詹 峰 ，武 榮 ，金桂紅 ，周海燕 ，李 娜 ，胡 波

1.安徽醫(yī)科大學(xué)滁州臨床學(xué)院兒科，安徽滁州 239000；2.安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒科，安徽合肥 230022

胎糞吸入綜合征 （meconium aspiration syndrome，MAS）是指由于嚴(yán)重宮內(nèi)窘迫，胎兒在宮內(nèi)或分娩時經(jīng)呼吸道吸入被胎糞污染的羊水引起呼吸窘迫的表現(xiàn)。5%～15%的新生兒在出生時可有胎糞污染羊水，其中5%的新生兒發(fā)生胎糞吸入性肺炎，多見于足月兒或過期產(chǎn)兒。國內(nèi)報道的發(fā)病率為活產(chǎn)新生兒的1.2%～2.2%[1]。最近研究表明：全身應(yīng)用或氣管內(nèi)甲基黃嘌呤[2]可以改善胎糞吸入性肺炎的肺功能。氨茶堿是甲基黃嘌呤衍化物，本實驗在新生兔重度胎糞吸入模型上應(yīng)用氨茶堿，觀察其對TNF-α和IL-8水平的影響。

1 材料與方法

1.1 動物

日齡20～30 d的日本健康大耳新生兔24只，體重300～500 g，雌雄不限，由安徽醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供。隨機分成空白組（n=6）、通氣對照組（n=6）、氨茶堿對照組（胎糞+SIMV 組）（n=6）、氨茶堿組（胎糞+SIMV+氨茶堿）（n=6）。

1.2 儀器設(shè)備

德國stephanie小兒呼吸機，邁瑞便攜式多參數(shù)監(jiān)護(hù)儀（型 號 ：PM-8000Express），MARTEL 血 氣 分 析 儀 （型 號 ：

MC P8850B-130）等。

1.3 胎糞制備

收集數(shù)名健康足月新生兒第一次胎糞，其母親無產(chǎn)前用藥史，也未接受除維生素K、紅霉素眼膏以外的藥物，胎糞未被尿液污染，真空冷凍干燥。研磨成粉末狀，用無菌生理鹽水稀釋成45 mg/ml濃度的均勻胎糞懸混液，分裝-20℃保存，待用。

1.4 方法

1.4.1 建立重度胎糞吸入動物模型[3]固定，仰臥位，2%利多卡因局麻下氣管插管，膠布固定，記錄生理參數(shù)，通氣對照組、氨茶堿對照組和氨茶堿組氣管導(dǎo)管內(nèi)注入4 ml/kg的胎糞混合物，分2次注入，每次2 ml/kg。繼而注入2 ml空氣，兩次注入之間使用復(fù)蘇氣囊按壓5 min，確保胎糞均勻進(jìn)入支氣管及肺泡。灌注全程給100%氧氣。

1.4.2 機械通氣 通氣模式：同步間歇指令（SIMV），吸入氧濃度（FIO2）：0.25～0.5，吸氣峰壓（PIP）為 10～16 cm H2O（1 cm H2O=0.098 kPa），呼氣末壓 （PEEP）為 0.5～3.0 cm H2O，呼吸頻率（RR）為 10～40 次/min，吸氣時間（TI）為 0.25～05 s；參數(shù)調(diào)節(jié)以維持潮氣量正常范圍（4～10 ml/kg）、正常血氧飽和度（85%以上）及血氣值為準(zhǔn)。

1.4.3 氨茶堿的應(yīng)用方法 胎糞吸入綜合征模型制備后，氨茶堿組0.5 h和2.5 h靜脈注射氨茶堿（2.0 mg/kg），氨茶堿用生理鹽水稀釋成1∶10，并在5 min內(nèi)緩慢注入，通氣對照組、氨茶堿對照組在同樣時間靜脈注射等量的生理鹽水，氨茶堿組和氨茶堿對照組均通氣6 h后處死，收集標(biāo)本。

1.4.4 標(biāo)本采集 支氣管肺泡灌洗液：取左肺組織，用生理鹽水（30 ml/kg）經(jīng)氣管反復(fù)支氣管肺泡灌洗5次，收集灌洗液離心，上清液分裝保存待測。肺組織勻漿：右肺中上葉加生理鹽水，經(jīng)勻漿機勻漿，制成勻漿液，離心（1 500 r/min）10 min后取上清液，-30℃保存待檢。

