葉冬梅，陳曉宇，蘭順，李重勤（.廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院，南寧市 5300；.桂林醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，桂林市 54004）

順鉑、卡鉑、紫杉醇、多西紫杉醇、吉西他濱及長春瑞濱是臨床上常用的廣譜抗腫瘤藥。順鉑、卡鉑分別與其余4種藥物組成的化療方案廣泛應(yīng)用于肺癌、乳腺癌等疾病的治療，其療效在化療中的地位相近。6種藥物在消化系統(tǒng)、腎臟及造血系統(tǒng)的毒副作用有明顯差異，而在肝臟損害方面，臨床中的發(fā)生率和嚴(yán)重程度在不同的文獻(xiàn)報(bào)道中有較大差異[1，2]。為了明確不同化療藥物致肝損害的嚴(yán)重程度差異，本文進(jìn)行了療效近似的上述6種藥物之間致肝損害程度的比較實(shí)驗(yàn)研究，為臨床合理用藥及防治藥物肝損害提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，以保證患者進(jìn)行積極抗腫瘤治療的同時(shí)最大限度地減少藥物對(duì)正常機(jī)體組織的損害。

1 儀器與材料

1.1 儀器

數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市醫(yī)療儀器廠）；Baujahr 2000低溫離心機(jī)（上海博星基因芯片有限公司）；紫外-可見分光光度計(jì)（美國惠普公司）；Bx50F4光電顯微鏡（日本Olympus公司）。

1.2 試藥

順鉑注射液（批號(hào):20080901，規(guī)格:30 mg∶6 mL）、注射用吉西他濱滅菌粉末（批號(hào):20090407，規(guī)格:每瓶200 mg）、長春瑞濱注射液（批號(hào):20090101，規(guī)格:10 mg∶1 mL）均購自江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司；卡鉑注射液（齊魯制藥有限公司，批號(hào):20090429，規(guī)格:100 mg∶10 mL）；紫杉醇注射液（哈藥集團(tuán)生物工程有限公司，批號(hào):2009041，規(guī)格:30 mg∶5 mL）；多西紫杉醇注射液（深圳萬樂制藥有限公司，批號(hào):20091001，規(guī)格:20 mg∶0.5 mL）；丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、還原型谷胱甘肽（GSH）檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所提供，批號(hào):20091026）；直接膽紅素（D-BIL）試劑盒（批號(hào):EE953）、堿性磷酸酶（ALP）試劑盒（批號(hào):EG979）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）試劑盒（批號(hào):EF246）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）試劑盒（批號(hào):EF250）均由日本和光純藥工業(yè)株式會(huì)社提供。

1.3 動(dòng)物

昆明種小鼠，♂，體重（20±2）g，廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào):SCXK桂2003-0005。

2 方法

2.1 供試藥液的制備

取順鉑注射液5 mL，用生理鹽水稀釋至15 mL，得濃度為1.7 mg·mL－1的順鉑供試藥液；取卡鉑注射液10 mL，用5%葡萄糖注射液稀釋至15 mL，得濃度為6.7 mg·mL－1的卡鉑供試藥液；取紫杉醇注射液5 mL，用生理鹽水稀釋至10 mL，得濃度為3.0 mg·mL－1的紫杉醇供試藥液；取多西紫杉醇注射液0.5 mL，用5%葡萄糖注射液稀釋至12 mL，得濃度為1.7 mg·mL－1的多西紫杉醇供試藥液；取注射用吉西他濱滅菌粉末200 mg，用生理鹽水稀釋至9 mL，得濃度為22.2 mg·mL－1的吉西他濱供試藥液；取長春瑞濱注射液1 mL，用5%葡萄糖注射液稀釋至18 mL，得濃度為0.56 mg·mL－1的長春瑞濱供試藥液。

