陜西省婦幼保健院(西安 710003) 李愛武 蔣 霞 李 芳 郭 萍

乙型病毒性肝炎是我國的高發(fā)病,掌握乙肝病毒在體內(nèi)的復(fù)制情況對(duì)準(zhǔn)確判斷病情以及對(duì)抗病毒治療的準(zhǔn)確監(jiān)測具有重要的意義。目前,絕大多數(shù)醫(yī)療機(jī)構(gòu)不具備檢測 HBV-DNA的條件,只能根據(jù)乙肝標(biāo)志物檢測結(jié)果粗略判斷有無乙肝病毒復(fù)制。為探討HBV-DNA、前 S1抗原(PreS1)與其它 HBV標(biāo)志物的相關(guān)性,正確評(píng)價(jià)其臨床意義,作者采用熒光定量PCR技術(shù)、ELISA法分別對(duì) 200份 HBsAg陽性血清標(biāo)本及 40份 HBsAg陰性血清標(biāo)本進(jìn)行了 HBVDNA、PreS1和 HBV標(biāo)志物的檢測,以探討其相關(guān)性。

對(duì)象與方法

1 對(duì) 象 200例 HBV感染者標(biāo)本均來自本院感染科 2005年8月至2007年9月住院患者,均符合2000年第十次全國病毒性肝炎會(huì)議制定病毒性肝炎乙型診斷標(biāo)準(zhǔn),其中男128例、女 72例,年齡 20～59歲,平均年齡 39.8歲。其中急性乙型肝炎患者血清 25份(抗 HBc-IgM陽性),慢性乙型肝炎患者血清 145份,肝硬化患者血清 30份。對(duì)照組選其它類型肝炎 40例作前 S1抗原檢測。

2 方 法 ①HBV PreS1檢測:HBV PreS1試劑由中國科學(xué)院上海生物化學(xué)研究所研制,上海阿爾法生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA),按試劑說明書操作。②HBVDNA定量:檢測所用儀器系德國 Roche公司生產(chǎn)的Light Cycler自動(dòng)熒光 PCR儀,HBV-DNA FQ-PCR試劑盒由深圳匹基生物工程公司提供,嚴(yán)格按試劑說明書操作。③HBV血清標(biāo)志物檢測試劑由華美生物工程公司生產(chǎn),采用 ELISA方法按試劑說明書操作。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用 SPSS10.0進(jìn)行χ2檢驗(yàn),P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 HBV-DNA熒光定量及 PreS1抗原檢測結(jié)果見表1。檢測發(fā)現(xiàn),在能夠檢測到 HBV-DNA的 158份血清樣本中(病毒載量大于 103拷貝 /ml)PreS1抗原的陽性率達(dá)到 81.6%(129/158)。并且隨著血漿中HBV-DNA含量水平的增加,PreS1抗原陽性檢出率也隨之增加,兩者間存在顯著相關(guān)性(P＜0.001)。

表1 200份標(biāo)本 HBV-DNA含量與 PreS1檢測結(jié)果比較

2 不同 HBV血清標(biāo)志物組合 HBV-DNA熒光定量及 PreS1抗原檢測結(jié)果 見表2。檢測結(jié)果顯示HBeAg陽性的 91份標(biāo)本中,HBV-DNA熒光定量陽性 88份,陽性率 96.7%;PreS1抗原陽性 81份,陽性率 89%。HBeAg陰性 109份,HBV-DNA熒光定量陽性 70份,陽性率 64.2%;PreS1抗原陽性 53例,陽性率 48.6%。HBeAg陰性、抗 HBe陽性血清 82份中,PreS1抗原陽性率 54.8%(45/82);PreS1抗原存在于HBeAg、抗 HBe雙陰性血清(27)中 8份,陽性率 29.6% (8/27)。

表2 不同 HBV血清標(biāo)志物組合HBV-DNA、PreS1的檢測結(jié)果

3 急、慢性乙肝和肝硬化患者 HBV-DNA、PreS1檢測結(jié)果 見表3。檢測結(jié)果顯示,急性肝炎中 HBVDNA及 PreS1的陽性檢出率分別為 96%和 92%。在輕度慢性乙肝中,HBV-DNA及 PreS1的陽性檢出率分別為 83.3%和 70%。在此兩類肝炎標(biāo)本中 HBVDNA與 PreS1的陽性檢出率沒有顯著性差異(P＞0.05)。而在中重度慢性乙肝及肝炎肝硬化標(biāo)本中 HBVDNA的陽性檢出率明顯高于 PreS1(P＜0.01)。

