賈 麗

黑龍江省大慶油田總醫(yī)院集團(tuán)龍南醫(yī)院檢驗(yàn)科，黑龍江 大慶 163453

梅毒是一種慢性性傳播疾病，由梅毒螺旋體感染所致，嚴(yán)重威脅著患者的生命健康。梅毒螺旋體傳播途徑主要包括接吻、性交、哺乳等方式[1-2]。梅毒螺旋體的檢測(cè)方法很多，為尋找一種快速、準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)單的檢測(cè)方法，筆者對(duì)我院2008年1月～2011年3月收集的1548份血清采用不同方法進(jìn)行了檢驗(yàn)，現(xiàn)將臨床資料及結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

本組資料均來(lái)自我院2008年1月～2011年3月住院、門(mén)診患者以及健康體檢人員，共收集血清1548份，其中，男752例，女796例；年齡18～65歲。

1.2 儀器與制劑

TECAN全自動(dòng)酶免疫分析儀（帝肯公司，瑞士）；人梅毒螺旋體IgM（TP IgM）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒（上?？迫A生物工程股份有限公司，中國(guó)）；快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)（RPR）試劑盒（上海實(shí)業(yè)科華生物技術(shù)有限公司，中國(guó)）；梅毒螺旋體抗體被動(dòng)顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）試劑（日本富士瑞必歐株式會(huì)社，日本）。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法 取靜脈血2 ml，室溫下自然凝固10～20 min，3000 r/min離心20 min，仔細(xì)收集上清。在酶標(biāo)包被板上進(jìn)行樣本稀釋，稀釋后各孔濃度分別為90、60、30、15、7.5 μg/L，加樣量均為 50 μl，在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加入樣品稀釋液40 μl，然后再加入待測(cè)樣品10 μl，輕輕晃動(dòng)混勻。封板膜封板后37℃溫育30 min，洗滌，加酶，溫育，再次洗滌后，每孔均依次加入顯色劑A、B各50 μl，輕輕震蕩混勻，37℃下避光顯色15 min后于每孔加終止液50 μl，終止反應(yīng)。15 min內(nèi)進(jìn)行測(cè)定，以空白孔調(diào)零，450 nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。

1.3.2 快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)法 室溫下將0.05 μl待檢血清，加入檢測(cè)卡片上的圓圈內(nèi)，使用專用針頭將RPR抗原向待測(cè)血清中滴入1滴，使用RPR旋轉(zhuǎn)儀將紙卡以水平方向進(jìn)行旋轉(zhuǎn)，持續(xù)8 min，立即在光線充足處觀察是否出現(xiàn)黑色凝集顆粒或絮片，如出現(xiàn)，則為陽(yáng)性。根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，根據(jù)酶標(biāo)儀讀數(shù)判定結(jié)果。

1.3.3 梅毒螺旋體抗體被動(dòng)顆粒凝集試驗(yàn)法 在微量反應(yīng)板的第 1～4 孔中分別加入 100、25、25、25 μl標(biāo)本稀釋液，取待檢血清25 μl加入第1孔中，以2倍逐級(jí)稀釋至第4孔，于第3孔中滴入未致敏粒子25 μl，第4孔中滴入致敏粒子25 μl，使用微量振蕩器將其震蕩混合30 s，加蓋，水平靜置于室溫下2 h。顯微鏡下觀察，粒子聚集成紐扣狀，呈現(xiàn)出圓形，邊緣平滑，為陰性；粒子成小環(huán)狀，邊緣平滑，為弱陽(yáng)性；粒子形成大環(huán)，邊緣雜亂，為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料數(shù)據(jù)采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

1548例患者中，以TPPA法檢出梅毒螺旋體陽(yáng)性16例為金標(biāo)準(zhǔn)；RPR試驗(yàn)檢測(cè)假陰性3例，假陰性率為18.75%，ELISA試驗(yàn)檢測(cè)未出現(xiàn)假陰性，兩者率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。以TPPA法檢測(cè)梅毒螺旋體陰性1532例為金標(biāo)準(zhǔn)；RPR試驗(yàn)檢測(cè)假陽(yáng)性2例，假陽(yáng)性率為0.13%，ELISA試驗(yàn)檢測(cè)假陽(yáng)性1例，假陽(yáng)性率為0.07%，兩者比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表1。

