王志亮

（中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東 青島 266034）

非洲豬瘟（ASF）是由病毒（ASFV）引起的家豬和野豬的一種高度接觸性傳染病，所有品種和年齡的豬均易感。家豬感染后出現(xiàn)發(fā)熱、高病毒血癥和出血性病變等典型特征，發(fā)病率高，但死亡率因感染毒株和豬品種的不同而有所差異，從5%到100%不等。通常將臨床表現(xiàn)分為最急性、急性、亞急性和慢性四種類型，最急性和急性型病死率高，解剖病變與古典豬瘟類似，（但病程更短，盲腸結(jié)腸見不到潰瘍，脾臟見不到梗死）。不同種類的野豬感染后臨床表現(xiàn)差異很大，其中歐亞野豬、美洲野豬的臨床表現(xiàn)與家豬類似，而非洲的疣豬、叢林野豬等多呈陰性感染，北美的花斑野豬對(duì)本病具有抵抗力。目前，ASF診斷和檢測(cè)技術(shù)非常成熟，但疫苗研究卻一直未能成功，因此歷史上所有消滅非洲豬瘟的國(guó)家，都是通過及時(shí)準(zhǔn)確的診斷檢測(cè)和嚴(yán)格有效的封鎖撲殺等措施取得成功的。

1 流行病學(xué)

發(fā)病豬的血液和分泌物中含有大量病毒，鈍緣蜱屬的軟蜱可以感染、繁殖并傳播病毒，因而帶毒家豬、野豬和鈍緣蜱都是該病的宿主和傳染源。研究表明，鈍緣蜱屬的軟蜱，尤其是O.moubata、O.erraticus等鈍緣蜱，其壽命可長(zhǎng)達(dá)20年之久，不僅可長(zhǎng)期攜帶病毒，也可通過交配和卵傳遞病毒。ASFV主要通過消化道和鈍緣蜱叮咬感染，但在同一豬群內(nèi)也可通過呼吸道感染。ASFV可通過不同的方式進(jìn)行傳播:遠(yuǎn)離非洲且歷史上無疫情的國(guó)家多通過含ASFV的豬肉制品或運(yùn)輸工具廢棄的殘羹傳入；接壤的國(guó)家還可以通過帶毒野豬的遷移傳入；此外有軟蜱存在的國(guó)家，病毒還能通過軟蜱與野豬（尤其是疣豬）之間的循環(huán)得以長(zhǎng)期維持，并伺機(jī)傳染給家豬。一般情況下，直接接觸感染的潛伏期為5～15 d，而軟蜱叮咬感染的潛伏期在5 d之內(nèi)。

2 歷史分布

迄今，全球共有49個(gè)國(guó)家曾經(jīng)發(fā)生或仍有ASF流行，特別是近年來高加索地區(qū)疫情嚴(yán)峻，對(duì)我國(guó)構(gòu)成極大威脅。ASF疫情最早于20世紀(jì)初發(fā)現(xiàn)于肯尼亞，1921年，蒙哥馬利對(duì)歐洲家豬引入肯尼亞后的疫情發(fā)生情況進(jìn)行了詳細(xì)描述，隨后許多非洲國(guó)家均有報(bào)道，而且至今仍在撒哈拉以南地區(qū)流行。1957年，ASF首次在非洲大陸以外的地區(qū)出現(xiàn)，葡萄牙里斯本機(jī)場(chǎng)附近的豬場(chǎng)因飼喂了來自安哥拉航班的泔水而暴發(fā)疫情，隨后西班牙（1960）、法國(guó)（1964）、意大利（1967）、前蘇聯(lián)（1977）、馬耳他（1978）、比利時(shí)（1985）、荷蘭（1986）等歐洲國(guó)家均有發(fā)生，雖然多數(shù)國(guó)家很快撲滅了疫情，但葡萄牙和西班牙的疫情卻長(zhǎng)期存在，直到1994和1995年才真正消滅。意大利的撒丁島由于存在野豬感染和康復(fù)帶毒豬，從1978年首次傳入以來，疫情一直存在。美洲部分國(guó)家，如古巴（1971、1980）、巴西（1978）、多米尼加（1978）和海地（1979）等都曾發(fā)生過ASF疫情，但相繼撲滅。2007年，歐洲大陸出現(xiàn)第二次流行，疫情首先在格魯吉亞Poti港附近的農(nóng)場(chǎng)出現(xiàn)，隨后迅速傳至亞美尼亞、阿塞拜疆和俄羅斯聯(lián)邦等周邊國(guó)家。此次疫情的發(fā)生，可能與飼喂了國(guó)際貨輪上被ASFV污染了的肉品垃圾有關(guān)，目前仍呈擴(kuò)大蔓延趨勢(shì)，已造成巨大損失。

