于 娟，王德華

（天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院婦產(chǎn)科，天津300052）

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，目前研究認(rèn)為，宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展與凋亡相關(guān)基因關(guān)系密切，Survivin是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制基因，它可能通過干擾腫瘤細(xì)胞凋亡和增殖平衡，促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生和進(jìn)展。抑癌基因的丟失、突變或失去功能，使激活的癌基因發(fā)揮作用而致癌，抑癌基因PTEN可能通過去磷酸化參與細(xì)胞調(diào)控從而促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展。檢測宮頸組織中Survivin基因及PTEN基因的表達(dá)對早期診斷宮頸癌及初步估計(jì)腫瘤的惡性潛能和預(yù)后有一定的應(yīng)用價(jià)值。本研究探討Survivin和PTEN與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系以及兩者之間的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 研究對象 收集天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院2007年7月至2009年7月門診活檢或住院手術(shù)病例宮頸標(biāo)本共100例，其中宮頸癌組織48例、宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）組織37例，CINⅠ12例，CINⅡ12例，CINⅢ13例，以及正常宮頸組織15例。宮頸癌包括鱗狀細(xì)胞癌40例、腺癌8例，按FIGO分期（2000年）：Ⅰ期20例，Ⅱ期及以上28例；其中手術(shù)28例：Ⅰ期20例，Ⅱa期5例，Ⅱb期3例（新輔助化療），手術(shù)病理示發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者8例，未發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者20例；病理分化程度：高分化11例，中分化16例，低分化21例。所有100例病人取宮頸組織標(biāo)本前均未經(jīng)化療和放療。所有HE切片經(jīng)病理專家復(fù)核。3組病例的平均年齡（中位數(shù)）分別為宮頸癌組47.5歲，CIN組48歲，正常組織組49歲，3組病例年齡經(jīng)檢驗(yàn)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

1.2 方法 兔抗人Survivin多克隆抗體，兔抗人PTEN多克隆抗體及S-P法免疫組化試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。采用免疫組化SP法，實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說明書進(jìn)行，用PBS代替一抗作為陰性對照，采用生物公司提供的陽性切片為陽性對照。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) 染色強(qiáng)度：未著色或與背景一致淺棕色為0分，著色淺為1分，中度著色為2分，著色深為3分。陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)：高倍鏡（×400）下隨機(jī)選取10個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)10個(gè)細(xì)胞。取平均值作為陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。陽性細(xì)胞數(shù)<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，>50%為3分。根據(jù)這兩項(xiàng)指標(biāo)的積分?jǐn)?shù)分為4級(jí)，即陰性 (-)為0分，弱陽性(+)為 1～2 分，陽性 (++)為 3～4 分，強(qiáng)陽性(+++)為 5～6 分。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 13.0軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用χ2檢驗(yàn)，F(xiàn)isher’s精確概率法及Spearman相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 Survivin、PTEN 在正常宮頸組織、CIN、宮頸癌組織中的表達(dá) 由表1可知，Survivin在3組間的表達(dá)差異有顯著性 (χ2=29.420，P<0.05)；宮頸癌組Survivin表達(dá)高于正常宮頸組及CIN組。PTEN免疫組化陽性產(chǎn)物呈棕黃色細(xì)顆粒狀,定位于細(xì)胞核內(nèi)。3 組間差異有顯著性(χ2=19.337，P<0.05)；宮頸癌組PTEN表達(dá)低于正常宮頸組及CIN組。

表1 Survivin、PTEN在正常宮頸、CIN及宮頸癌組織中的表達(dá)Tab 1 Expression of Survivin,PTEN in normal cervix,CIN and cervical carcinoma

2.2 宮頸癌組織中Survivin、PTEN的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系 由表2可以發(fā)現(xiàn)Survivin蛋白表達(dá)陽性率在Ⅱb～Ⅳ期組高于Ⅰ～Ⅱa期組 (χ2=8.817，P<0.05)，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(χ2=4.000，P<0.05)；宮頸癌中 Survivin 的表達(dá)與年齡、分化程度及組織類型均無關(guān)(P>0.05)。PTEN的表達(dá)與宮頸癌的臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)（P<0.05），但在不同年齡PTEN的表達(dá)卻無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），Survivin、PTEN 的表達(dá)異常均可以作為預(yù)后不良的標(biāo)志。

2.3 宮頸癌組織中Survivin與PTEN蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析 采用Spearman秩相關(guān)對48例宮頸癌組織Survivin與PTEN進(jìn)行相關(guān)性分析，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，Survivin與PTEN的相關(guān)系數(shù)rs=-0.753(P<0.05)，說明宮頸癌組織中Survivin與PTEN的表達(dá)成負(fù)相關(guān)。

