宋愛萍，王建榮，郭百靈，劉 偉

(濟南市第二人民醫(yī)院，濟南 250001)

羊膜作為一種生物組織移植材料，已廣泛應(yīng)用于眼表疾病的治療，在眼表重建中發(fā)揮了重要作用[1～4]。2007年 12月 ～2008年 6月，我們將生物羊膜和絲裂霉素 C應(yīng)用于兔高眼壓模型小梁切除術(shù)中，以觀察其抗纖維組織增殖的作用。

1 材料與方法

1.1 高眼壓動物模型的建立 健康成年同種系新西蘭大耳白兔 30只(普通級，由濟南市動物實驗中心提供)，體質(zhì)量 2～3 kg，雌雄兼用，無眼疾，常規(guī)喂養(yǎng)。兔雙眼均用 10 g/L丁卡因角結(jié)膜表面麻醉 3次，于 9:00位角鞏膜緣 1 ml針穿刺放出部分房水，α2糜蛋白酶 160 U后房注入，3 min內(nèi)注射完。觀察眼壓變化，若 3 d后(即青光眼手術(shù)前)眼壓仍低于 21 mmHg，則后房補充注入 α2糜蛋白酶 80 U，2 min內(nèi)注射完，方法同前。所有操作完成后兔眼前房形成良好，眼壓 21 mmHg示高眼壓動物模型建立成功。

1.2 動物分組、處理及觀察 30只兔動物模型隨機分為 3組，每組 10只(20眼)。A組行小梁切除+生物羊膜植入術(shù)，B組行小梁切除聯(lián)合鞏膜瓣下放置浸有絲裂霉素 C棉片 3 min，C組單純小梁切除。手術(shù)均由同一位熟練掌握小梁切除術(shù)的醫(yī)師完成 。于術(shù)后第 3、7、14、21、28天用耳前靜脈空氣栓塞法處死 A、B、C組各 2只，立即摘除眼球，取濾過泡區(qū)組織(結(jié)膜、鞏膜)4 mm×2 mm放入甲醛中固定 48 h以上。常規(guī)行脫水、石蠟包埋、二甲苯透明、垂直角膜緣方向包埋，4μm厚連續(xù)切片，常規(guī)組織 HE染色，光鏡觀察濾過道內(nèi)羊膜溶解吸收情況、成纖維細胞增生及炎細胞浸潤等組織病理學(xué)改變。每例標本任選一張切片，進行免疫組織化學(xué)堿性成纖維細胞生長因子(b-FGF)檢測，用 CIAS-1000型圖像分析系統(tǒng)分析陽性細胞數(shù)。術(shù)后觀察兔眼濾過泡形態(tài)、充血程度、前房房水細胞和蛋白情況。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用 SPSS10.0統(tǒng)計軟件，b-FGF陽性細胞數(shù)以±s表示，組間比較采用 t檢驗;各組濾過泡差異采用 χ2檢驗(含四格表確切概率法)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 濾過泡 根據(jù) Krofeld分型法，將濾過泡的形態(tài)功能分為 4型。Ⅰ型、Ⅱ型為功能性濾過泡，Ⅲ型、Ⅳ型為無功能性濾過泡。各組濾過泡第 1～3天較扁平，以后彌散隆起，小梁切除組第 14天后逐漸瘢痕化，第 30天變得扁平。A、B組功能性濾過泡所占比例與 C組相比有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，A、B組之間差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2 前房反應(yīng)及并發(fā)癥 術(shù)后第 1、2天，A組前房反應(yīng)較重，第 3天后 3組前房反應(yīng)均消失。A組術(shù)中有 1例出現(xiàn)前房出血，于 1周完全吸收。B組出現(xiàn) 1例前房出血(術(shù)后 1周基本吸收)、1例淺前房、1例濾過泡瘺、1例角膜上皮剝脫。

2.3 切片 HE染色 術(shù)后第 3天 A組手術(shù)區(qū)大量炎癥細胞浸潤，B、C組手術(shù)區(qū)見中等量炎癥細胞浸潤。第 7天時 A組濾過區(qū)均可見一定的濾過空腔，無明顯纖維組織增生;C組濾過區(qū)可見少量濾過空腔、血管長入、纖維增生明顯、排列紊亂。第 14天 A組炎癥細胞減少，成纖維細胞數(shù)目明顯低于 B、C組。C組可見多量炎性細胞、大量膠原纖維增生、血管長入、濾過腔大部分消失。術(shù)后第 21天 A組纖維組織增生，結(jié)締組織膠原化，羊膜斷裂成片狀、仍有濾過空腔存在;C組濾過腔消失，濾過區(qū)則被覆大量增生的纖維組織，瘢痕形成，濾過腔關(guān)閉。

