楊素芹 劉文惠 張繼敏 曹德英

近年來對黃芪的研究越來越深入，更多地集中在其對補氣、利尿作用方面，其被用來治療糖尿病、腎病、糖尿病腎病、黃斑病變和動脈硬化癥等。腎康超微粉膠囊包含了黃芪等十一味草藥的復(fù)方中藥制劑?！吨袊幍洹芬?guī)定黃芪藥材的定量指標(biāo)成分為黃芪甲苷［1］。本研究應(yīng)用高效液相色譜-紫外檢測法對黃芪提取物中的黃芪甲苷進行檢測，以求建立一種高效、靈敏、簡便、經(jīng)濟的黃芪甲苷的檢測方法。對黃芪提取物中黃芪甲苷的含量進行測定，為開發(fā)黃芪甲苷新制劑提供試驗基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 Waters高效液相色譜儀 (美國 Waters公司)。黃芪甲苷對照品(上海融禾醫(yī)藥科技有限公司，批號:061230);腎康超微粉膠囊提取物(含黃芪甲苷0.5%)，(自制);甲醇、乙腈為色譜純(美國TEDIA公司);水為超純水。

1.2 對照品溶液制備 精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解并配成濃度101.2 μg/ml的貯備液。

1.3 樣品溶液制備 精密稱取3.024 g腎康超微粉膠囊內(nèi)容物，置索氏提取器中以甲醇提取6 h，提取液蒸干，殘渣用飽和氯化鈉溶液20ml溶解，用以水飽和的正丁醇溶液提取6次，合并提取液，減壓濃縮至20ml，用1%氫氧化鈉溶液洗滌2次，再用正丁醇飽和水洗至中性。殘渣用甲醇溶解并稀釋至5ml，作為供試液［2］。

1.4 色譜條件 色譜柱:色譜柱規(guī)格:KiomasilC18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm);流動相:乙腈:水(32:68);流速:1.0ml/min;檢測波長 203 nm;柱溫:30℃;進樣量:20 μl。

1.5 色譜行為 按上述儀器和實驗條件，將供試品溶液、陰性對照溶液、黃芪甲苷對照品溶液分別注入液相色譜儀測定。結(jié)果供試品色譜圖中有與對照品相同保留時間的色譜峰(圖1、2)，且基線平穩(wěn)、分離度好，而陰性對照在此保留時間無色譜峰(圖3)。保留時間約14min。

2 結(jié)果

2.1 線性關(guān)系考察 分別精密吸取上述對照品溶液0.2、0.5、0.8、1.0、2.0、5.0、8.0ml至 10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別進樣20 μl。以峰面積為縱坐標(biāo)，以黃芪甲苷進樣量為橫坐標(biāo)進行線性回歸，得回歸方程為:Y=4437 .5X+1407.7，相關(guān)系數(shù) r=0.9999(n=7)。黃芪甲苷在 0.2024～101.2 μg/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.2 精密度試驗 精密吸取樣品溶液各20 μl進樣，連續(xù)重復(fù)6次。測得各次峰面積，計算RSD分別為0.02%。精密度符合規(guī)定。

2.3 重現(xiàn)性試驗 精密量取同一批腎康超微粉膠囊，按照樣品溶液制備項下方法平行制備6份供試品溶液，分別進樣。結(jié)果測得黃芪甲苷的平均含量為30.25 μg/ml，RSD為 2.37%。

2.4 穩(wěn)定性試驗 在室溫下取樣品溶液 20 μl進樣，于 0、3、6、9、12、24、48 h各測定1次。黃芪甲苷色譜峰面積無明顯改善，RSD為2.46%。表明黃芪甲苷溶液至少在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 回收率的試驗 精密量取上述已知含量的腎康超微粉膠囊提取物溶液6份，每份約含黃芪甲苷0.453mg，然后再分別精確加入 20.24 μg/ml的黃芪甲苷對照品溶液 1.0ml，按照樣品溶液制備項下方法制備并測定，平均回收率為97.42%，RSD為 2.11%。

2.6 樣品含量的測定 取3批腎康超微粉膠囊按樣品溶液制備項下方法制備測定。見表1。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)對照

圖2 陰性對照

圖3 樣品溶液

表1 黃芪甲苷的含量的測定結(jié)果

3 討論

近年來較多研究者使用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法測定中藥中黃芪甲苷含量［3，4］，本文使用此法進行腎康膠囊中黃芪甲苷的含量測定，結(jié)果符合定量分析的要求。

本研究所建立的高效液相-紫外檢測法，對腎康超微粉膠囊提取物中黃芪甲苷的含量進行測定，方法快速簡便，精密度和準(zhǔn)確度都符合定量分析的要求，且具有經(jīng)濟適用性，適合腎康超微粉膠囊提取物中黃芪甲苷的含量測定。

1 中華人民共和國藥典編委會.中華人民共和國藥典.一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005.213.

2 金毅群，隋軍，賈蘭秀.HPLC蒸發(fā)光散射檢測器測得芪丹健腦顆粒的黃芪甲苷的含量.中醫(yī)藥學(xué)報，2006，2:22-23.

3 張錦文，寥梅，張勇慧，等.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法測定參芪扶正注射液中黃芪甲苷含量.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2008，3:104-106.

4 董紅紅，張麗增，郭小青，等.HPLC-蒸發(fā)光散射檢測法測定貞芪扶正顆粒中黃芪甲苷的含量.中國藥房，2008，6:444-446.