1.4.5 檢測指標(biāo)和方法 計算各組肺組織濕干重比 （W/D）及肺組織勻漿和肺泡灌洗液中TNF-α、IL-8含量。后兩者先采用酶聯(lián)免疫吸附法（EL1SA）檢測，再在RT-6000型酶標(biāo)儀上測450 nm處的OD值。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，用 SPSS 13.0軟件進(jìn)行分析，以O(shè)ne-Way ANOVA分析組間差異，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組TNF-α及IL-8的變化情況

氨茶堿組和氨茶堿對照組比較，肺組織勻漿和BALF中TNF-α和IL-8含量降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。氨茶堿組、氨茶堿對照組、通氣對照組分別與空白組比較，肺組織勻漿和BALF中TNF-α和IL-8含量升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），氨茶堿組、氨茶堿對照組與通氣對照組比較，肺組織勻漿和BALF中TNF-α和IL-8含量升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表 1。

表1 各組TNF-α及IL-8的變化情況（x±s，ng/L）Tab.1 Changes of TNF-α and IL-8 in each group（x±s，ng/L）

2.2 肺組織濕干重比（W/D）

氨茶堿組和氨茶堿對照組比較，肺組織濕干重比（W/D）差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），氨茶堿對照組、氨茶堿組、通氣對照組與空白組比較，肺組織濕干重比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。氨茶堿組和通氣對照組比較，肺組織濕干重比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表 2。

3 討論

胎糞吸入綜合征是由于胎兒發(fā)生宮內(nèi)窘迫或產(chǎn)時窒息排出胎糞，吸入后胎糞到達(dá)各級氣管、支氣管及肺泡，引起肺組織一系列的病理生理改變，從而發(fā)生肺部病變。MAS的發(fā)生機制包括氣道的機械性阻塞、表面活性物質(zhì)的失活、肺動脈高壓、肺部的化學(xué)性炎癥損傷[4]。胎糞的膽酸、膽鹽、膽綠素、胰酶、腸酶等均可導(dǎo)致肺損傷，釋放出細(xì)胞因子，引起肺部的炎性反應(yīng)，炎性反應(yīng)又加重細(xì)胞因子的釋放，其再加重炎性反應(yīng)，如此形成惡性循環(huán)。

表2 各組濕干重比（W/D）（x±s）Tab.2 wet/dry weight ratio of each group

在MAS的發(fā)生中有多種細(xì)胞因子如IL-8、TNF-α[5]等，參與其病理生理過程。其中IL-8作為促炎性因子，在其發(fā)生中起了重要作用。胎糞中含有IL-8，對中性粒細(xì)胞具有趨化作用[6]。TNF-α是單核-巨噬細(xì)胞在內(nèi)毒素、炎性介質(zhì)、IL-1等細(xì)胞因子的作用下以自分泌方式生成的一種多肽，炎癥早期，肺泡巨噬細(xì)胞激活，TNF-α產(chǎn)生增加，并促使中性粒細(xì)胞聚集、遷移至肺內(nèi)，使中性粒細(xì)胞成為分布最廣、數(shù)量最多的炎性細(xì)胞，同時又是TNF-α更大的來源。Kojima等[7]和Hageman等[8]先后報道了隨著胎糞的吸入，肺部伴有中性粒細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞聚集，并釋放一些生物活性物質(zhì)產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，從而引起胎糞性肺損傷。

氨茶堿為黃嘌呤類藥物，為茶堿與乙二胺復(fù)鹽，其藥理作用主要來自茶堿，乙二胺使其水溶性增強。近年來發(fā)現(xiàn)氨茶堿除了具有支氣管舒張作用外，還具有抗感染和免疫調(diào)節(jié)等作用[9-10]。氨茶堿是非選擇PDE抑制劑，其可能作用機制如下：增加肺內(nèi)cAMP[11]和GMP水平，導(dǎo)致支氣管擴張和肺血管擴張和一些抗感染作用；試驗證明茶堿可以減少人血單核細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α，同時可以抑制TNF-α的基因表達(dá)[12]和細(xì)胞因子的基因表達(dá)[10]；氨茶堿可以增加抗炎因子IL-10的釋放，促進(jìn)中性粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的凋亡，抑制TNF-α和前列腺素類的作用[13]。

