譚常青,周金彩,龍紅萍(1.廣東佛山市南海區(qū)桂城醫(yī)院,佛山市 5800;.湖南科技職業(yè)學(xué)院,長沙市 410004;.中南大學(xué)藥學(xué)院,長沙市 41001)
胺碘酮(Amiodaros)作為一種高效而安全的抗心律失常藥物已被越來越多地應(yīng)用于臨床[1~3]。為了克服目前劑型的缺陷和缺點[4~6],更好地提高患者的依從性和減少藥物引起的不良反應(yīng),筆者根據(jù)時辰藥理學(xué)的原理,研制了一種新的口服劑型——鹽酸胺碘酮包衣脈沖片。目前,胺碘酮制劑的含量測定方法主要有光譜分析、電化學(xué)分析和色譜分析等,鑒于高效液相色譜法具有的高分離效率、高靈敏度及良好的重現(xiàn)性等優(yōu)點,筆者在參考相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上,嘗試采用反相高效液相色譜(RP-HPLC)法和外標(biāo)法測定鹽酸胺碘酮包衣脈沖片中鹽酸胺碘酮的含量[7,8]。結(jié)果表明,此方法簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好,可用于該制劑的質(zhì)量控制。
Agilent 1200型HPLC儀,包括低壓四元泵、自動進(jìn)樣器、柱溫箱、DAD檢測器、ChemStations色譜工作站(美國安捷倫科技有限公司);UVProbe-2450紫外-可見分光光度儀(日本島津公司);BP211D電子天平(0.00001 g,德國塞多利斯公司)。
鹽酸胺碘酮包衣脈沖片(實驗室自制,批號:20100416、20100418、20100420,規(guī)格:每片200 mg);鹽酸胺碘酮對照品(上海九福藥業(yè)公司,批號:20080716,純度:99.9%);乙腈為色譜純,水為純凈水并經(jīng)0.45 μm水系濾膜過濾,其余試劑均為分析純。
色譜柱:Agilent C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相:2%三乙胺(用磷酸調(diào)pH至4.8)-乙腈(40∶60);檢測波長:240 nm;流速:1.0 mL·min-1;進(jìn)樣量:20 μL;柱溫:25 ℃。理論板數(shù)不小于8000。
2.2.1 對照品溶液的制備 稱取鹽酸胺碘酮對照品約25 mg,精密稱定,置于50 mL容量瓶中,加流動相適量(約20 mL),超聲溶解,放冷至室溫后,流動相稀釋至刻度線,搖勻,用0.45 μm濾膜濾過,取濾液作為對照品貯備液(0.5 mg·mL-1)。精密量取對照品貯備液10.0 mL,置于50 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得濃度為0.1 mg·mL-1的對照品溶液。
2.2.2 供試品溶液的制備 取鹽酸胺碘酮包衣脈沖片20片,精密稱定,研細(xì),精密稱取適量(約相當(dāng)于鹽酸胺碘酮5 mg),置于50 mL容量瓶中,加流動相適量(約20 mL),超聲溶解,放冷至室溫后,流動相稀釋至刻度線,搖勻,用0.45 μm濾膜濾過,取濾液作為供試品溶液。
2.2.3 陰性對照溶液的制備 精密稱取約相當(dāng)于含主藥鹽酸胺碘酮5 mg的處方輔料量,置于50 mL容量瓶中,加流動相適量(約20 mL),超聲溶解,放冷至室溫后,流動相稀釋至刻度線,搖勻,用0.45 μm濾膜濾過,即得陰性對照溶液。
分別精密吸取陰性對照溶液、對照品溶液及供試品溶液各20 μL,按“2.1”項下色譜條件測定。結(jié)果表明,輔料、鹽酸胺碘酮對照品及供試品色譜峰均很好分離,色譜見圖1。
圖1 高效液相色譜圖A.陰性對照;B.對照品;C.供試品;1.鹽酸胺碘酮(tR=25.061 min)Fig 1 HPLC chromatogramsA.negative control;B.reference substance;C.sample;1.amiodarone hydrocholride(tR=25.061 min)
精密量取對照品貯備液2.0、4.0、8.0、10.0、12.0、16.0、25.0 mL,置于50 mL容量瓶中,加流動相至刻度,搖勻,即得濃度為 40、60、80、100、120、160、200 μg·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)濃度的溶液。分別精密吸取20 μL,注入HPLC儀,記錄色譜圖。以峰面積(A)對濃度(C,μg·mL-1)進(jìn)行線性回歸分析,得回歸方程A=302.48C+20.742(r=0.9999,n=7)。結(jié)果表明,鹽酸胺碘酮檢測濃度在0.020~0.250 mg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。
分別精密吸取對照品溶液20 μL,注入HPLC儀,在同一天內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣6次,并連續(xù)測量3 d,按“2.1”項下色譜條件測定。結(jié)果,日內(nèi)RSD=0.42%(n=6),日間RSD=0.58%(n=3),表明本方法精密度較好。
分別精密吸取供試品溶液20 μL,室溫下于0、2、4、8、12、24 h注入HPLC儀,按“2.1”項下色譜條件測定。結(jié)果,RSD=0.21%(n=6),表明供試品溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。
取同一批樣品(批號:20100418),分別按“2.2.2”項下方法平行制備成3份供試品溶液。精密吸取供試品溶液20 μL,注入HPLC儀,按“2.1”項下色譜條件測定,并記錄峰面積,采用外標(biāo)法以峰面積計算鹽酸胺碘酮的含量。結(jié)果,RSD=0.45%(n=6),表明本方法重復(fù)性良好。
取已知含量的鹽酸胺碘酮包衣脈沖片20片(批號:20100416,含鹽酸胺碘酮為標(biāo)示量的99.32%),精密稱定,研細(xì),精密稱取適量粉末(約相當(dāng)于鹽酸胺碘酮5 mg),共9份,然后按照樣品中鹽酸胺碘酮量的80%、100%、120%分別精密加入“2.2.1”項下對照品貯備液(鹽酸胺碘酮的濃度為0.5 mg·mL-1)8.0、10.0、12.0 mL,按“2.2.2”項下供試品溶液的方法制備,再按“2.1”項下色譜條件測定含量,結(jié)果見表1。
表1 加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)Tab 1 Results of recovery tests of amiodarone hydrocholride(n=9)
分別取本品3批樣品適量(相當(dāng)于鹽酸胺碘酮5 mg),按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液,分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液各20 μL,注入HPLC儀,按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定,記錄色譜圖,按外標(biāo)法以峰面積計算,結(jié)果見表2。
表2 樣品含量測定結(jié)果(n=3)Tab 2 Content determination of samples(n=3)
筆者研制的鹽酸碘胺酮包衣脈沖片是根據(jù)時辰藥理學(xué)的原理設(shè)計的新型控釋制劑。參照2010年版《中國藥典》(二部)[9]中鹽酸胺碘酮片含量測定項下HPLC法測定主藥含量,由于使用了氨水-甲醇-乙腈混合流動相,在所記錄的對照品色譜圖中導(dǎo)致溶劑峰多。而本試驗鹽酸胺碘酮包衣脈沖片中鹽酸胺碘酮的含量測定采用2%三乙胺-乙腈為流動相,組分簡單,基線平穩(wěn),柱效高,峰形對稱性好。采用RP-HPLC法對鹽酸碘胺酮包衣脈沖片中鹽酸胺碘酮的含量進(jìn)行測定,結(jié)果3個不同批號的鹽酸碘胺酮包衣脈沖片中鹽酸胺碘酮的含量均符合規(guī)定。
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