表3 急、慢性乙肝和肝硬化患者HBV-DNA、 PreS1關(guān)系

討 論

前 S1抗原(PreS1)是由乙肝病毒前 S1編碼,由108或 119個(gè)氨基酸組成的肽段。其位于 HBVDane顆粒和管型顆粒上,具有高度的免疫原性。由于 PreS1抗原只存在于完整的 HBV顆粒上,所以具有很高的特異性。眾多研究認(rèn)為 PreS1、PreS2及多聚人血清白蛋白受體(PHSA-R)在乙肝病毒侵入肝細(xì)胞過程中起重要作用,其在 HBV復(fù)制時(shí)表達(dá)最多,可作為 HBV復(fù)制的標(biāo)志[1,2]。

通過對(duì) 200份乙肝患者血清樣本的檢測可以看出在 158份 HBV-DNA定量陽性的標(biāo)本中 PreS1抗原陽性率高達(dá) 81.6%,且隨著病毒含量水平的增加PreS1抗原陽性率也隨之升高。因此 PreS1抗原很好的反映了 HBV在體內(nèi)的復(fù)制狀況。但應(yīng)該注意的是在 HBV-DNA陰性的標(biāo)本中仍有 11.9% PreS1抗原陽性。這可能是由于抗病毒藥物所致的 HBV-DNA復(fù)制抑制或引物對(duì)應(yīng)的 DNA序列變異等原因所致[3]。

在對(duì)不同 HBV血清標(biāo)志物組合分組進(jìn)行 HBVDNA熒光定量及 PreS1抗原對(duì)比發(fā)現(xiàn),在 HBeAg陰性的標(biāo)本中仍有 48.6%PreS1抗原陽性,更有 64.2%HBV-DN A熒光定量陽性?？赡苁怯捎?HBV基因組前 C區(qū)發(fā)生變異導(dǎo)致 HBeAg表達(dá)障礙。此時(shí) HBeAg陰性并不表明 HBV復(fù)制停止或病毒血癥消失。因此PreS1抗原可作為一種重要的病毒復(fù)制的補(bǔ)充指標(biāo)。

在對(duì)不同感染階段樣本分組比較發(fā)現(xiàn),PreS1抗原在急性乙肝檢出率高達(dá) 92%,而且在急性乙肝及輕度慢性乙肝樣本中 HBV-DNA熒光定量及 PreS1抗原陽性率間沒有顯著差異,而在中重度慢性乙肝兩者陽性率存在顯著差異。同時(shí)急性及中重度慢性乙肝HBV-DNA熒光定量及 PreS1抗原的陽性率高于輕度慢乙肝。提示一方面在急性感染及中重度慢乙肝階段病毒復(fù)制水平較高,HBV-DNA熒光定量及 PreS1抗原具有良好相關(guān)性。另一方面隨著疾病的進(jìn)展 PreS1抗原的檢出率較 HBV-DNA有所下降。尤其在進(jìn)入肝炎肝硬化階段 HBV-DNA熒光定量和 PreS1抗原都有顯著下降,以 PreS1抗原檢出率的下降尤甚。其原因可能是隨著疾病進(jìn)展,HBV-DNA與肝細(xì)胞的基因組發(fā)生整合。隨著感染病程延長和病情加重,整合率會(huì)增加,從而導(dǎo)致血清 HBV含量減低,檢出率下降[4]

綜上所述,傳統(tǒng)上根據(jù) HBeAg是否陽性來判斷HBV的復(fù)制情況是非常不嚴(yán)謹(jǐn)?shù)摹６紤?yīng)進(jìn)行血清HBV-DN A定量測定。如果條件有限可以開展 PreS1抗原的檢測作為參考和補(bǔ)充指標(biāo)。這樣能夠更真實(shí)的反映 HBV感染及復(fù)制情況。PreS1抗原在早期診斷乙肝、判斷預(yù)后及確定治療方案等方面具有重要臨床價(jià)值。

[1] 徐 蓓,姚光弼.血清乙型肝炎病毒前 S1抗原檢測及其與病毒復(fù)制的關(guān)系 [J].中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志,1997,11(2):117-120.

[2] 馬亦林,翁心華.傳染病學(xué) [M].第 4版.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2006:296-301.

[3] 王清圖.乙型肝炎病毒變異的臨床意義 [J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志,2001,10(3):197.

[4] 蔡衛(wèi)平,唐小平,陳勁峰,等.慢性乙肝 HBV-DNA病后標(biāo)志和肝損傷程度的關(guān)系[J].中國實(shí)用內(nèi)科雜志,1998,3(18):147-148.