3 病原研究

ASFV是非洲豬瘟病毒科非洲豬瘟病毒屬中的唯一成員。在形態(tài)上類似虹彩病毒，在基因組結(jié)構(gòu)復(fù)制方式上類似痘病毒，實(shí)際并不相同。完整的病毒顆粒直徑約200nm，具有復(fù)雜的多層結(jié)構(gòu)，外被囊膜，內(nèi)有核衣殼，20面體對(duì)稱，六邊形外觀。病毒中部為高電子密度核心，直徑約80nm，由病毒基因組以及完成早期轉(zhuǎn)錄所必需的酶（如DNA依賴性RNA聚合酶、mRNA加帽酶、多腺苷酸聚合酶等）和一些DNA結(jié)合蛋白組成（如P14.5、P10等）；核心外圍是核心衣殼，由 P150、P37、P34、P14 等蛋白組成；其外側(cè)是源自內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的內(nèi)囊膜（含 P54、P32、P22、P12、CD2v等）和圍繞在內(nèi)囊膜周圍的病毒衣殼（含P72、P17等）；病毒在出芽時(shí)可獲得外囊膜（含P24、P12、CD2v、P54等）。病毒能誘導(dǎo)易感動(dòng)物產(chǎn)生高滴度抗體，但不具備保護(hù)作用，僅具有診斷意義。多數(shù)毒株感染單核-巨噬細(xì)胞后具有紅血球吸附能力，可用玫瑰花環(huán)試驗(yàn)證實(shí)。

3.1 病毒基因組

ASFV基因組為線狀雙股單分子DNA，全長(zhǎng)約170～192kb。中部為中央保守區(qū)（C區(qū)），長(zhǎng)度約125kb，該區(qū)域的一些基因（如P72基因）常作為ASFV基因分型的依據(jù)；C區(qū)還含有一個(gè)4 kb的中央可變區(qū)（CVR），位于 P72伴侶蛋白基因 B602L（9RL），在不同基因型或同一基因型的不同毒株之間都存在差異；C區(qū)兩測(cè)各有一個(gè)可變區(qū)，分別稱為VL（38～48 kb）和 VR（13～22 kb），含有 5個(gè)多基因家族（MGF），每個(gè)多基因家族都可發(fā)生缺失、增加、分化等變異，這在不同毒株之間差異很大，與病毒抗原變異、逃避宿主防御系統(tǒng)的機(jī)制有關(guān)；基因組的兩端為共價(jià)閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)，均含有長(zhǎng)度為2.1～2.5 kb的顛倒重復(fù)序列（TIR）。