2.2 分組與給藥

根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，取小鼠70只，10只為生理鹽水組作正常對(duì)照，其余按臨床常用劑量給藥分為順鉑組（17 mg·kg－1）、卡鉑組（67 mg·kg－1）、紫杉醇組（30 mg·kg－1）、多西紫杉醇組（17 mg·kg－1）、吉西他濱組（222 mg·kg－1）、長春瑞濱組（5.6 mg·kg－1），每組10只，尾靜脈注射給予相應(yīng)藥物，給藥量均為0.2 mL，給藥時(shí)間為10～20 s。

2.3 肝功能生化指標(biāo)檢測

注射給藥第3天時(shí)，各組小鼠眼眶取血（取標(biāo)本前1天禁食），3000 r·min－1離心10 min，分離血清，測定其中D-BIL、ALP、AST、ALT水平。

2.4 肝組織氧化及抗氧化指標(biāo)檢測

注射給藥第3天時(shí)，取各組小鼠肝組織0.2 g（取標(biāo)本前1天禁食），加4℃生理鹽水在冰浴下制成10%（W/W）肝組織勻漿，將勻漿在4 ℃離心10 min（4000 r·min－1），取上清液，考馬斯亮藍(lán)法檢測總蛋白含量，按試劑盒方法測定肝組織勻漿中MDA、GSH含量和SOD活性。

2.5 肝組織病理學(xué)檢查

取同一部位肝組織一小塊，用10%甲醛固定，石蠟包埋，切片，蘇木精-伊紅（HE）染色，光電顯微鏡下觀察。如果肝細(xì)胞內(nèi)有圓形空泡，并將細(xì)胞核推向細(xì)胞外周，即為肝細(xì)胞脂肪變性；出現(xiàn)肝細(xì)胞腫脹，細(xì)胞核團(tuán)縮、溶解或碎裂，鏡下僅能見到支持肝細(xì)胞的網(wǎng)狀支架及缺損的小葉結(jié)構(gòu)，為肝細(xì)胞壞死[3]。

2.6 數(shù)據(jù)處理

3 結(jié)果

3.1 肝功能生化指標(biāo)檢測結(jié)果

D-BIL值:與生理鹽水組比較，順鉑、卡鉑和紫杉醇無明顯改變，多西紫杉醇、吉西他濱、長春瑞濱顯著升高（P＜0.01），三者之間比較無顯著性差異。ALT值:與生理鹽水組比較，順鉑組明顯升高（P＜0.01），其余5個(gè)藥物組無明顯變化。AST值:與生理鹽水組比較，6個(gè)藥物組均明顯升高（P＜0.05或P＜0.01），其中順鉑組明顯高于其它5個(gè)藥物組（P＜0.01）。ALP值:與生理鹽水組比較，6個(gè)藥物組均明顯升高（P＜0.01），其中卡鉑組明顯低于其它5個(gè)藥物組（P＜0.01）。各組小鼠血清中D-BIL、ALP、AST、ALT水平比較見表1。

表1 各組小鼠血清中D-BIL、ALP、AST、ALT水平比較（，n＝10）Tab 1 Comparison of D-BIL，ALP，AST and ALT activities in mice serum among those group（s，n＝10）

表1 各組小鼠血清中D-BIL、ALP、AST、ALT水平比較（，n＝10）Tab 1 Comparison of D-BIL，ALP，AST and ALT activities in mice serum among those group（s，n＝10）

與生理鹽水組比較:＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與順鉑組比較:#P＜0.01；與卡鉑組比較:ΔP＜0.01vs.normal saline group:＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.cisplatin group:#P＜0.01；vs.carboplatin group:ΔP＜0.01

3.2 肝組織氧化及抗氧化指標(biāo)檢測結(jié)果

與生理鹽水組比較，6個(gè)藥物組MDA含量均明顯升高，GSH含量均明顯降低（P＜0.05或P＜0.01），多西紫杉醇組和吉西他濱組SOD活性明顯降低（P＜0.05）。各組小鼠肝組織中MDA、GSH、SOD活性比較見表2。

表2 各組小鼠肝組織中MDA、GSH、SOD活性比較（，n＝10）Tab 2 Comparison of MDA，GSH and SOD activities in hepatic tissue among those group（s，n＝10）

