蔣 妮，鮑 旭，高 萌，何 艷，田 舸，田 燕

(1.大連兒童醫(yī)院 藥劑科，遼寧 大連 116012；2.大連醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 大連 116044)

頭孢克肟(Cefixime)，化學(xué)名為7{[2-氨基-4-噻唑基(羧甲氨基)]亞胺-乙?；?-氨基-3-乙烯基-8-氧-5-硫雜-卜氮雜二環(huán)[4.2.0]-2-辛烯-2-羧酸[1]，對(duì)α-溶血性鏈球菌、 溶血性鏈球菌和肺炎球菌有強(qiáng)大抗菌作用，是一種抗菌譜廣，抗菌作用強(qiáng)，血藥濃度維持時(shí)間長(zhǎng)，對(duì)多種內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定，可口服的第三代頭孢菌素類(lèi)抗生素[2]。目前，頭孢克肟的劑型主要有膠囊劑、片劑、分散片、咀嚼片、顆粒劑、干混懸劑等，但藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)提示口服頭孢克肟各劑型相對(duì)生物利用度差異無(wú)顯著性意義(P>0.05)[3]。

由于頭孢克肟在水中溶解度小、對(duì)胃腸道副作用較大，尤其是空腹時(shí)可引起惡心、嘔吐、腹瀉等，使其應(yīng)用受到限制，為此根據(jù)肛門(mén)栓劑直腸給藥可以降低肝臟首過(guò)效應(yīng)的原理研制頭孢克肟栓劑，通過(guò)改變給藥途徑的方法來(lái)降低其對(duì)胃腸道的不良反應(yīng)。根據(jù)頭孢克肟本身的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，本研究采用熱熔法制備頭孢克肟栓劑，并對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，測(cè)定其含量、體外釋放度等，為頭孢克肟的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材 料

1.1 儀 器

1200型高效液相色譜儀(美國(guó)Angilent 公司)，RB-1融變時(shí)限測(cè)試儀(天津天光光學(xué)儀器有限公司)，F(xiàn)A1104I上皿電子天平(上海精科儀器有限公司)，501型超級(jí)恒溫水浴(上海市實(shí)驗(yàn)儀器廠)，RCZ-5A智能藥物溶出儀(天津大學(xué)精密儀器廠)。

1.2 試 藥

頭孢克肟對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100610，純度：97%)，頭孢克肟(上海天寰藥業(yè)有限公司，批號(hào)：100330，純度：98%)，頭孢克肟膠囊(上海海虹實(shí)業(yè)集團(tuán)巣湖今辰藥業(yè)有限公司，批號(hào)：100925，規(guī)格：100 mg/粒),聚乙二醇4000(PEG4000，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：100427)，聚乙二醇400(PEG400，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：(00330)，吐溫 80(沈陽(yáng)新興試劑廠，批號(hào)：091109)，乙腈(色譜純，美國(guó)Tedia公司，批號(hào)：1009262)，磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀等試劑均為分析純。頭孢克肟栓劑(大連醫(yī)科大學(xué)藥劑學(xué)教研室自制，規(guī)格：100 mg/枚)。

1.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

精密稱(chēng)取頭孢克肟對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解稀釋?zhuān)瞥杉s20 μg/mL的對(duì)照品溶液，在200～400 nm范圍內(nèi)掃描(見(jiàn)圖1)，最大吸收波長(zhǎng)在288 nm 處，而所用輔料在此條件下無(wú)干擾，故選擇288 nm作為頭孢克肟的檢測(cè)波長(zhǎng)。

1.4 色譜條件[4]

色譜柱為HYPERSIL C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈:0.25%四丁基氫氧化銨溶液(1∶2，取0.4 mol/L 四丁基氫氧化銨溶液25 mL，用純化水稀釋至1000 mL，用1.5 mol/L磷酸調(diào)至pH7.0)；檢測(cè)波長(zhǎng)：288 nm；流速：1.0 mL/min；溫度：25℃。在此條件下，理論塔板數(shù)按頭孢克肟計(jì)算不低于4000。精密量取頭孢克肟對(duì)照品10 mg和頭孢克肟栓劑適量(含頭孢克肟約10 mg)，分別置50 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，按上述色譜條件，分別進(jìn)樣，頭孢克肟對(duì)照品和頭孢克肟栓劑的HPLC色譜圖分別見(jiàn)圖2和圖3(保留時(shí)間在10.1 min左右，圖3中峰1為頭孢克肟峰)，分離度符合要求。

