高峰 張晶瑩 宋昕恬 吳曉剛

作者單位：130062 吉林省衛(wèi)生監(jiān)測檢驗中心

老年性癡呆（AD）病因及發(fā)病機(jī)制迄今尚不清楚，更沒有研究出根治AD病的藥物，目前在臨床上已經(jīng)使用的治療藥物副作用大，療效均不能令人滿意［1］。姜黃素（curcumin）是從姜科姜黃屬植物姜黃根莖中提取的一種酚性色素，由于其色澤穩(wěn)定且毒性很低，目前已廣泛應(yīng)用于食品添加劑和染料中。已有研究發(fā)現(xiàn)姜黃素可降低氧化應(yīng)激、抑制細(xì)胞凋亡、抑制NMDA受體介導(dǎo)的［Ca²⁺］內(nèi)流，進(jìn)而減輕興奮性中毒的損傷從而起到細(xì)胞保護(hù)作用^［2,3］，我們通過觀察姜黃素對癡呆小鼠腦組織中MDA含量、SOD活性的影響，初步探討姜黃素對D-半乳糖所致小鼠腦組織的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與試劑 清潔級健康雄性ICR小鼠，體重18 g～22 g，購自吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動物實驗中心，動物許可證號SCXK-（吉）-2007-0003，自由吃食和飲水，室溫（20±2）℃。D-半乳糖購自上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司（產(chǎn)品批號：070313）；羧甲基纖維素鈉購自Sigma公司；姜黃素購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司（產(chǎn)品批號：F20050802）； MDA、SOD及考馬斯亮藍(lán)蛋白測試試劑盒均購自南京建成生物工程有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備 722分光光度計為上海奧普勒儀器有限公司產(chǎn)品；離心機(jī)為北京醫(yī)用離心機(jī)廠產(chǎn)品；組織勻漿機(jī)為江蘇金壇金城國勝實驗儀器廠產(chǎn)品；分析天平為北京塞多利斯天平公司產(chǎn)品。

1.3 分組與給藥 將50只小鼠按體重隨機(jī)分為5組，即正常對照組、模型組、預(yù)處理組、同時處理組、后處理組，每組10只。對照組：上午頸部皮下注射等量生理鹽水，下午給予1%羧甲基纖維素鈉溶液灌胃1次；模型組：上午頸部皮下注射120 mg/kg D-半乳糖，下午給予1%羧甲基纖維素鈉溶液灌胃1次；預(yù)處理組：上午姜黃素用1%羧甲基纖維素鈉配成混懸液，按200 mg/（kg·d）灌胃給藥，下午頸部皮下注射120 mg/kg D-半乳糖；同時處理組：上午頸部皮下注射120 mg/kg D-半乳糖，同時姜黃素用1%羧甲基纖維素鈉配成混懸液，按200 mg/（kg·d）灌胃給藥；后處理組：上午頸部皮下注射120 mg/kg D-半乳糖，下午姜黃素用1%羧甲基纖維素鈉配成混懸液，按200 mg/（kg·d）灌胃給藥；連續(xù)45 d。

1.4 腦組織中MDA含量、SOD活性檢測 處死小鼠，立即取全腦，用冰冷的生理鹽水漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱取組織重量，加9倍量的勻漿液，用勻漿器勻漿（操作要在冰水浴中進(jìn)行），制成10%勻漿液，3500 r/min離心10 min，取上清液，用考馬斯亮藍(lán)顯色法測定腦組織蛋白含量。MDA含量測定：MDA可與硫代巴比妥酸（TBA）縮合，形成紅色產(chǎn)物，在532 nm處有最大吸收峰，測吸光度值。SOD測定：通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基（0），后者氧化胺形成亞硝酸鹽，在顯色劑的作用下呈現(xiàn)紫紅色，用可見分光光度計測其吸光度。

1.5 統(tǒng)計分析 數(shù)據(jù)采用SPSS11.5 統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析。方差齊性檢驗部分，組間比較采用最小顯著差異法檢驗（LSD法）。不齊時，各組間兩兩比較采用Tamhanes 方法。

