDA是氧自由基引發(fā)脂類(lèi)過(guò)氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，其含量反映氧自由基水平和脂質(zhì)過(guò)氧化的強(qiáng)度和速度，是了解氧自由基致機(jī)體組織細(xì)胞損傷的重要指標(biāo)之一。機(jī)體存在抗氧化防護(hù)系統(tǒng)，SOD及GSH-Px是主要的內(nèi)源性抗氧化酶，可減少氧自由基的生成。因此可以通過(guò)MDA含量及SOD、GSH-Px活性變化評(píng)定心肌缺血再灌注損傷的程度及藥物作用的機(jī)制〔7〕。本實(shí)驗(yàn)表明，厄貝沙坦及聯(lián)合組能明顯降低血清MDA含量，升高SOD活性，提示其可通過(guò)某種機(jī)制使脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程受到抑制，同時(shí)又能提高內(nèi)源性抗氧化酶活性而減輕氧自由基對(duì)心肌的損傷，但是厄貝沙坦組和聯(lián)合組的作用無(wú)顯著差異。

心肌缺血再灌注損傷時(shí)，動(dòng)脈內(nèi)皮受損，循環(huán)血液中的血小板黏附在損傷部位，致使PGI2合成受干擾，進(jìn)一步釋放以TXA2為主的縮血管物質(zhì)，從而導(dǎo)致平衡失調(diào)。PGI2和TXA2的平衡是維持正常血小板功能、血管張力以及保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞免受損傷的重要環(huán)節(jié)。因此，TXA2與PGI2的平衡失調(diào)可能是心肌缺血或心肌壞死的主要原因之一〔8，9〕。本實(shí)驗(yàn)表明，厄貝沙坦組和厄貝沙坦與缺血后處理聯(lián)合應(yīng)用可明顯降低血漿TXA2水平，增高PGI2水平及PGI2/TXA2比值，提示其可能通過(guò)糾正PGI2/TXA2失衡發(fā)揮抗心肌缺血再灌注損傷，但是厄貝沙坦組和厄貝沙坦與缺血后處理聯(lián)合應(yīng)用的作用無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

1 Zhao ZQ，Corvera JS，Halkos ME，et al.Inhibition of myocardial injury by ischemic postconditioning during reperfusion:comparison with ischemic preconditioning〔J〕.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2003;285(2):579-88.

2 趙學(xué)忠.福辛普利與厄貝沙坦對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌缺血再灌注損傷及心室重構(gòu)的對(duì)比研究〔D〕.吉林大學(xué)博士論文，2000.

3 睢大員，曲紹春，于小風(fēng)，等.刺五加葉皂苷對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用〔J〕.中國(guó)中藥雜志，2004;29(1):71-4.

4 趙艷威，于小風(fēng)，徐華麗，等.人參果皂苷注射液對(duì)高脂血癥大鼠血脂代謝的影響〔J〕.吉林大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2005;31(3):407-10.

5 王 天，徐華麗，曲紹春，等.碟脈靈注射液對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用〔J〕.吉林大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2006;32(1):78-81.

6 Valko M，Leibfritz D，Moncol J，et al.Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease〔J〕.Int J Biochem Cell Biol，2007;39(1):44-84.

7 王 麗，趙學(xué)忠，于曉鳳，等.重組人腦利鈉肽對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2010;30(6):813-5.

8 黃漫翔，婓 紅，林萬(wàn)蓮.葛根素對(duì)心血管系統(tǒng)作用的研究進(jìn)展〔J〕.廣東藥學(xué)，2000;10(2):9-12.

9 羅 偉，李保東，楊瑞華，等.葛根素對(duì)高血壓患者血漿內(nèi)皮素及血栓素B2、6-酮-前列腺素F1α含量的影響〔J〕.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2000;20(1):68-9.