呂承哲，張全英，王蒙（1.蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院，蘇州市15003；.蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院，蘇州市15004）

聚氯乙烯輸液器對(duì)左旋丁苯酞的吸附作用考察

呂承哲1＊，張全英2#，王蒙2（1.蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院，蘇州市215003；2.蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院，蘇州市215004）

目的：考察左旋丁苯酞在聚氯乙烯（PVC）輸液器中的吸附情況。方法：用0.9%氯化鈉注射液與左旋丁苯酞注射液混合，制備成低、高濃度的左旋丁苯酞/氯化鈉注射液，模擬臨床靜脈滴注，流經(jīng)PVC輸液器，在120min內(nèi)不同時(shí)間段收集流出的樣品，用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法測(cè)定左旋丁苯酞濃度，并分別與流經(jīng)輸液器前（0min）的結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果：低、高濃度左旋丁苯酞/氯化鈉注射液流經(jīng)輸液器前、后濃度有顯著性差異（P＜0.05）。結(jié)論：PVC輸液器對(duì)左旋丁苯酞有吸附作用，臨床應(yīng)用時(shí)應(yīng)考慮配備合適的輸液器。

左旋丁苯酞；聚氯乙烯輸液器；吸附；高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

丁苯酞又名芹菜甲素，是一種治療腦卒中的新藥，其通過(guò)影響花生四烯酸的代謝，減少后者誘導(dǎo)的血小板聚集作用，從而改善腦部缺血的癥狀[1]。其有左旋和右旋對(duì)映異構(gòu)體，其中左旋丁苯酞臨床應(yīng)用前景更好。

石藥集團(tuán)中奇制藥技術(shù)（石家莊）有限公司首次研制開(kāi)發(fā)了左旋丁苯酞注射液，目前該制劑在國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)其臨床應(yīng)用文獻(xiàn)報(bào)道，為國(guó)家一類新藥，其規(guī)格為50mg∶100mL，處方工藝中選擇氯化鈉溶液為溶劑。聚氯乙烯（PVC）為常用輸液器材料，有文獻(xiàn)[2～5]報(bào)道PVC對(duì)部分藥物具有吸附作用。因此，筆者設(shè)計(jì)了相關(guān)試驗(yàn)，初步考察PVC輸液器對(duì)左旋丁苯酞的吸附作用，為臨床安全、有效、合理用藥提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

API-4000型液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜（LC-MS/MS）聯(lián)用儀、Agilent 1200高效液相色譜（HPLC）儀、電噴霧源、Analyst 1.4.2數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（美國(guó)Applied Biosystem Sciex公司）；PVC輸液器（浙江康康醫(yī)療器械有限公司，批號(hào)：060401）；聚丙烯（PP）250mL塑料瓶（廣東大冢制藥有限公司，批號(hào)：080203）。

左旋丁苯酞對(duì)照品（批號(hào)：040708，純度：99.7%）、左旋丁苯酞氯化鈉注射液（批號(hào)：20080309，規(guī)格：50mg∶100mL）均由石藥集團(tuán)中奇制藥技術(shù)（石家莊）有限公司提供；地西泮（內(nèi)標(biāo)）對(duì)照品（國(guó)家麻醉品實(shí)驗(yàn)室，批號(hào)：1230-9601，純度：100.0%）；0.9%氯化鈉注射液（NS）250mL（廣東大冢制藥有限公司，批號(hào)：080420）；甲醇和甲酸為色譜純，醋酸銨為分析純，水為滅菌注射用水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[6]

色譜柱：XTerra?RP-18（150mm×4.6mm，5μm）；預(yù)柱：Phenomenex Security GuardTMC18；流動(dòng)相：甲醇-2.5mmol·L－1醋酸銨緩沖液（含0.1%甲酸）＝85∶15（V/V）；流速：1mL·min－1；進(jìn)樣體積：10μL；每個(gè)樣品的分析時(shí)間為 3min；左旋丁苯酞和內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間為2.20min左右。