2 結(jié)果

2.1 姜黃素對癡呆模型小鼠的大腦MDA水平和SOD活性的影響 模型組小鼠大腦MD水平與對照組比較顯著增高（P＜0.05），SOD活性與對照組比較有明顯降低（P＜0.05）。預(yù)處理組和同時處理組與模型組比較，腦組織中MDA水平明顯增高（P＜0.05），且前者優(yōu)于后者；給予姜黃素的各處理組腦組織中SOD活性明顯升高與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 姜黃素對AD模型小鼠腦組織MDA水平、

SOD活性的影響（x±s，n10）

注：與模型組比較，^＊P＜0.05；與后處理組比較，^△P＜0.05

3 討論

到目前為止，老年性癡呆（Alzheimers diaease，AD）病因及發(fā)病機(jī)制尚不清楚，眾多研究者從不同角度提出了各種發(fā)病假說、膽堿功能低下假說、炎癥或免疫假說、基因突變假說、淀粉樣蛋白假說、氧化應(yīng)激假說、凋亡假說等。AD是以近期記憶障礙為主要臨床表現(xiàn)，以老年斑、神經(jīng)元纖維纏結(jié)為主要病理改變的進(jìn)行性神經(jīng)衰退性疾病。Yankner等人［4］研究證明Aβ具有沉積和神經(jīng)毒性作用，引起腦神經(jīng)細(xì)胞退化和凋亡，并伴有學(xué)習(xí)認(rèn)知障礙和記憶減退，是AD各種病理和臨床表現(xiàn)的始發(fā)因素。D-半乳糖對學(xué)習(xí)記憶能力的影響在于其代謝產(chǎn)物半乳糖醇在體內(nèi)不能被進(jìn)一步代謝而堆積在細(xì)胞內(nèi)，影響滲透壓，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹、代謝紊亂、體內(nèi)活性氧水平升高，細(xì)胞膜脂質(zhì)受損，出現(xiàn)腦神經(jīng)元退行性變化，包括神經(jīng)元數(shù)目減少，腦組織脂質(zhì)過氧化增加，產(chǎn)生過量的MDA，使腦中的MDA水平增加，細(xì)胞的合成能力降低，使SOD活性顯著下降。而表現(xiàn)學(xué)習(xí)記憶能力的下降。本次實驗中AD模型小鼠腦組織中SOD活性降低、MDA含量增加，說明其腦組織內(nèi)發(fā)生了過氧化反應(yīng)，與文獻(xiàn)結(jié)果相符^［5,6］。

姜黃素是從植物姜黃中提取的一種植物多酚，安全性很高，具有抗炎、抗腫瘤、抗氧化、抗輻射等多種藥理作用 其中抗脂質(zhì)過氧化、抗自由基損傷作用已得到證實［7］。姜黃索可抑制自由基生成并加強(qiáng)其清除，抑制缺血再灌注大鼠腦組織MDA和亞硝酸鹽含鏈的升高，同時姜黃素還可影響與氧化、抗氧化有關(guān)的酶類而發(fā)揮強(qiáng)大的抗氧化保護(hù)作用，保護(hù)生物大分子免遭自由基的毒性作用，從而保護(hù)機(jī)體組織器官［8］。研究表明，姜黃素能改善雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎所致的學(xué)習(xí)記憶減退，減少自由基的產(chǎn)生以及減少神經(jīng)細(xì)胞死亡［9］。本實驗結(jié)果顯示，不同給藥方式的姜黃素對D-半乳糖所致的學(xué)習(xí)記憶障礙有所改善作用，其作用機(jī)制可能是：可使腦組織脂褐質(zhì)含量下降，使SOD活性增高，有效清除了過量的自由基，使腦組織免受傷害，從而提高學(xué)習(xí)記憶能力。同時，姜黃素除了抗氧化這一作用外，還有其他很多藥理活性，包括酶、炎性介質(zhì)、調(diào)節(jié)因子等，還可能涉及其他機(jī)制，尚需進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

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［9］ 張書剛，胡梅，周其，等.姜黃素對血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響.南京醫(yī)科大學(xué),2006,26（4）：246-248.