表1 ELISA、RPR與TPPA法檢測(cè)梅毒螺旋體結(jié)果的比較[n（%）]

3 討論

近年來(lái)隨著西方自由思想的傳播，國(guó)人的思想日益開(kāi)放，人口流動(dòng)加劇，社交活動(dòng)逐漸增加，性傳播疾病的發(fā)生率較改革開(kāi)放前有了明顯升高。在性傳播疾病中，梅毒是一種危害性較大的疾病[3]。梅毒由機(jī)體感染梅毒螺旋體所致，可通過(guò)性接觸和母嬰傳播。據(jù)統(tǒng)計(jì)，梅毒患者數(shù)量已居甲、乙類法定報(bào)告?zhèn)魅静≈械牡?位[4]。為防止梅毒的進(jìn)一步大量傳播，對(duì)梅毒螺旋體進(jìn)行篩查具有重要的意義。膜蛋白與溶血素是梅毒螺旋體的重要致病因子。感染梅毒螺旋體4～10周，人體血清中即可產(chǎn)生抗梅毒螺旋體抗原的特異性抗體以及抗類脂抗原的非特異性抗體[5-6]。目前，臨床上對(duì)梅毒螺旋體感染的檢測(cè)主要是對(duì)血清中梅毒抗體的檢測(cè)。一類為非特異性梅毒螺旋體抗體血清學(xué)試驗(yàn)，檢測(cè)血清中的非特異性類脂質(zhì)抗體。如RPR，此方法開(kāi)展早、應(yīng)用廣泛，但敏感性低[7]；本組資料中，RPR假陰性率為18.75%，準(zhǔn)確率低，可出現(xiàn)部分漏診情況，已越來(lái)越不適應(yīng)臨床篩查要求。另一類為特異性梅毒螺旋體抗體血清學(xué)試驗(yàn)，檢測(cè)抗梅毒螺旋體抗體。如TPPA，是目前診斷梅毒螺旋體的金標(biāo)準(zhǔn)[8]；本組中ELISA法與RPR法的假陽(yáng)性、假陰性率均以TPPA檢測(cè)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行計(jì)算。ELISA是近年研制并發(fā)展的一種血清學(xué)檢測(cè)方法，檢測(cè)梅毒螺旋體特異性抗體。ELISA法敏感性高[8]，本組資料中，ELISA試驗(yàn)未出現(xiàn)假陰性結(jié)果，假陽(yáng)性率為0.07%，說(shuō)明此法漏診情況基本不會(huì)發(fā)生，且其費(fèi)用低廉、操作簡(jiǎn)便、儀器讀取結(jié)果準(zhǔn)確，適用于臨床篩查。

綜上所述，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)梅毒螺旋體，TPPA為金標(biāo)準(zhǔn)，但ELISA法操作簡(jiǎn)單、費(fèi)用低廉、敏感性高，可用于臨床篩查，兩者配合應(yīng)用，可提高梅毒螺旋體感染診斷的特異性和敏感性，減少誤診和漏診的發(fā)生，為盡早制訂治療計(jì)劃提供可靠的依據(jù)。

[1]楊建蘭,郎亦波.不同血清血診斷方法檢測(cè)梅毒螺旋體的結(jié)果分析[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2009,8(5):90-91.

[2]王遠(yuǎn)流.妊娠期梅毒感染與母嬰阻斷的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2009,15(24):3767-3769.

[3]陳景云.不同檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)梅毒血清的比較研究[J].中國(guó)醫(yī)藥指南,2010,8(29):238-239.

[4]王靖,王麗,王春風(fēng).梅毒臨床診斷3種檢測(cè)方法的應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2008,7(3):19-20.

[5]關(guān)盼香,張桂芹.兩種方法檢測(cè)梅毒螺旋體抗體的比較[J].醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,2009,6(16):112-113.

[6]康健.兩種梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法的比較[J].中外醫(yī)學(xué)研究,2010,8(23):78.

[7]王育瑛,趙文波.TPPA和RPR聯(lián)合檢測(cè)梅毒抗體的實(shí)驗(yàn)研究[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2009,33(4):488-489.

[8]唐菁娟.三種梅毒檢測(cè)方法的比較分析[J].醫(yī)學(xué)信息,2010,23(10):3845.