3.2 病毒編碼蛋白

基因組編碼蛋白的數(shù)量因毒株不同而有所差異，一般為150～175種，分布在DNA兩條鏈上。有的基因是以多聚蛋白（如PP220、PP62等）的形式表達(dá)，經(jīng)翻譯后加工形成大小不等的多種蛋白分子。迄今，發(fā)現(xiàn)純化的病毒粒子中至少含有54種蛋白，而感染的巨噬細(xì)胞中至少有100種病毒相關(guān)蛋白，這些蛋白的功能包括形成病毒的結(jié)構(gòu)、實(shí)現(xiàn)病毒感染、催化病毒復(fù)制轉(zhuǎn)錄以及逃避宿主防御系統(tǒng)等。其中至少有50種蛋白具有免疫原性，在自然感染過程中能誘生抗體，特別是細(xì)胞結(jié)合蛋白（如P72、P54和P12）以及病毒內(nèi)吞相關(guān)蛋白（如P32）等都具有很高的抗原性。雖然這些蛋白不足以誘導(dǎo)產(chǎn)生保護(hù)性免疫反應(yīng)，但卻足以用于血清學(xué)診斷。

3.2.1 P72 又稱P73，分子量73.2 kD，位于細(xì)胞內(nèi)病毒粒子的表層，是由B646L基因編碼的主要衣殼蛋白，具有很高的保守性。B646L基因C-末端約478 bp的核酸片段常用于ASFV分子診斷、遺傳進(jìn)化分析和基因型鑒別，利用該片段可將ASFV分成22個(gè)基因型，其中，2007年傳入高加索地區(qū)的ASFV毒株為基因II型。

P72產(chǎn)生于病毒感染的晚期，含有優(yōu)勢(shì)抗原決定簇，能誘生高滴度的特異性IgG抗體。由于P72保守性高、抗原性好且易于分離純化，目前已作為主要抗原用于ASFV-IgG抗體檢測(cè)。

3.2.2 P54 又稱 j13L，分子量 19.9 kD，由 E183L基因編碼，屬于I類膜蛋白，含半胱氨酸殘基，分子間以二硫鍵相連形成二聚體，存在于病毒的內(nèi)外囊膜上。在感染細(xì)胞過程中，P54蛋白能與胞質(zhì)動(dòng)力蛋白輕鏈LC8直接結(jié)合，從而促進(jìn)病毒與宿主細(xì)胞的吸附和侵入。體外實(shí)驗(yàn)中，純化的P54蛋白或其抗體能阻斷病毒與易感細(xì)胞的結(jié)合，但活體試驗(yàn)并不明顯。在感染細(xì)胞內(nèi)，P54通過N末端跨膜區(qū)與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜結(jié)合，通過收斂作用，促進(jìn)病毒囊膜前體的形成，因此是病毒復(fù)制的必需蛋白。

由于P54是一種抗原性強(qiáng)的膜結(jié)合蛋白，病毒感染后能產(chǎn)生針對(duì)P54的高滴度的IgG和IgM抗體，用P54蛋白建立的ELISA抗體檢測(cè)方法，具有很高的敏感性、特異性和穩(wěn)定性，與OIE全病毒抗原ELISA水平相當(dāng)，用弱毒攻毒后7～10 d即可檢測(cè)到抗體，而且其制備過程不需要高的生物安全條件，因此是目前綜合評(píng)價(jià)最好的ELISA診斷抗原。

3.2.3 P32 又稱P30，分子量23.6kD，由CP204L基因編碼，是一種磷蛋白，與病毒侵入有關(guān)。P32含有優(yōu)勢(shì)抗原決定簇，能誘導(dǎo)較強(qiáng)的體液免疫應(yīng)答，而且，P32能在病毒感染的早期進(jìn)行表達(dá)和分泌，產(chǎn)生抗體較早，因此，基于P32的ELISA常用于非洲豬瘟感染的早期診斷。

3.2.4 PP62 又稱PP60或P60，是一種多聚蛋白，分子量60.5 kD，由CP530R基因編碼，在病毒復(fù)制晚期表達(dá)，經(jīng)病毒編碼的SUMO樣蛋白酶裂解形成P35和P15兩種病毒結(jié)構(gòu)蛋白，這一過程是在感染細(xì)胞內(nèi)的病毒工廠中完成的。有研究表明，PP62抗體檢測(cè)ELISA，具有很高的敏感性。