表2 宮頸癌患者Survivin、PTEN的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系Tab 2 The relationship between clinicopathological parameters and expression of survivin,PTEN in cervical carcinoma

3 討論

3.1 Survivin與宮頸癌 細(xì)胞增生和凋亡的平衡一旦被打破，細(xì)胞凋亡被抑制，將導(dǎo)致細(xì)胞過度增生，變異細(xì)胞不能自主凋亡，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。Survivin基因是一種結(jié)構(gòu)獨(dú)特的凋亡抑制蛋白（IAP）家族成員，通過直接或間接抑制凋亡基因及化療藥物等引起的細(xì)胞凋亡效應(yīng)蛋白酶caspase-3、caspase-7的活化來阻斷其引起的細(xì)胞凋亡過程[1]。Survivin基因在正常組織中不表達(dá)或低表達(dá)，而在幾乎所有被研究的腫瘤組織中呈高表達(dá)[2]。Survivin蛋白主要定位于腫瘤細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核上，為粗細(xì)不一的棕黃色顆粒，本資料顯示從正常組織→CIN→宮頸癌，其陽性表達(dá)逐漸增高，且臨床分期越晚其Survivin陽性表達(dá)率越高。此外其表達(dá)與宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移也有關(guān)系，這與張保華等[3]的研究結(jié)果基本一致；也與Survivin在其他腫瘤中的研究結(jié)果一致。Survivin基因表達(dá)預(yù)示腫瘤有較高的侵襲性和不良預(yù)后，在一定程度上反映了宮頸癌的惡性程度[4]。其原因主要可能是因?yàn)镾urvivin陽性的子宮頸癌細(xì)胞對于放射治療和化療有較高的耐受性，從而導(dǎo)致子宮頸癌患者對放射治療及化療抵抗。以上特點(diǎn)使Survivin可能成為判斷腫瘤患者預(yù)后及輔助腫瘤診斷的一項(xiàng)重要指標(biāo)，也為腫瘤治療提供了新的靶點(diǎn)。

3.2 PTEN與宮頸癌 PTEN基因亦稱MMAC1基因，是繼p53基因之后發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤抑制基因，也是第一個(gè)具有雙特異性磷酸酶活性產(chǎn)物的抑癌基因,在細(xì)胞生長、凋亡、黏附、遷移、浸潤等方面具有重要作用，該基因的突變失活與人類多數(shù)惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)而一直被人們所關(guān)注。最近的研究表明PTEN對維持染色體穩(wěn)定性起到重要作用，泛素化調(diào)節(jié)則賦予PTEN通過核膜的能力[5]。研究表明宮頸癌組織中PTEN陽性表達(dá)率明顯低于癌旁宮頸組織和正常宮頸組織，提示PTEN等位基因缺失和突變可能參與宮頸癌的發(fā)生。這與本研究的結(jié)果PTEN的表達(dá)隨著宮頸癌的發(fā)展而降低相一致。PTEN的表達(dá)異?？梢宰鳛轭A(yù)后不良的標(biāo)志。

3.3 宮頸癌中Survivin與PTEN的相關(guān)性 在Survivin與PTEN的關(guān)系研究中文獻(xiàn)較少，張培榮等[6]的研究提示：Survivin與PTEN在宮頸鱗狀細(xì)胞癌的早期發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。抑癌基因PTEN的失活可能通過P13K/Akt途徑上調(diào)Survivin的表達(dá)，使之發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、血管生長和穩(wěn)定，更有利于腫瘤生長和侵襲。PTEN的失活和Survivin的過表達(dá)是宮頸癌進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的重要環(huán)節(jié)，其聯(lián)合可以作為宮頸癌診斷及判斷預(yù)后的標(biāo)志物。

［1］Zaffarni N,Costa A,Pennati M,et al.Survivin is highly expressed and promotes cell survival in malignant peritoneal mesothelioma[J].Cell Oncol,2007,29(6):453

［2］StauberRH,MannW,KnauerSK.Nuclearandcytoplasmicsurvivin:molecular mechanism,prognostic,and therapeutic potential[J].Cancer Res,2007,67(13):5999

［3］張保華，盧實(shí)，王澤華.子宮頸癌組織中survivin基因的表達(dá)及其臨床意義[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2004，20(4):384

［4］李素文，朱寶申，孫麗娟，等.Survivin在宮頸癌組織中表達(dá)規(guī)律及臨床意義[J].河北醫(yī)藥，2009，31（14）：1743

［5］Baker SJ.PTEN enters the nuclear age[J].Mol Cell,2007,128(1):25

［6］張培榮，鄭錦花，王艷萍，等，Survivin與PTEN蛋白在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2007，12（4），271