圖1 頭孢克肟對(duì)照品的紫外光譜圖

圖2 頭孢克肟對(duì)照品的HPLC色譜圖

圖3 頭孢克肟栓劑的HPLC色譜圖

2 方法和結(jié)果

2.1 頭孢克肟栓劑的制備

采用熱熔法，稱(chēng)取PEG4000 5.5 g和PEG400 3.5 g置蒸發(fā)皿中，在水浴上加熱使全部熔化、混勻，另稱(chēng)取頭孢克肟樣品1.0 g，分散于適量吐溫80中，在攪拌下加入到已制好的水溶性基質(zhì)中，攪拌均勻。趁熱注入已涂好潤(rùn)滑劑的栓模中，共制10枚，固化(溫度為-2℃)。脫模，用吸水紙吸去栓劑表面殘留的液體石蠟，得頭孢克肟栓劑，每枚1.0 g(規(guī)格：100 mg/枚)。

2.2 質(zhì)量評(píng)價(jià)[5]

2.2.1 外 觀

按上述工藝條件制備三批栓劑(批號(hào)：20100915，20100916，20100917)，均為乳白色，外形光滑圓整，大小均勻，色澤一致，硬度適中。

2.2.2 重量差異及融變時(shí)限

按《中國(guó)藥典》2010版二部附錄規(guī)定操作，三批栓劑(批號(hào)：20100915，20100916，20100917)的重量差異分別為±1.12%、±1.51% 和±1.47%；融變時(shí)間分別為22 min 14 s、20 min 23 s和21 min 35 s，結(jié)果符合《中國(guó)藥典》規(guī)定。

2.2.3 含量測(cè)定

2.2.3.1 頭孢克肟標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密稱(chēng)取干燥至恒重的頭孢克肟對(duì)照品10 mg于10 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，得濃度為1 mg/mL的對(duì)照貯備液。精密量取頭孢克肟對(duì)照貯備液100、200、400、800、1200、1600 μL置于10 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，配成10、20、40、80、120、160 μg/mL的系列濃度對(duì)照液，分別進(jìn)樣分析，按1.4項(xiàng)色譜條件測(cè)定峰面積，以對(duì)照品溶液的濃度(C)為橫坐標(biāo)、以峰面積(A)為縱坐標(biāo)作圖，進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為A=4237.8C-1589.3，r=0.9996，頭孢克肟濃度在10～160 μg/mL之間,線性關(guān)系良好。

2.2.3.2 精密度試驗(yàn)：精密量取頭孢克肟對(duì)照貯備液200、800、1200 μL各5份，置10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制備成20、80、120 μg/mL的低、中、高3個(gè)組，按2.2.3.1項(xiàng)下方法測(cè)定5次和每天在同一時(shí)間進(jìn)樣、連續(xù)測(cè)定5 d，分別測(cè)定頭孢克肟對(duì)照貯備液的日內(nèi)精密度和日間精密度(5 d)。結(jié)果日內(nèi)RSD分別為1.57%、2.13%、1.96%，日間RSD分別為2.24%、2.35%、2.47%，取樣精密度良好。

2.2.3.3 重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批號(hào)的頭孢克肟栓劑(批號(hào)：20100915，200 mg/枚)5份，200 mg/份，分別置于25 mL量瓶中，加入約50℃ 60%甲醇溶液20 mL，使其溶解后再加甲醇定容至刻度，搖勻后過(guò)濾，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1000 μL置于10 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋后按1.4項(xiàng)色譜條件分別進(jìn)樣分析，測(cè)定峰面積A，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算含量。測(cè)得樣品中頭孢克肟含量的RSD為1.78%，該方法重復(fù)性好。

2.2.3.4 加樣回收試驗(yàn)：精密稱(chēng)取同一批號(hào)的頭孢克肟栓劑(批號(hào)：20100916)9份，250 mg/份，分別置25 mL量瓶中，每3份分別精密加入1 mg/mL頭孢克肟對(duì)照貯備液500、1000、1500 μL，余下操作同2.2.3.3項(xiàng)。于288 nm波長(zhǎng)處測(cè)定峰面積A，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算含量，以測(cè)得量與加入量比較，計(jì)算回收率。結(jié)果低、中、高濃度樣品中頭孢克肟平均回收率分別為98.97%、100.35%、101.86%(RSD=1.47%)，此法用于測(cè)定樣品含量的準(zhǔn)確度好。

2.2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)：分別精密稱(chēng)取自制頭孢克肟栓劑(批號(hào)20100918)100、200、300 mg，按2.2.3.3項(xiàng)下操作，取續(xù)濾液1000 μL置于10 mL量瓶中，制備成低、中、高三個(gè)濃度的樣品溶液，分別測(cè)定0、0.5、1、2、4、6、12、24、36、48 h時(shí)的峰面積A。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算含量，結(jié)果測(cè)得低、中、高三個(gè)濃度的RSD分別為2.10%、0.76%、0.38%，樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.3.6 含藥量的測(cè)定：精密稱(chēng)取相當(dāng)于頭孢克肟約20.0 mg的頭孢克肟栓劑三批(批號(hào)：20100915，20100916，20100917)各200 mg，余下按2.2.3.3 項(xiàng)下操作，測(cè)定峰面積A，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算含量。結(jié)果樣品中頭孢克肟含量平均為10.2%(RSD=1.57%，與理論含藥量10%接近)。