3.2.5 PP220 又稱P220，也是一種多聚蛋白，分子量281.5 kD，由CP2475L基因編碼，晚期表達(dá)，經(jīng)SUMO樣蛋白酶裂解生成P150、P37、P34和P14，這4種蛋白約占ASFV蛋白總量的25%，是構(gòu)成核心殼的主要成分，在病毒形態(tài)形成過程中起著重要作用。

3.2.6 其它蛋白 P12由O61R基因編碼，具有細(xì)胞吸附功能；S273R基因編碼SUMO樣蛋白酶，能水解多聚蛋白；CD2v由EP402R基因編碼，類似CD2，能使感染細(xì)胞具有紅血球吸附特性，是ASFV惟一的糖蛋白；B602L（又稱9RL）為P72伴侶蛋白，協(xié)助完成病毒衣殼的組裝；P14.5為DNA結(jié)合蛋白，在病毒粒子向胞漿膜遷移過程中發(fā)揮作用。ASFV還象痘病毒一樣，編碼胸苷激酶、DNA聚合酶、DNA連接酶、RNA聚合酶、解旋酶等大量完成復(fù)制和轉(zhuǎn)錄功能的酶類，此外，還有許多蛋白的生物學(xué)和免疫學(xué)功能目前尚不清楚。

3.3 病毒分型

ASFV血清中和試驗(yàn)結(jié)果很不確實(shí)，因此血清分型難以進(jìn)行，也無實(shí)際意義。在病原分子流行病學(xué)調(diào)查研究中，多采用P72基因序列分析的方法進(jìn)行基因分型，迄今全球流行的ASFV毒株可分為22個(gè)基因型，其大致分布見圖2。

3.4 抵抗力

ASFV非常穩(wěn)定，對(duì)熱、腐敗、酸堿和蛋白酶均具有較高耐受性。在有血清介質(zhì)的情況下存活時(shí)間:5℃為6年，室溫為18個(gè)月，37℃為1個(gè)月，56℃為3.5 h。對(duì)pH變化抵抗力強(qiáng)，一般在無血清條件下，在pH3.9～11.5范圍內(nèi)穩(wěn)定，pH13.4時(shí)仍能存活21 h；在有血清條件下抵抗力更強(qiáng)，pH3.1存活22 h，pH3.9存活3 d，pH13.4存活7 d。室溫條件下，在糞便中可存活11 d，腐敗血液中15 w；4℃條件下，在血液中存活18個(gè)月；在腌制干火腿中可存活150 d；在半熟肉以及泔水中也可長(zhǎng)時(shí)間存活。

ASFV對(duì)乙醚和氯仿等脂溶劑敏感，消毒劑中季銨鹽、碘制劑和苯酚類效果較好，而0.8%NaOH、含2.3%有效氯的次氯酸鹽、0.3%福爾馬林以及3%鄰苯基苯酚均可在30min鐘內(nèi)滅活。

3.5 培養(yǎng)特性

ASFV可在豬單核巨噬細(xì)胞、骨髓細(xì)胞和白細(xì)胞中生長(zhǎng)，可從豬血分離白細(xì)胞、仔豬骨髓中分離骨髓細(xì)胞、豬肺中分離巨噬細(xì)胞用于病毒分離培養(yǎng)；某些毒株經(jīng)適應(yīng)后也可在MS（Monkey stable，猴穩(wěn)定細(xì)胞系）、Vero、豬腎、牛腎等細(xì)胞以及雞胚中生長(zhǎng)；有的實(shí)驗(yàn)室還采用軟蜱進(jìn)行病毒的傳代培養(yǎng)。

多數(shù)毒株感染白細(xì)胞后1～3 d出現(xiàn)病變，并能吸附豬的紅血球，可通過紅血球吸附試驗(yàn)（HAD）加以證實(shí)。傳代細(xì)胞適應(yīng)毒引起的細(xì)胞病變更加明顯，在胞漿中可見包涵體，細(xì)胞容易脫落，可用熒光抗體或PCR方法等方法檢測(cè)細(xì)胞中的病毒。