表2 各組小鼠肝組織中MDA、GSH、SOD活性比較（，n＝10）Tab 2 Comparison of MDA，GSH and SOD activities in hepatic tissue among those group（s，n＝10）

與生理鹽水組比較:＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與多西紫杉醇組比較:#P＜0.05；與吉西他濱組比較:ΔP＜0.05vs.normal saline group:＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.docetaxel group:#P＜0.05；vs.gemcitabine group:ΔP＜0.05

3.3 肝組織病理學(xué)變化

6個(gè)藥物致肝細(xì)胞脂肪變性程度排序?yàn)?多西紫杉醇＞吉西他濱≈順鉑＞紫杉醇≈長春瑞濱＞卡鉑；致肝細(xì)胞壞死程度排序?yàn)?吉西他濱≈多西紫杉醇＞長春瑞濱＞順鉑≈紫杉醇＞卡鉑。肝細(xì)胞瘀膽最嚴(yán)重者為吉西他濱和多西紫杉醇（二者比較無顯著性差異），發(fā)生率均為40%，其次為長春瑞濱；順鉑、卡鉑和紫杉醇組均未出現(xiàn)肝細(xì)胞瘀膽。各組小鼠肝組織病理學(xué)變化比較見表3，病理切片圖見圖1。

4 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，順鉑、卡鉑、紫杉醇、多西紫杉醇、吉西他濱及長春瑞濱6種常用抗腫瘤藥物在給藥第3天均出現(xiàn)肝功能生化指標(biāo)與病理組織形態(tài)的改變，綜合上述指標(biāo)考察，6種藥物致肝損害程度排序?yàn)榧魉麨I≈多西紫杉醇＞長春瑞濱＞順鉑≈紫杉醇＞卡鉑。

表3 各組小鼠肝組織病理學(xué)變化比較（只，n＝10）Tab 3 Comparison of pathological changes of hepatic tissue（number，n＝10）

圖1 各組小鼠肝組織病理切片圖A.生理鹽水組；B.順鉑組；C.卡鉑組；D.紫杉醇組；E.多西紫杉醇組；F.吉西他濱組；G.長春瑞濱組Fig 1 Pathological sections of hepatic tissueA.normal saline group；B.cisplatin group；C.carboplatin group；D.paclitaxel group；E.docetaxel group；F.gemcitabine group；G.vinorelbine group

6種藥物的肝組織脂質(zhì)過氧化物MDA水平較生理鹽水組明顯升高，抗氧化成分GSH水平明顯降低，符合藥物誘導(dǎo)肝臟損傷的氧化應(yīng)激反應(yīng)機(jī)制，即藥物誘導(dǎo)的肝臟損傷與藥物的代謝異常有密切關(guān)系。藥物本身含有的及其經(jīng)細(xì)胞色素P450（CYP450）酶系代謝產(chǎn)生的自由基、親電子基、氧基等有害活性物質(zhì)，通常與GSH結(jié)合而解毒，并不產(chǎn)生肝損害；而多種原因可導(dǎo)致這些有毒活性物質(zhì)的產(chǎn)生超過了肝內(nèi)GSH代償水平，使肝組織抗氧化防御體系（GSH等）功能下降，引發(fā)脂質(zhì)過氧化，肝組織脂質(zhì)過氧化鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的終產(chǎn)物之一MDA升高，導(dǎo)致肝臟氧化應(yīng)激損傷，輕者為脂肪變性（具有可逆性），重者可發(fā)生中毒性肝細(xì)胞壞死[4，5]。

護(hù)肝輔助治療可有效地預(yù)防化療藥物所致的肝損害[6，7]。鑒于氧化應(yīng)激反應(yīng)在化療性肝損傷的作用，建議臨床上在使用上述6種藥物化療期間應(yīng)及早使用抗氧化劑，通過其與過氧化物及自由基結(jié)合，拮抗氧化劑對(duì)巰基的破壞，保護(hù)細(xì)胞膜中含巰基的蛋白質(zhì)和含巰基酶，減輕化療對(duì)肝臟的毒副作用。

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