陳基善 周秦

(永州職業(yè)技術(shù)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科 湖南永州 425000)

肺癌是最常見(jiàn)的肺原發(fā)性惡性腫瘤,占全世界癌癥死因的首位,近年來(lái)我國(guó)肺癌的發(fā)病率和病死率均迅速上升。肺癌早期癥狀不明顯,往往錯(cuò)過(guò)最佳的診斷和治療時(shí)機(jī),因而提高診斷水平是延長(zhǎng)患者存活期的關(guān)鍵。血小板源性生長(zhǎng)因子-BB(PDGF-BB)是重要的內(nèi)皮生成因子,具有促細(xì)胞分裂增殖、細(xì)胞趨化,以及血管收縮等生物效應(yīng),是決定腫瘤大小、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和預(yù)后的重要因素[1]。筆者對(duì)我院肺癌患者及肺部良性病變患者PDGF-BB的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),以探討其在肺癌發(fā)病機(jī)制中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

肺癌患者30例,均為我院2006年12月至2010年6月收治的住院患者,經(jīng)胸片、胸CT、痰脫落細(xì)胞學(xué)、纖維支氣管鏡活檢或胸腔積液脫落細(xì)胞學(xué)檢查確診,無(wú)放化療史,剔除病理診斷不明確者、高血壓病和糖尿病患者。其中男性25例,女性5例,年齡45～85歲,平均(60.7±9.4)歲。組織學(xué)分型:鱗癌11例,腺癌10例,小細(xì)胞癌9例。按1997年國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)非小細(xì)胞肺癌分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期:Ⅱ期4例、Ⅲ期12例、Ⅳ期14例。肺部良性病變患者30例,既往無(wú)心、肝、腎、肺等重要臟器疾病。家族中無(wú)腫瘤病史。其中男性24例,女性6例,年齡50～72歲,平均(59.2±8.5)歲。肺炎16例、支氣管擴(kuò)張癥8例、慢性支氣管炎6例。2組患者在年齡、性別方面無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)方面無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,具有可比性,P>0.05。

1.2 方法

1.2.1 血清PDGF-BB濃度的測(cè)定 清晨取2組患者的空腹靜脈血3mL,在不加入抗凝劑的情況下迅速離心10min分離出血清,置-70℃冷藏貯存待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)2組患者的血清PDGF-BB,PDGF-BB定量ELISA試劑盒購(gòu)自上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司,操作步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

表1 2組患者血清及組織中PDGF-BB檢測(cè)比較(±s)

表1 2組患者血清及組織中PDGF-BB檢測(cè)比較(±s)

注:觀察組與對(duì)照組相比,*P<0.05

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1.2.2 免疫組織化學(xué)染色 免疫組織化學(xué)(SABC法)檢測(cè)PDGF-BB鏈的表達(dá)水平。麥默通穿刺活檢標(biāo)本和術(shù)后切除標(biāo)本經(jīng)10%多聚甲醛固定后,石蠟包埋,制成4μm切片,將固定切片置于60℃恒溫箱中烘烤30min,切片常規(guī)脫蠟水化,3%雙氧水即用型,室溫10min滅活內(nèi)源性酶;檸檬酸緩沖液進(jìn)行高溫高壓抗原修復(fù),山羊血清封閉非特異性抗原,滴加一抗?jié)窈袃?nèi)4℃過(guò)夜,依次滴加山羊抗兔IgG-HRP多聚體,蘇木素復(fù)染,脫水、中性樹(shù)膠封固。以用0.1mol/L PBS代替一抗作為陰性對(duì)照,選已知陽(yáng)性的切片作為陽(yáng)性對(duì)照。兔抗人PDGF-BB抗體和SABC免疫組化試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司,儀器為Elecys 2010全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。

1.3 陽(yáng)性結(jié)果判定方法

PDGF-BB的表達(dá)先在在X400倍視野下每張切片隨機(jī)觀察10個(gè)視野,根據(jù)細(xì)胞染色程度評(píng)分:染色深度以多數(shù)細(xì)胞為準(zhǔn),無(wú)著色為0,淺著色為1,深著色為2;再為切片中陽(yáng)性著色范圍評(píng)分:無(wú)著色為0,著色<1/3為1,著色＞1/3為2,彌漫著色為3,最后將上述2項(xiàng)得分相加,得分≥3為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件。記數(shù)資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間計(jì)量資料采用t檢驗(yàn),P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組患者的血清PDGF-BB水平為(378.56±34.26)pg/mL、PDGF-BB鏈陽(yáng)性表達(dá)率分別為66.7%(20/30),均顯著高于對(duì)照組,P<0.05,見(jiàn)表1。

3 討論

肺癌為肺部原發(fā)性惡性腫瘤,是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,死亡率極高,且其發(fā)病率和死亡率均呈上升趨勢(shì)。早期肺癌不易早發(fā)現(xiàn),對(duì)該病如能做到早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療,預(yù)后效果很好[2]。PDGF主要由血小板、部分腫瘤細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等產(chǎn)生,與腫瘤血管生成、腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。正常組織內(nèi)PDGF的表達(dá)受到嚴(yán)格的調(diào)控。本研究結(jié)果表明肺癌患者血清和組織中的PDGF-BB的水平均顯著高于肺部良性病變組,P<0.05。這說(shuō)明PDGF-BB參與了肺癌血管的形成,有利于形成有功能的新生血管系統(tǒng),從而間接促進(jìn)了腫瘤的生長(zhǎng)。其在肺癌組織中的高表達(dá),說(shuō)明PDGF能夠促進(jìn)結(jié)締組織間質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng),細(xì)胞分裂增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生V型膠原,調(diào)節(jié)Ⅲ型及Ⅳ型膠原的合成,其在加速腫瘤細(xì)胞增殖,促進(jìn)腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移。此外,PDGF抑制癌細(xì)胞凋亡和使5-Fu抗腫瘤敏感性降低,并與其受體結(jié)合可提高細(xì)胞外機(jī)質(zhì)(ECM)的降解[3]。綜上所述,隨著肺癌發(fā)病率的不斷上升,只有不斷提高肺癌的診斷水平才能盡量使患者得到有效的治療。PDGF-BB在肺癌的發(fā)生發(fā)展中可能起著重要作用,在腫瘤的診斷和預(yù)后判斷中起作用,其表達(dá)的檢測(cè)有一定的臨床指導(dǎo)意義。但具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

[1]黃竹英,聶新民.血小板源性生長(zhǎng)因子在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2007,23(21):3167～3169.

[2]秦建文,周靜敏,馬淑萍.非小細(xì)胞肺癌血清VEGF和PDGF測(cè)定的臨床意義[J].天津醫(yī)藥,2007,35(12):897～899.

[3]周靜敏,馬淑萍,秦建文,等.肺癌患者血清細(xì)胞生長(zhǎng)因子及受體聯(lián)合檢測(cè)的臨床意義[J].中國(guó)腫瘤臨床,2006,33(18):1054～1060.