4 感染與免疫

4.1 感染發(fā)病機(jī)制

ASFV對(duì)單核巨噬細(xì)胞具有明顯的親和力，病毒以不同方式進(jìn)入機(jī)體后，可直接或通過血液循環(huán)感染局部淋巴組織中的單核巨噬細(xì)胞，大量增殖后，再次進(jìn)入血液，吸附于紅細(xì)胞等血細(xì)胞，隨血液循環(huán)感染更多部位的單核巨噬細(xì)胞，稍后可進(jìn)一步感染內(nèi)皮細(xì)胞、巨核細(xì)胞、中性細(xì)胞和肝細(xì)胞等多種細(xì)胞類型。同其它出血熱病毒一樣，ASFV可導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，使血管通透性增加，從而引起廣泛的出血性病變，在感染后期，則進(jìn)一步發(fā)展成彌漫性血管內(nèi)凝血（DIC），抗體與細(xì)胞成分的免疫復(fù)合物可能在這一過程發(fā)揮作用。在淋巴組織中，ASFV強(qiáng)毒株能導(dǎo)致大量的淋巴細(xì)胞凋亡，由于病毒不能直接感染T和B淋巴細(xì)胞，推測(cè)這種凋亡是由病毒感染的巨噬細(xì)胞表面或釋放的細(xì)胞因子引起的，并最終導(dǎo)致T和B細(xì)胞數(shù)量顯著減少，從而對(duì)ASFV免疫應(yīng)答受到損傷。

多數(shù)ASFV分離株能使家豬發(fā)生急性出血熱，感染后8～14 d，致死率可高達(dá)100%，某些中等毒力的毒株，致死率會(huì)降低至30%～50%，而伊比利亞半島分離的弱毒株，癥狀輕微，致死率很低。強(qiáng)毒或中等毒感染后，豬血毒滴度可達(dá)到每毫升108個(gè)半數(shù)紅細(xì)胞吸附單位（即108HAD50/mL），但康復(fù)之后血毒水平較低，病毒在組織中復(fù)制也顯著減少。新生仔豬人工感染表明，最早于感染后8 h即可出現(xiàn)初次病毒血癥，15～24 h出現(xiàn)第二次病毒血癥，30 h幾乎所有組織均可測(cè)到病毒，72 h即可達(dá)到最高滴度。弱毒感染后，雖然在淋巴組織中可檢測(cè)到中等水平的病毒滴度，但血毒滴度很低且僅能從少數(shù)豬中檢出?？祻?fù)豬能長(zhǎng)期、持續(xù)帶毒，這一特性說明ASFV能有效地逃避宿主防御系統(tǒng)。

4.2 免疫應(yīng)答

感染ASFV強(qiáng)毒的豬多在出現(xiàn)體液免疫應(yīng)答之前就已死亡，存活時(shí)間稍長(zhǎng)的豬則可出現(xiàn)特異性體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，康復(fù)豬對(duì)同源毒株的攻擊能產(chǎn)生較強(qiáng)保護(hù)力，但對(duì)異源毒株卻沒有抵抗力。早期研究表明，用弱毒株進(jìn)行攻毒，1周后部分豬血清中出現(xiàn)補(bǔ)體結(jié)合（CF）抗體，2周后多數(shù)豬CF抗體陽性，部分豬開始出現(xiàn)瓊擴(kuò)（AGP）抗體，3周后所有豬CF和AGP抗體陽性，可維持?jǐn)?shù)月以上。用ELISA試劑盒，多數(shù)在感染后7～10 d即可檢測(cè)到抗體，而且由于持續(xù)感染的存在，抗體可持續(xù)終生。