2.2 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源，在正離子電離模式下，采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）的質(zhì)譜掃描方式，測(cè)定左旋丁苯酞和內(nèi)標(biāo)的母/子離子對(duì)分別為：m/z 191.1→145.1和m/z 285.1→193.1。參數(shù)：碰撞氣（CAD）流速：6psi，簾氣（CUR）流速：20psi，霧化氣（Gas1）流速：70psi，輔助氣（Gas2）流速：55psi，噴霧電壓（IS）：5500V，霧化溫度（TEM）：450℃。在此質(zhì)譜條件下，左旋丁苯酞和內(nèi)標(biāo)的準(zhǔn)分子離子的二級(jí)全掃描MS圖見(jiàn)圖1。

圖1 質(zhì)譜圖A.左旋丁苯酞；B.內(nèi)標(biāo)Fig 1 MS chromatogramsA.levobutylphthalide；B.inner standard

2.3 溶液制備及系統(tǒng)分離

2.3.1 左旋丁苯酞標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液制備。精密稱取20.0mg左旋丁苯酞，以甲醇定容至10mL容量瓶中，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線貯備液。取適量上述標(biāo)準(zhǔn)曲線貯備液以甲醇-水＝1∶1為溶劑，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液，濃度分別為50、100、200、500、1000、2000、5000ng·mL－1。

2.3.2 內(nèi)標(biāo)工作液制備。精確稱取10.0mg內(nèi)標(biāo)，以甲醇定容至10mL容量瓶中，得內(nèi)標(biāo)貯備液。取內(nèi)標(biāo)貯備液（1.00mg·mL－1）250μL至250mL容量瓶中，加入水定容至刻度，得到濃度為1.00μg·mL－1的內(nèi)標(biāo)工作液。

2.3.3 樣品處理。精密吸取注射用水180μL，分別加入7種濃度左旋丁苯酞標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液各20μL，得左旋丁苯酞濃度為5、10、20、50、100、200、500ng·mL－1的標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，加入1.00μg·mL－1內(nèi)標(biāo)工作液50μL，混勻后分別進(jìn)樣10μL，記錄色譜圖。以左旋丁苯酞與內(nèi)標(biāo)的峰面積之比為Y，左旋丁苯酞濃度為c，進(jìn)行線性回歸，得線性方程為Y＝0.02c+0.00104（r＝0.9989，n＝6）。

2.3.4 系統(tǒng)分離。取空白（注射用水）、空白+左旋丁苯酞對(duì)照品（5ng·mL－1）+內(nèi)標(biāo)（1.00μg·mL－1）及供試液（“2.7.2”項(xiàng)下 H組注射液流經(jīng)PVC輸液器60min后注射液）的LC-MS/MS圖譜見(jiàn)圖2。

圖2 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜圖A.空白；B.空白+左旋丁苯酞對(duì)照品+內(nèi)標(biāo)；C.供試液；Ⅰ.左旋丁苯酞；Ⅱ.內(nèi)標(biāo)Fig 2 LC-MS/MS chromatogramsA.blank；B.blank+levobutylphthalide+inner standard；C.sample；Ⅰ.levobutylphthalide；Ⅱ.inner standard

2.4 精密度試驗(yàn)

精密稱取20.0mg左旋丁苯酞對(duì)照品，以甲醇定容至10mL容量瓶中，作為質(zhì)控貯備液，取適量質(zhì)控貯備液以甲醇-水＝1∶1為溶劑，制備質(zhì)控工作液濃度分別為120、1200、4000ng·mL－1。精密吸取注射用水180μL，分別加入上述3種濃度質(zhì)控工作液各20μL，制備成左旋丁苯酞濃度為12、120、400ng·mL－1的質(zhì)控溶液，加入1.00μg·mL－1內(nèi)標(biāo)工作液50μL，混勻后分別進(jìn)樣10μL，按精密度試驗(yàn)方法操作，每個(gè)濃度進(jìn)行5個(gè)樣本分析，測(cè)定3批，求得日內(nèi)RSD分別為5.1%、1.6%、1.5%，日間RSD分別為8.9%、8.2%、11.8%（n＝5）。

