伍光超

廣西古方藥業(yè)有限公司，廣西 南寧 530221

復(fù)方健腎酒由淫羊藿，肉蓯蓉，金櫻子，枸杞子等中藥組成，具有補(bǔ)腎助陽(yáng)作用。適用于腎陽(yáng)不足所致的腰膝冷痛，頭暈耳鳴，氣短乏力，精神不振，夜尿頻多。方劑中淫羊藿的主要成分為淫羊藿苷［1］。本研究建立了淫羊藿苷的含量測(cè)定方法，旨在為該藥酒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器和材料

1.1 儀器

島津LC－10A高效液相色譜儀;威瑪龍色譜工作站;島津UV－2450紫外分光光度儀;梅特勒－托利多AB265－S型分析天平;SYZ－A石英亞沸高純水蒸餾器 (江蘇信達(dá)儀器廠)。

1.2 材料

乙腈 (天津四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司色譜純)，淫羊藿苷 (中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110737－200312，含量測(cè)定用)，復(fù)方健腎酒 (本公司自制，批號(hào)為:090301、090302、090303)及淫羊藿的陰性樣品。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為島津 VP－ODS C18柱 (5?m，4.6mm X 150mm);流動(dòng)相為乙腈－0.1%磷酸水溶液 (25∶75)，檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm［2］。流速1.0ml/min;柱溫:室溫。理論板數(shù)按淫羊藿苷不低于6000，此條件下淫羊藿苷與其他成分分離度不低于1.5。

2.2 溶液的配置

2.2.1 對(duì)照品溶液的配置 精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品適量，加甲醇配制成每1ml含30μg的溶液，即得。

2.2.2 樣品溶液的制備 取內(nèi)容物2ml，置10ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按處方比例，以樣品生產(chǎn)方法制備淫羊藿的復(fù)方健腎酒，照樣品溶液方法制備陰性供試液。

2.3 測(cè)定方法

分別精密吸取對(duì)照品溶液、樣品溶液、陰性樣品溶液各20μl，注入高效液相色譜儀，按確定的色譜條件測(cè)定，淫羊藿苷與其他成分分離良好，陰性無(wú)干擾，如圖1～3。

2.4 線性關(guān)系的考察

精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品10.20mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取對(duì)照品溶液1，2，3，4，6ml分別置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件，分別進(jìn)樣20μl，測(cè)定，結(jié)果以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)回歸方程處理，方程為 Y=－11098+2256987x，r=0.9997?？梢姡蜣杰赵?.2040～1.2240μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

圖1 淫羊藿苷對(duì)照品色譜圖

圖2 復(fù)方健腎酒樣品色譜圖

圖3 復(fù)方健腎酒陰性樣品色譜圖

2.5 儀器精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取同一樣品溶液20μl，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定色譜峰面積，計(jì)算RSD值為0.7%，表明儀器精密度良好。

2.6 樣品溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)考察

精密吸取同一批樣品溶液 (批號(hào):090201)20μl，按樣品溶液制備方法制備樣品溶液，在2，4，6，8，24，48，72h時(shí)間間隔進(jìn)行分析，測(cè)定色譜峰面積，計(jì)算RSD值為0.55%，表明樣品溶液制備后72h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品 (批號(hào):090201)6份，按樣品溶液制備方法制備樣品溶液，測(cè)定含量進(jìn)行分析，結(jié)果平均含量為0.1304mg/ml，RSD為2.13%，表明本測(cè)定方法重復(fù)性好。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)考察

取已知準(zhǔn)確含量 (0.1304mg/ml)的樣品6分，每份取1ml，置10ml量瓶中，精密加入1ml淫羊藿苷對(duì)照品溶液(0.1224mg/ml)，加按樣品溶液制備方法制備，分別注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件下測(cè)定淫羊藿苷峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。表明，本方法回收率良好。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)考察結(jié)果

2.9 樣品的含量測(cè)定

另取不同批號(hào)的復(fù)方健腎酒3批，按上述方法測(cè)定，結(jié)果見表2。

表2 不同批號(hào)的復(fù)方健腎酒含量測(cè)定結(jié)果

3 總結(jié)

復(fù)方健腎酒方中含藥味較多，其質(zhì)量控制存在困難，淫羊藿為方中主藥，測(cè)定其主要成分淫羊藿苷含量，對(duì)控制本品質(zhì)量，更好地保證臨床療效具有重要意義。為此，本研究以淫羊藿苷的含量作為測(cè)定指標(biāo)，建立方法。總之，結(jié)果表明，HPLC測(cè)定復(fù)方健腎酒中淫羊藿苷含量的方法具有簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。

［1］單娜，路金才，王晶.朝鮮淫羊藿的研究狀況［J］.中南藥學(xué)，2008，6(6):722－726.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典.I部［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:1.