ASFV不能使機(jī)體產(chǎn)生具有保護(hù)作用的中和抗體，體外中和試驗(yàn)也大都得出同樣結(jié)論；另一方面，該病毒誘導(dǎo)產(chǎn)生的特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答，僅能提供部分但并不充分的免疫保護(hù)。有研究者認(rèn)為耐過病豬能夠抵抗同源毒株的攻擊，是由于產(chǎn)生了干擾物質(zhì)的緣故。

5 診斷試劑與疫苗研究

由于目前尚無有效的疫苗，所有ASF的控制和消滅措施，均基于快速準(zhǔn)確的診斷。ASF診斷方法有很多，包括病原分離、紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)、PCR檢測(cè)、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、ELISA、免疫印跡（IB）、免疫熒光（IF）等。

5.1 診斷試劑

5.1.1 診斷抗原 可采用基因表達(dá)的方法制備抗原，也可采用病毒的細(xì)胞培養(yǎng)物制備抗原。

基因表達(dá)抗原，如 P72、P54、P32、PP62、A104R、B602L、K205R等，均被用于ELISA抗體檢測(cè)試劑的開發(fā)，其中P72、P54等應(yīng)用較廣，如西班牙INGENASA公司生產(chǎn)的ASFV抗體阻斷ELISA試劑盒和雙抗夾心ELISA試劑盒，均以P72表達(dá)抗原及其單抗為基礎(chǔ)，分別用于抗體和病原檢測(cè)。

全病毒抗原，采用ASFV弱毒株感染MS等傳代細(xì)胞系制備，是目前OIE推薦的抗原制備方法，可廣泛用于ELISA、免疫印跡和瓊擴(kuò)試驗(yàn)等。

5.1.2 診斷抗體

陽性血清 可采用ASF康復(fù)豬血清制備，也可采用攻毒的方法制備。后者需在ABSL-3實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，一般先用高滴度的弱毒株肌肉注射攻毒，再用低滴度的強(qiáng)毒株攻毒，根據(jù)需要可重復(fù)攻毒，最后一次攻毒后10 d，采血分離血清，56℃30min滅能，經(jīng)相應(yīng)方法（如 ELISA、CF、AGP等）標(biāo)定后，小量分裝，-20℃保存。

單抗 ASFV多種蛋白的單抗已研制成功，有的已用于診斷，如INGENASA夾心ELISA、阻斷ELISA等均以P72不同表位單抗作為捕獲或指示抗體。

5.1.3 抗原檢測(cè)ELISA 以單抗為基礎(chǔ)的夾心ELISA，可用于ASFV抗原檢測(cè)，特異性較高。INGENASA夾心ELISA試劑盒，以包被的P72（P73）單抗吸附樣品中的病毒抗原，用針對(duì)P72另一表位酶標(biāo)單抗顯示抗原的存在，可用于檢測(cè)血液、脾臟或淋巴結(jié)中的病毒抗原。

5.1.4 抗體檢測(cè)ELISA（OIE國(guó)際貿(mào)易指定試驗(yàn)）

間接ELISA 該方法以全病毒抗原或表達(dá)抗原（如P72，P54等）包板，借以吸附血清中的ASFV抗體，然后以酶標(biāo)SPA（或抗豬IgG）指示抗體的存在，陽性樣品有顏色反應(yīng)。

阻斷ELISA 包被抗原同間接ELISA，指示抗體采用針對(duì)某一蛋白（如P72）的酶標(biāo)單抗，如果血清中有ASFV抗體，則單抗與包被抗原結(jié)合受阻，可根據(jù)OD值計(jì)算阻斷率，從而估計(jì)陽性值的高低，強(qiáng)陽性樣品無顏色反應(yīng)。

5.1.5 PCR檢測(cè)（OIE國(guó)際貿(mào)易指定試驗(yàn)）

普通PCR根據(jù)ASFV分離株BA71V之P72基因保守序列設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增基因組第88363～88619位核苷酸片段，總長(zhǎng)度257 bp，該引物既可單獨(dú)用于ASFV核酸檢測(cè)，也可與豬瘟病毒引物混合用于鑒別診斷。