在本實驗中，新生兔胎糞灌注后肺組織勻漿和BALF中IL-8和TNF-α明顯升高，提示細(xì)胞因子在胎糞吸入性肺損傷中起到重要作用。氨茶堿組和氨茶堿對照組比較，氨茶堿組肺組織勻漿和BALF中IL-8和TNF-α含量降低，氨茶堿組的濕干重比低，提示應(yīng)用氨茶堿可以減少IL-8和TNF-α的產(chǎn)生，可以減輕重癥胎糞吸入新生兔的肺水腫。實驗中還發(fā)現(xiàn)與通氣對照組、空白組比較，氨茶堿對照組和氨茶堿組肺組織勻漿和BALF中TNF-α和IL-8含量明顯升高，提示機械通氣本身可以加重急性肺損傷。Rimensberger等[14]報道機械通氣是一種炎癥前期刺激，能使炎癥級聯(lián)反應(yīng)激活。

綜上所述，氨茶堿可能通過抑制IL-8和TNF-α的分泌，從而減少肺部的炎癥反應(yīng)，對新生兔重癥胎糞吸入可能有保護(hù)作用。關(guān)于氨茶堿的合適劑量、用法及機制尚有待進(jìn)一步研究。

[1]吳梓梁,賴永洪,李文益,等.小兒內(nèi)科學(xué)[M].鄭州:鄭州大學(xué)出版社,2003:1564.

[2]Mokra D,Mokry J,Tatarkova Z，et al.Aminophyllinetreatment in meconium-induced acute lung injury in a rabbit model[J].JPhysiol Pharmacol,2007,58(Suppl 5):399-407.

[3]周海燕,武榮.新生兔重度胎糞吸入模型的制備[J].安徽醫(yī)學(xué),2010,31(9):33-36.

[4]LI YH,YAN ZQ,Brauner A,et al.Meconium induces expression of inducible NOsynthase and activation of NF-B in tat alveolarm acrophages[J].Pediatr Res,2001,49(6):820-825.

[5]Vidyasagar D,Lukkarinen H,Kaapa P,et al.Inflammatory response and apoptosisin newborn lungsafter meconiumaspiration[J].Biotechnol Prog,2005,21(1):192-197.

[6]Okazaki K,Kondo M,Kato M,et al.Serum cytokine and chemokine profiles in neonates with meconium aspiration syndrome[J].Pediatrics,2008,121(4):e748-753.

[7]Kojima T,Hattori K,Fujiwara T,et al.Meconium induced lung injury mediated by activation of alveolar macrophages[J].Life Sciences,1994,54(21):1559-1562.

[8]Hageman JR,Caplan MS.An introduction to the structure and function of inflammatory mediators for clinicians[J].Clin Perinatol,1995,22(2):251-261.

[9]Salari P,Mojtahedzadeh M,Najafi A,et al.Comparison of the effect of aminophylline and low PEEP vs.high PEEP on EGF concentration in critically ill patients with ALI/ARDS[J].JClin Pharmacy Therapeutics,2005,30:139-144.

[10]Mascali JJ,Cvietusa P,Negri J,et al.Anti-inflammatory effects of theophylline:modulation of cytokine production[J].Ann Allergy Asthma Immunol,1996,77(1):34-38.

[11]Sciuto AM,Strickland PT,Kennedy TP,et al.Postexposure treatment with aminophylline protects against phosgene-induced acute lung injury[J].Exp Lung Res,1997,23(4):317-332.

[12]Spatafora M,Chiappara G,Merendino AM,et al.Theophylline suppresses the release of tumour necrosis factor-alpha by blood monocytes and alveolar macrophages[J].Eur Respir J,1994,7(2):223-228.

[13]Barnes PJ.Theophylline in chronic obstructive pulmonary disease:new horizons[J].Proc Am Thorac Soc,2005,2(4):334-339.

[14]Rimensberger PC,Fedorko L,Cutz E,et al.Attenuation of ventilatorinduced acute lung injury in an animal model by inhibition of neutrophil adhesion by leumedins(NPC 15669)[J].Crit Care Med,1998,26(3):548-555.