蔡勝艷，王樂秋，代海平，董祥梅

牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院 a.放射科；b.五官科；c.病理科，黑龍江 牡丹江157013

Survivin在大腸癌中的表達(dá)與其64排CT表現(xiàn)的關(guān)系

蔡勝艷a，王樂秋b，代海平c，董祥梅c

牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院 a.放射科；b.五官科；c.病理科，黑龍江 牡丹江157013

目的探討大腸癌患者CT表現(xiàn)及分期與Survivin（凋亡抑制基因）表達(dá)的相關(guān)性。方法62例術(shù)前行64排CT檢查并經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)為結(jié)直腸癌患者，采用免疫組化檢測腫瘤標(biāo)本中Survivin的表達(dá),分析Survivin表達(dá)與CT分期及CT表現(xiàn)的關(guān)系。結(jié)果62例結(jié)直腸癌組織中，Survivin的陽性表達(dá)率為80.6%，隨大腸癌CT分期增加Survivin的陽性表達(dá)率逐漸增加，與CT表現(xiàn)中的Ducks分期、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著性差異（均P＜0.05）。結(jié)論Survivin在大腸癌侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，結(jié)合術(shù)前CT影像表現(xiàn)，對患者預(yù)后的判斷及術(shù)后治療方案的選擇有積極意義。

CT；大腸癌；凋亡抑制基因；免疫組織化學(xué)

0 前言

大腸癌（CRC）是消化道常見的惡性腫瘤之一，在過去的 20年中，世界上大多數(shù)國家或地區(qū)大腸癌的發(fā)病率呈上升趨勢[1]。迄今大腸癌的病因不明，但 20 世紀(jì) 60 年代以來，分子生物學(xué)逐漸進(jìn)入腫瘤研究領(lǐng)域，大腸癌的發(fā)病機(jī)制及臨床方面的研究已進(jìn)入分子水平[2]。己經(jīng)證明，許多基因在大腸癌的演進(jìn)過程中發(fā)揮重要作用，大腸癌是一種基因病己得到共識。大腸癌的發(fā)生、發(fā)展過程與許多因素有關(guān)，其中癌基因的激活和抑癌基因的失活在這一過程中起著重要作用[3]。大腸癌的 CT 分期是臨床分期的重要依據(jù),對預(yù)后及術(shù)后治療方案的選擇至關(guān)重要。筆者試圖通過 62 例大腸癌 CT 表現(xiàn)及分期與 Survivin 表達(dá)的相關(guān)性研究，評價(jià)大腸癌影像學(xué)表現(xiàn)與其惡性程度和預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

62 份大腸癌標(biāo)本取自 2007 年 9 月～2010 年 7 月在我院行大腸癌根治性切除術(shù)的患者。所有患者術(shù)前均未接受過放療和化療，均有完整的隨訪資料。年齡 26～88 歲，平均年齡 61 歲 ；男性 33 例，女性 29 例 ；直腸癌 23 例，結(jié)腸癌 39例。

1.2 CT掃描技術(shù)及CT分期標(biāo)準(zhǔn)評定

CT 掃描儀為 Aquiline 64 排螺旋 CT 掃描機(jī)。掃描條件：120KV，200mAs，層厚 0.5mm，掃描范圍從膈頂至恥骨聯(lián)合，常規(guī)平掃后作增強(qiáng)掃描，非離子型對比劑碘海醇（300mgI/ mL）使用高壓注射器經(jīng)前臂靜脈內(nèi)團(tuán)注，劑量 1.5mL/kg，流率 2.0mL/s，總劑量不超過 100mL，延時(shí) 60s 掃描。腫瘤CT 分期標(biāo)準(zhǔn)按 Dukes分期，Ⅰ期 3 例，Ⅱ期 16 例，Ⅲ期41 例，Ⅳ期 2 例。CT 征象評定采用雙盲法，由 2 位從事腹部放射診斷的主治醫(yī)生分別進(jìn)行，有分歧時(shí)由上級醫(yī)生評定。CT征象評定與免疫組化評定分別單獨(dú)進(jìn)行。

1.3 免疫組織化學(xué)染色

采用 EliVisinn 二步法檢測大腸癌組織中 Survivin 的表達(dá)，用 PBS替代一抗作陰性對照，用已知陽性切片作陽性對照。

（l）常規(guī)石蠟連續(xù) 4μm 切片，二甲苯脫蠟，經(jīng)梯度酒精（100%-95%-90%-80%）水化。

（2）進(jìn)行組織抗原修復(fù)，采用檸檬酸緩沖液高溫高壓抗原修復(fù)法。取 pH=6.0 檸檬酸緩沖液 1500mL 于壓力鍋中，大火加熱直至沸騰；將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中。蓋上鍋蓋，扣上壓力閥，繼續(xù)加熱至噴氣，從噴氣開始計(jì)時(shí)，2min 后，壓力鍋離開熱源，冷卻至室溫，取出玻片，先用蒸餾水沖洗2 次，之后用 PBS（pH=7.4）沖洗 2 次，每次 3min。