熒光定量PCR根據(jù)ASFV分離株BA71V之P72基因第2041～2290位核苷酸序列設(shè)計(jì)引物和探針，擴(kuò)增長(zhǎng)度250 bp，該方法比普通PCR敏感性更高。

5.2 疫苗與展望

迄今，所有疫苗的嘗試均沒有成功。這是由病原多變、主要侵害免疫屏障、容易逃避免疫系統(tǒng)、不能誘生有效中和抗體、涉及復(fù)雜的細(xì)胞免疫以及動(dòng)物宿主本身的遺傳特性等多種因素決定的。

早期疫苗的研究主要集中在滅活疫苗和弱毒疫苗。大量研究表明，滅活疫苗雖然能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體，但幾乎沒有保護(hù)作用。弱毒疫苗雖然對(duì)同源強(qiáng)毒有一定保護(hù)效果，但由于ASFV的高度變異性，其安全性很差，時(shí)常引發(fā)疾病，導(dǎo)致病原嚴(yán)重?cái)U(kuò)散。西班牙和葡萄牙在ASF傳入的早期曾嘗試使用弱毒疫苗，但最終均以失敗而告終，弱毒疫苗的使用導(dǎo)致了疫病大面積、長(zhǎng)時(shí)間流行，嚴(yán)重影響了疫病控制和消滅的進(jìn)程。

近20年來，運(yùn)用分子生物學(xué)和免疫學(xué)技術(shù)對(duì)ASF的疫苗和免疫問題也進(jìn)行了諸多探索性研究。ASFV在吸附和進(jìn)入細(xì)胞過程中，有P30、P54、P72等多種病毒蛋白參與，因此ASF亞單位疫苗和重組疫苗的研究大多傾向選取這些基因，但用桿狀病毒等表達(dá)系統(tǒng)研制的亞單位疫苗，僅能延緩臨床癥狀出現(xiàn)的時(shí)間并在一定程度上降低病毒血癥水平，卻并不能產(chǎn)生足夠的保護(hù)。

雖然如此，基于弱毒株或重組病毒等所進(jìn)行的基礎(chǔ)研究，對(duì)未來ASF疫苗的研究策略仍具有一定的啟發(fā)意義。研究發(fā)現(xiàn)，ASFV弱毒株感染機(jī)體所產(chǎn)生的特異性CD8+CTL，能識(shí)別巨噬細(xì)胞被ASFV強(qiáng)毒感染后所形成的SLA I類分子-抗原復(fù)合物，引發(fā)這些巨噬細(xì)胞的凋亡；研究還發(fā)現(xiàn)，弱毒株的保護(hù)作用還與機(jī)體產(chǎn)生的NK細(xì)胞活性水平成正相關(guān)，也與巨噬細(xì)胞感染病毒后所釋放的細(xì)胞因子有關(guān)。這些證據(jù)表明，弱毒疫苗的保護(hù)作用可能主要由細(xì)胞免疫來完成。因此，未來ASF疫苗的研究，應(yīng)致力于研制能有效刺激保護(hù)性細(xì)胞免疫的安全疫苗，如重組偽狂犬病毒疫苗、毒力基因缺失疫苗、具備刺激細(xì)胞免疫能力的多肽疫苗等。由于ASFV是一種能發(fā)生高度變異的大病毒，存在著許多逃避宿主免疫系統(tǒng)的復(fù)雜機(jī)制，加上病毒感染、致病和免疫過程牽扯到許多成分和表位，近期在疫苗研究上取得突破仍很困難，只有通過基礎(chǔ)研究的不斷深入以及對(duì)病毒特性的不斷了解，才有可能找到新的思路。

[1]王君瑋，王志亮.非洲豬瘟[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2010.

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