2.2.4 有關(guān)物質(zhì)檢查

取頭孢克肟栓劑三批(批號(hào)：20100915，20100916，20100917)1000 mg各3份(每份含頭孢克肟約100 mg)，置100 mL量瓶中，加磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)溶解(必要時(shí)超聲處理使溶解完全)并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；同法制備對(duì)照品溶液。精密量取對(duì)照品溶液20 μL，按2.2.3.3 項(xiàng)下操作，調(diào)節(jié)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為記錄儀滿量程的20%。再精密量取對(duì)照品和供試品溶液各20 μL，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2.5倍。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算各雜質(zhì)的總量，結(jié)果三個(gè)批號(hào)有關(guān)物質(zhì)平均含量分別為1.03%、0.87%、0.94%，符合規(guī)定。

2.2.5 溶出度的測(cè)定

按照《中國(guó)藥典》2010年版溶出度測(cè)定法規(guī)定[6]采用轉(zhuǎn)籃法，轉(zhuǎn)速為100 r/min，溫度為(37±1)℃。以pH 7.2的磷酸鹽緩沖液為溶出介質(zhì)(取磷酸二氫鉀6.8 g，加水適量溶解，用1 mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.2，用純化水稀釋至1000 mL)，取頭孢克肟栓劑6枚(規(guī)格：100 mg/枚)及頭孢克肟硬膠囊6粒(規(guī)格：100 mg/粒)分別投入杯中，自樣品與介質(zhì)接觸時(shí)開(kāi)始記時(shí)，分別于5、10、15、30、45、60、90、120 min采樣5 mL，并立刻補(bǔ)充同體積等溫新鮮介質(zhì)，每個(gè)取樣操作在30 s內(nèi)完成，0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，得到溶出液樣品。分別按1.4項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣分析，測(cè)定峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算含量，并用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件，多組資料采用方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 頭孢克肟在硬膠囊劑和栓劑中的溶出度

Tab 1 Dissolution rates of Cefixime suppositories and Cefixime hard capsules

表1 頭孢克肟在硬膠囊劑和栓劑中的溶出度

1)與硬膠囊劑溶出度相比，P<0.05

時(shí)間(min)5101530456090120栓劑溶出度48.8±2.2369.2±1.2181.6±1.2290.3±1.311)95.9±1.6897.8±0.9098.2±0.8798.7±0.88硬膠囊劑溶出度43.7±2.4859.6±1.3670.5±1.4081.2±1.5982.8±1.5383.5±0.9884.2±0.9484.9±0.86

結(jié)果表明，頭孢克肟栓劑在規(guī)定介質(zhì)中30 min時(shí)的體外溶出度為(90.3±1.31)%，而市售頭孢克肟硬膠囊的體外溶出度為(81.2±1.59)%，二者在30 min時(shí)的體外溶出度差異有顯著性意義(P<0.05)，結(jié)果均符合《中國(guó)藥典》2010版二部附錄規(guī)定。

3 討 論

頭孢克肟是一種抗菌譜廣、抗菌作用強(qiáng)、引人注目的頭孢菌素類(lèi)抗生素。但是，由于其口服后對(duì)胃腸道不良反應(yīng)較大，根據(jù)其結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，通過(guò)改變劑型可以提高其生物利用度、降低藥物的不良反應(yīng)[7,8]。

用熱熔法制備的頭孢克肟栓劑呈白色，表面光滑圓整，色澤均一，硬度較好，重量差異、融變時(shí)限均符合《中國(guó)藥典》2010版二部附錄規(guī)定[5]。

熱熔法制備栓劑是基于固體分散體的原理[9]，將藥物高度分散于藥物基質(zhì)中，藥物以分子、膠態(tài)、微晶或無(wú)定形粉末等狀態(tài)存在，能大幅度減小難溶性藥物的粒度，增大其溶出面積。同時(shí)，聚乙二醇類(lèi)基質(zhì)水溶性較強(qiáng)，能將藥物表面潤(rùn)濕，有利于藥物的溶出，加快了有效成分的溶出速度，提高其吸收效果。本研究采用水溶性基質(zhì)，用熱熔法制備頭孢克肟栓劑，改善了藥物的溶解性能，加快其溶出速度。試驗(yàn)結(jié)果表明，30 min時(shí)頭孢克肟栓劑的體外溶出度比頭孢克肟硬膠囊的體外溶出度提高約11.2%(P<0.05)，而頭孢克肟栓劑在體內(nèi)的生物利用度及藥物動(dòng)力學(xué)等有待于進(jìn)一步的研究。

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