（3）3% 過氧化氫去離子水孵育 5min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，PBS 沖洗 3 次。

（4）每張切片加一滴第一抗體 ；鼠抗人 Survivin 單克隆抗體，室溫下孵育 60min。

（5）PBS 沖洗 3 次，每次 5min。

（6）滴加 IgG 抗體一 HRD 多聚體，室溫下孵育 15min。PBS 沖洗 3 次，每次 2min。

（7）應(yīng)用 DAB 溶液顯色 1～4min，顯微鏡下控制顯色程度，自來水沖洗，終止反應(yīng)。

（8）蒸餾水沖洗，蘇木素復(fù)染，自來水沖洗返藍(lán)。

（9）切片用梯度酒精（80%-90%-95%-100%）脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。

（10）Olympus顯微鏡觀片。

1.4 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定

免疫組化判定標(biāo)準(zhǔn)：以細(xì)胞膜、細(xì)胞核或胞漿出現(xiàn)棕色顆粒為陽性。癌組織 Survivin 蛋白主要定位于大腸癌細(xì)胞細(xì)胞核或細(xì)胞漿，為棕黃色顆粒，呈異質(zhì)性染色。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

采用卡方檢驗(yàn)，分別分析 Survivin 的表達(dá)與大腸癌的CT表現(xiàn)（腫瘤部位、腫瘤大小、侵潤程度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes 分期）的相關(guān)性。以 P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，所有統(tǒng)計(jì)分析均采用計(jì)算機(jī) SPSS13.O 軟件進(jìn)行檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 大腸癌的CT分期與Survivin表達(dá)相關(guān)性（見表1）

Survivin 在結(jié)直腸癌中的表達(dá)與腫瘤大小、腫瘤位置、無顯著性差異（均 P＞0.05），與 Dukes 分期、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著差異（均 P＜0.05）。

表1 大腸癌的 CT 分期與 survivin 表達(dá)相關(guān)性

3 討論

控制侵襲、防止浸潤、轉(zhuǎn)移是當(dāng)今腫瘤研究的重要課題之一[4]。侵襲和轉(zhuǎn)移是影響結(jié)直腸癌患者治療效果和預(yù)后的重要因素。本研究用免疫組化染色法檢測原發(fā)腫瘤灶中 Survivin 的表達(dá)并與 CT 分期對照，發(fā)現(xiàn)隨大腸癌分期增加 Survivin 的陽性表達(dá)百分率逐漸增加。深入探討它們之間的作用機(jī)制，對闡明和阻斷腫瘤轉(zhuǎn)移的形成具有重要價(jià)值。Survivin 在結(jié)直腸癌中的表達(dá)與腫瘤大小、腫瘤位置無明顯相關(guān)，與 Dukes分期、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)關(guān)系，表明不論其病理分化程度、腫瘤大小、位置及CT病灶強(qiáng)化程度如何，均應(yīng)積極進(jìn)行術(shù)后治療，早期預(yù)防轉(zhuǎn)移及侵襲的發(fā)生，而 Dukes分期大，周圍脂肪浸潤及淋巴結(jié)腫大預(yù)示預(yù)后較差[5-8]。隨著科學(xué)的發(fā)展和研究的深入，在分子水平結(jié)合大體影像學(xué)表現(xiàn)對大腸癌的預(yù)后提供新的方向和思路，符合當(dāng)前影像學(xué)發(fā)展的方向，我們將做進(jìn)一步的努力。

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Correlation of CT Appearance with Survivin Expression in Colorectal Cancer

CAI Sheng-yana,WANG Le-qiub, DAI Hai-pingc,DONG Xiangmeic
a.Radiology Department;b.ENT;c. Pathology Department,Hongqi Hospital of Mudanjiang Medical College,Mudanjiang Heilongjiang 157013,China

ObjectiveTo study the correlation between 64-slice CT staging, appearance and Survivin expression in colorectal cancer.Methods62 cases of colorectal cancer proved by surgery and pathology were examined with abdominal CT scan before operation.The expression of Survivin was estimated with SP immunohistochemical technique individually.The relation between CT staging, appearance and expression of survivin was retrospectively analyzed.ResultsSurvivin positive expression was 80.6%.According with the Ducks staging increasing, Survivin expression between Ducks staging, invasion of adjacent fat and lymph nodes metastases had significant difference (P＜0.05).ConclusionSurvivin combine with CT scan before operation, can play important role in invasion and metastases of colorectal cancer, judge prognosis and choose correct therapy.

CT; colorectal cancer; Survivin; immunhistochemistry

R735.34

B

10.3969/j.issn.1674-1633.2011.06.034

1674-1633(2011)06-0095-02

2010-12-07

作者郵箱：mdjwjf@qq．com