2.4 三組 b-FGF陽性細胞數(shù)比較 免疫組化檢測b-FGF陽性染色為棕黃色，各組術(shù)后第 3、7、14、21、28天兔眼手術(shù)區(qū)域 b-FGF陽性細胞計數(shù)見表1。

3 討論

表1 三組術(shù)后不同時間兔眼手術(shù)區(qū) b-FGF陽性細胞數(shù)(個/HP，±s)

表1 三組術(shù)后不同時間兔眼手術(shù)區(qū) b-FGF陽性細胞數(shù)(個/HP，±s)

注:與 C組比較，*P＜0.05;與B組比較，△P＜0.05

組別 術(shù)后第 3天 術(shù)后第 7天 術(shù)后第 14天 術(shù)后第21天 術(shù)后第 28天A組 7.58±2.24*△ 14.33±2.15*△ 13.64±1.28*△ 12.06±1.35*△ 10.85±2.01*△B組 5.18±1.41* 13.15±2.13* 12.87±1.28* 9.97±1.72* 9.08±2.01*C組 12.76±1.29 20.53±2.48 16.93±2.11 14.14±1.79 12.53±1.95

在成纖維細胞增殖、瘢痕形成的過程中，有眾多因子起作用，其中以 b-FGF、TGF-β作用最為顯著[5，6]。體外實驗表明，0.1 ng/ml的 b-FGF可明顯地刺激成纖維細胞、內(nèi)皮細胞等的增殖和膠原的合成[7]，同時它又是一種趨化因子，對內(nèi)皮細胞、成纖維細胞和星形膠質(zhì)細胞均有趨化作用，并可能參與新生血管性青光眼的形成以及青光眼濾過術(shù)后角鞏膜緣組織的愈合等過程[8]。甚至有報道稱，TGF-β對結(jié)膜囊成纖維細胞的刺激效應(yīng)是通過 b-FGF的介導(dǎo)而發(fā)揮作用[9]。本研究中，A組術(shù)后第 7天見到少量 b-FGF陽性細胞，纖維增殖受到抑制。術(shù)后第 14天 b-FGF陽性細胞開始減少，纖維增殖不明顯。B組 b-FGF陽性細胞數(shù)較 A組少，而 C組 b-FGF陽性細胞表達明顯，隨著時間延長房水濾過道內(nèi)纖維增殖嚴重，瘢痕形成。表明生物羊膜可以通過抑制 b-FGF的表達抑制成纖維細胞形成，起到防止濾過泡粘連、瘢痕形成的作用。

絲裂霉素 C對成纖維細胞有明顯的抑制作用，因而可用來阻止手術(shù)區(qū)的血管再生，抑制青光眼濾過性手術(shù)后濾過道的纖維細胞增生和瘢痕形成，保持濾過道的通暢。絲裂霉素 C能引起角膜上皮剝脫、低眼壓、淺前房等，這種并發(fā)癥盡管發(fā)生例數(shù)少，但可對患者視力造成損害，有時甚至是不可逆的。我們也發(fā)現(xiàn) A組和 B組均形成良好的功能濾過泡，但 B組不良反應(yīng)多。本文應(yīng)用的生物羊膜是通過生物工程技術(shù)對羊膜進行生物學(xué)改良，改變羊膜結(jié)構(gòu)(去羊膜上皮細胞或改變上皮細胞的性質(zhì))及成分(吸附特殊的藥物，使羊膜固有化學(xué)成分發(fā)生改變)，在保存羊膜基本生理特性的同時賦予其更多的生物學(xué)功能。應(yīng)用生物羊膜克服了自制新鮮羊膜或低溫保存羊膜被污染的可能性，同時又最大程度保證了臨床應(yīng)用的合法性和科學(xué)性[10]。

總之，羊膜和絲裂霉素在青光眼濾過術(shù)中都有較好的抗增殖作用，但術(shù)中應(yīng)用羊膜并發(fā)癥少，無不良反應(yīng)，是一種安全有效的治療方法。

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