2.5 回收率試驗(yàn)

精密吸取左旋丁苯酞氯化鈉注射液1mL，以水定容至250mL容量瓶中。吸取上述溶液1mL至3個(gè)具塞試管中，分別加入適量質(zhì)控工作液至上述溶液中，使左旋丁苯酞濃度為26、80、400ng·mL－1。每個(gè)濃度吸取 200μL，加入1.00μg·mL－1內(nèi)標(biāo)溶液50μL，混勻后分別進(jìn)樣10μL，每個(gè)濃度進(jìn)行5個(gè)樣本分析，測(cè)得低、中、高濃度回收率分別為（97.8±6.2）%、（96.3±1.4）%、（97.5±1.9）%（n＝5）。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

參照“2.4”項(xiàng)下方法制備左旋丁苯酞濃度為12、120、400ng·mL－1的質(zhì)控溶液，每個(gè)濃度選3個(gè)樣本進(jìn)行分析，考察樣品溶液于室溫放置6h的穩(wěn)定性。結(jié)果，RSD均小于15%，表明樣品溶液于室溫放置6h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 吸附試驗(yàn)

2.7.1 PP塑料瓶吸附試驗(yàn)。左旋丁苯酞注射液規(guī)格為50mg∶100mL，臨床擬使用劑量范圍為40mg∶240mL～120mg∶240mL，一次輸液時(shí)間是60min。左旋丁苯酞注射液使用100mL玻璃瓶，容量較小，考慮到醫(yī)院臨床采用的輸液容器均為PP材質(zhì)，因此選用PP 250mL塑料瓶作為容器，以NS稀釋，得到含左旋丁苯酞40mg∶240mL和120mg∶240mL的左旋丁苯酞/氯化鈉注射液，分別記為L(zhǎng)組和H組注射液，每組制備3份，靜置120min。在0、120min時(shí)分別精密取樣1mL經(jīng)稀釋后測(cè)定含量。以0min的左旋丁苯酞濃度為100%，計(jì)算120min時(shí)的左旋丁苯酞的相對(duì)含量，各取3份注射液計(jì)算平均值。使用SPSS17.0軟件，以靜置后（120min）數(shù)據(jù)與靜置前（0min）數(shù)據(jù)分組進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，結(jié)果顯示2組比較無(wú)顯著性差異（P＞0.05），說(shuō)明左旋丁苯酞氯化鈉注射液在PP塑料瓶中120min內(nèi)含量是穩(wěn)定的，詳見(jiàn)表1。

表1 2組注射液在PP塑料瓶中的平均含量變化（%%，n＝3）Tab 1 Average content of samples of 2groups in PP plastic bottle（%%，n＝3）

2.7.2 PVC輸液器吸附試驗(yàn)。根據(jù)臨床擬使用劑量，以NS稀釋，得到含左旋丁苯酞40mg∶240mL和120mg∶240mL的左旋丁苯酞/氯化鈉注射液，分別記為L(zhǎng)組和H組注射液，每組制備3份。2組注射液分別流經(jīng)PVC輸液器，模擬臨床靜脈滴注，60min滴注完畢。按時(shí)從輸液器末端取樣，在0、10、20、40、60min時(shí)各精密取樣1mL稀釋后測(cè)定。以0min的左旋丁苯酞濃度為100%，計(jì)算其他時(shí)間點(diǎn)的左旋丁苯酞的相對(duì)含量，各取3份注射液計(jì)算平均值。使用SPSS17.0軟件以流經(jīng)輸液器后含量數(shù)據(jù)與流經(jīng)輸液器前含量數(shù)據(jù)依次分組進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，結(jié)果顯示2組結(jié)果均存在顯著性差異（P＜0.05），詳見(jiàn)表2。

