龔大春,錢(qián) 微,史小娜

附紅細(xì)胞體病是由附紅細(xì)胞體寄生于人、動(dòng)物的紅細(xì)胞表面、血漿及骨髓內(nèi)所引起的以發(fā)熱、貧血、黃疸為主要臨床特征的人獸共患傳染病[1]。附紅細(xì)胞體病的出現(xiàn)在我國(guó)雖然只有30年的歷史[2]。但近年附紅細(xì)胞體病在人、動(dòng)物呈逐年上升的趨勢(shì),而其傳播方式還不十分清楚,據(jù)報(bào)道[3]附紅細(xì)胞體可能經(jīng)吸血昆蟲(chóng)、節(jié)肢動(dòng)物、血源、垂直和接觸等方式傳播,至于經(jīng)消化道傳播研究較少,消化道的主要活性物質(zhì)膽鹽對(duì)附紅細(xì)胞體的影響尚未見(jiàn)報(bào)道,為此開(kāi)展了本試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種 選擇確診患附紅細(xì)胞體病,無(wú)并發(fā)癥且未用任何藥物治療,鏡檢RBC的附紅細(xì)胞體感染率在75%以上的病豬,無(wú)菌靜脈采血,按1∶10加入3.8%的檸檬酸鈉抗凝劑,混勻分裝置于4℃冰箱中暫存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 主要試劑儀器 豬膽鹽,規(guī)格25g,北京雙旋微生物制品廠;pH計(jì)(PB-10),電子天平,北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司;顯微鏡,恒溫培養(yǎng)箱,稱(chēng)量瓶等。

1.2 方法

1.2.1 膽鹽對(duì)附紅細(xì)胞體活力的影響 電子天平稱(chēng)取適量的豬膽鹽用滅菌生理鹽水配成0.003%、0.03%、0.1%、0.2%、0.3%、3%豬膽鹽溶液。分別取3 mL上述6種溶液于6個(gè)潔凈的稱(chēng)量瓶中,再在每瓶中加 1 mL的附紅細(xì)胞體菌種混勻,置于37℃培養(yǎng)箱中,連續(xù)觀測(cè)6 h,每1 h觀測(cè)1次,在24 h時(shí)最后觀察1次,同時(shí)設(shè)生理鹽水對(duì)照。

1.2.2 附紅細(xì)胞體活力的判定標(biāo)準(zhǔn) 其活性按下列標(biāo)準(zhǔn)判定,附紅細(xì)胞體絕大多數(shù)吸附在紅細(xì)胞上,少數(shù)游離在血漿中的附紅細(xì)胞體前沖后撞的記為“5+”,在血漿中呈靈活自如的上下、左右、前后閃動(dòng),旋轉(zhuǎn),振擺的記為“4+”,旋轉(zhuǎn)、振擺和閃動(dòng)較弱的記為“3+”,僅能見(jiàn)到滾動(dòng)或擺動(dòng)的記為“2+”,活動(dòng)很微弱的記為“+”,未發(fā)現(xiàn)附紅細(xì)胞體活動(dòng)的記為“-”。

2 結(jié) 果

膽鹽對(duì)附紅細(xì)胞體活力的影響見(jiàn)表1。

表1 膽鹽在不同時(shí)間對(duì)附紅細(xì)胞體活力的影響Table 1 The effect of cholic acid sodium salt on Eperythrozoon vigor

表1顯示,3%的膽鹽在2 h內(nèi)能顯著刺激附紅細(xì)胞體活力,2 h后活力下降,至6 h時(shí)活力喪失。0.3%和0.2%的膽鹽在4 h內(nèi)刺激附紅細(xì)胞體活力,4 h后活力下降,到24 h時(shí)其活力微弱。0.1%的膽鹽保持24 h附紅細(xì)胞體活力,其中在3-4 h活力增強(qiáng)。0.03%和0.1%膽鹽對(duì)活力的影響基本相同;0.003%的膽鹽在3 h內(nèi)對(duì)其活力無(wú)影響,3 h后其活力減弱。

3 討 論

試驗(yàn)結(jié)果顯示,0.1%的膽鹽能保持附紅細(xì)胞體的活力,且在作用3-4 h時(shí)其活力增強(qiáng);高濃度的膽鹽短時(shí)間作用可以刺激附紅細(xì)胞體的活力,長(zhǎng)時(shí)間作用可以致死附紅細(xì)胞體;低濃度的膽鹽短時(shí)間作用對(duì)附紅細(xì)胞體的活力無(wú)影響,長(zhǎng)時(shí)間作用能抑制附紅細(xì)胞體的活力,但不能將附紅細(xì)胞體致死;低于0.1%的膽鹽長(zhǎng)時(shí)間作用后能抑制附紅細(xì)胞體的活力。

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[4-7]人體小腸環(huán)境膽鹽的濃度為0.03%～0.3%,而關(guān)于動(dòng)物小腸環(huán)境膽鹽濃度還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。因此本試驗(yàn)設(shè)計(jì)的膽鹽濃度范圍比較寬廣,為0.003%～3%。從理論上分析,人和動(dòng)物十二指腸膽鹽濃度不會(huì)相差太遠(yuǎn),本試驗(yàn)?zāi)扄}的濃度范圍應(yīng)該覆蓋了動(dòng)物十二指腸膽鹽的濃度。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[8]膽鹽對(duì)細(xì)菌有抑制作用,而對(duì)附紅細(xì)胞體的影響未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)顯示,膽鹽濃度在0.03～0.3%范圍內(nèi),對(duì)附紅細(xì)胞體的活力有不同程度的影響,在0.1%時(shí)能保持附紅細(xì)胞體的活力,在其它濃度對(duì)附紅細(xì)胞體活力有不同程度的抑制作用。

膽汁是由水、無(wú)機(jī)鹽、膽汁酸、膽固醇、膽色素、脂肪酸、卵磷脂等組成。在動(dòng)物體內(nèi)膽鹽是由膽汁酸與甘氨酸或?；撬峤Y(jié)合形成的,市售膽鹽是膽汁酸的鈉鹽或鉀鹽。膽鹽的主要抑菌物質(zhì)是牛磺膽酸、甘氨酸和去氧膽酸等,對(duì)革蘭陽(yáng)性桿菌有很強(qiáng)的抑制能力,而對(duì)革蘭陰性桿菌僅有輕微的抑制能力。膽鹽的抑菌機(jī)理主要是使細(xì)菌的細(xì)胞膜損壞或者菌體裂解,對(duì)某些細(xì)菌有溶解作用,而對(duì)附紅細(xì)胞體的作用機(jī)理尚需進(jìn)一步探討。

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