表22 組注射液在PVC輸液器中的平均含量變化（%%，n＝3）Tab 2 Average content of samples of 2groups in PVC infusion（%%，n＝3）

3 討論

醫(yī)用高分子聚合物包裝材料應(yīng)用十分普遍，藥物在其中的穩(wěn)定性亦引起了廣泛關(guān)注。輸液容器及輸液器對(duì)某些藥物可能會(huì)有吸附作用，使藥物濃度降低。目前臨床常用PP材質(zhì)的輸液容器和PVC材質(zhì)的輸液器，因此本試驗(yàn)中選擇了PP塑料瓶及PVC輸液器考察其對(duì)左旋丁苯酞的吸附作用。

采用LC-MS/MS法測(cè)定左旋丁苯酞/氯化鈉注射液中左旋丁苯酞的含量，其方法簡(jiǎn)便、快捷、專屬性強(qiáng)。

試驗(yàn)結(jié)果顯示，PP塑料瓶對(duì)左旋丁苯酞/氯化鈉注射液未見(jiàn)明顯的吸附作用，PVC輸液器對(duì)左旋丁苯酞/氯化鈉注射液有明顯的吸附作用。主要原因在于：PVC材料在生產(chǎn)過(guò)程中為改變其性能加入了增塑劑鄰苯二甲酸二異辛酯（DEHP），在使用過(guò)程中可能有DEHP溶出，與藥液可能發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；在輸液輸入的初期，輸液管壁表面處于空白狀態(tài)，DEHP易與藥物發(fā)生結(jié)構(gòu)配位，吸附作用大；隨著輸液管壁表面被吸附的藥物分子不斷增多，結(jié)構(gòu)配位空間減少，藥物發(fā)生可逆性吸附的部分吸附速度減慢，此時(shí)解吸附較易發(fā)生。從表2看出，在10min時(shí)吸附率最大，以后的輸液過(guò)程中吸附率逐漸減少。PP輸液瓶由于不存在增塑劑，因此，與藥液不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，穩(wěn)定性好，與文獻(xiàn)[3，7～9]報(bào)道結(jié)果一致。

因此，筆者認(rèn)為在下一步試驗(yàn)中，有必要對(duì)輸液過(guò)程中可能用到的其他材料的輸液器對(duì)該藥是否也存在吸附作用進(jìn)行研究，以減少因吸附所致藥物的損失，并尋找臨床應(yīng)用時(shí)適合的配套輸液器，從而保證臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和藥物的療效。

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Study on Absorption Effect of Infusion Systems of Polyvinyl Chloride on Levobutylphthalide

LV Cheng-zhe（The Affiliated Children’s Hospital of Soochow University，Suzhou 215003，China）
ZHANG Quan-ying，WANG Meng（The Second Affiliated Hospital of Soochow University，Suzhou 215004，China）

OBJECTIVE：To investigate the absorption of levobutylphthalide onto infusion system of polyvinyl chloride（PVC）.METHODS：0.9%sodium chloride injection was mixed with levobutylphthalide injection.The high-concentration and low-concentration mixtures were injected intravenously using PVC infusion systems.Samples were collected at different time points within 120min.The content of samples were determined by LC-MS/MS and compared with the result before infusion.RESULTS：There was significant difference in content of high-concentration and low-concentration mixtures between before and after infusion（P＜0.05）.CONCLUSION：In the study，PVC infusion system has adsorption effect on levobutylphthalide.We should adopt suitable infusion system in the clinic.

Levobutylphthalide；Infusion system of polyvinyl chloride；Absorption；LC-MS/MS

R972；R927.2

A

1001-0408（2011）29-2764-03

2011-02-24

2011-03-21）