房俊艷 賈云飛 宋永海 凌均棨

根管封閉劑應具有良好的理化性能、生物相容性、封閉性[1]，理想的根管封閉效果是封閉劑同時粘結核心充填材料和牙本質，形成緊密的一體化結構[2]，封閉口腔和根尖周通道，防止感染的再次發(fā)生，促進根尖周組織愈合。臨床常用的根管封閉劑在固化過程中存在聚合收縮、溶解等使封閉劑內部、封閉劑/牙本質、封閉劑/核心材料形成間隙，引發(fā)微滲漏[3]，導致根管治療失敗，因此封閉劑的封閉性是決定根管治療成敗的重要因素。檢測根管封閉性的方法有染料滲漏實驗、葡萄糖滲漏實驗、細菌滲漏實驗、流體滲漏實驗、電化學滲漏實驗、熒光滲漏實驗等。本文就封閉劑的封閉性檢測方法進行綜述。

1 染料滲漏實驗

染料滲漏是評價根管封閉劑封閉性最常用的方法之一，通過測量根管內的線性染料滲漏長度確定根尖封閉性，常用的染料是亞甲基藍。染料滲漏實驗操作簡單，封閉除根尖孔1mm的牙根表面，將根尖浸入染料中，一定時間后沿頰舌徑縱向剖開牙根，測量根尖至冠方的染料滲入長度，即為滲漏量[4]。亦有學者采用透明標本技術[5]，將樣本經酸脫礦、乙醇脫水、水楊酸甲酯透明后，無需破壞樣本，三維觀察充填材料的染料滲入情況。

染料滲漏實驗的影響因素是沿根充材料的孔隙情況，材料中陷入的空氣影響染料的滲入，結果存在偏差。染料滲漏實驗主要適用于封閉性能相對較好、與染料不發(fā)生反應的材料的封閉性檢測。

2 流體滲漏實驗

流體滲漏是將樣本的冠方和根方分別與毛細管相連，通過一側毛細管加壓觀察標準毛細管中氣泡移動的刻度來計算液體滲漏量。此實驗方法簡單、可重復、使用方便，不破壞標本，結果定量化，臨床相關性較好[3-6]。但如果材料微滲漏量較大，氣泡超出標準毛細管則無法測量滲漏量[7]。實驗過程中應注意控制壓力的大小，待毛細管中的氣泡穩(wěn)定后進行測試，并掌握時間，防止無效測量的發(fā)生。Taschieri等[8]用流體滲漏和染料滲漏對根尖切除倒充填的牙根進行根尖封閉性檢測，后者檢測到滲漏，而前者未檢測到滲漏，分析原因為液體流動實驗只能檢測到連續(xù)性（through and through）孔隙，如果根管充填材料內的孔隙不連續(xù)，流體滲漏模型毛細管中的遠端氣泡無法移動，未顯示刻度差值，結果偏差大。

流動滲漏實驗主要用于對“through and through”孔隙的評價，如果材料中的孔隙是不連續(xù)的盲端空隙，則無法檢測到微滲漏[8]。

3 細菌滲漏實驗

細菌滲漏是將細菌與培養(yǎng)基的混合液作為滲漏液由牙根冠方向根方滲漏，根方為細菌培養(yǎng)基，通過觀察根方培養(yǎng)基的渾濁程度，定量計算滲漏量[9]。此種方法菌種的選擇范圍較大：有學者選用單一細菌[10]；亦有選擇多種菌的混合物，目的是獲得更接近于口腔的微環(huán)境[11]。其中唾液是口腔環(huán)境中導致微滲漏的主要因素，是細菌微滲漏模型中待滲漏液的最佳選擇對象。

細菌是有生命的生物，細菌滲漏過程中存在共生或抑制而出現數量或比例上的改變，整個過程保持動態(tài)平衡[11]，臨床相關性和生物相關性較好。細菌滲漏受菌種分子大小及根管消毒技術的影響，細菌分子量大則滲漏速度慢，消毒效果較好者則細菌存活量低，微滲漏小[12]。Wu等[3]研究顯示細菌滲漏與孔隙的直徑有較高的相關性，檢驗結果較染料滲漏精確。

4 電化學滲漏實驗

電化學滲漏由Jacobson 和Fraunhofer于1976發(fā)明，可定量研究根尖微滲漏[13]。原理是滲入根管內的電解液，與電極接觸形成電流，電流通過電解液（氯化鈉或氯化鉀）的時間和強度反應材料微滲漏大小[14]。實驗樣本除根尖孔外表面皆涂隔離物，將一側電極插入根管內接觸充填材料，另一電極浸入電解液，在兩電極距離一定的情況下，電流大代表根充物孔隙大或充填材料被電解的多，電流強度與滲漏量成比例。

電化學滲漏實驗可在持續(xù)的時間內觀察滲漏情況，結果定量化[15]。因電解作用可導致根管封閉劑的某些成分電解成導電離子，產生孔隙造成更大的滲漏，所以此方法用于不易被電解、其它微滲漏方法檢測效果不佳的材料的封閉性檢驗。

5 葡萄糖滲漏實驗

葡萄糖滲漏是一種新的檢測微滲漏的方法，其原理是一定濃度的葡萄糖經特定裝置由牙根冠方滲入根管充填材料內部，一定時間后由樣本根方滲出，通過葡萄糖氧化酶比色法測定根方葡萄糖濃度計算滲漏量。常用的模型示蹤物為1mol/L的葡萄糖溶液（pH=7.0）。葡萄糖分子量?。?80Da），具有親水性和化學穩(wěn)定性，可定量、連續(xù)性檢測微滲漏，方法靈敏、準確。

葡萄糖微滲漏的缺點在于葡萄糖溶液的水分蒸發(fā)，導致濃度升高，Xu[16]等建議在蒸發(fā)的豎直管中加入去離子水以補充蒸發(fā)量，但可產生濃度梯度，亦存在偏差。Shemesh[6]等建議將此系統(tǒng)置于密閉裝置中，以減少水分的蒸發(fā)，增加結果精確性。葡萄糖微滲漏實驗靈敏度較高適用于大多數根管充填材料的微滲漏檢測，此模型檢測的最大滲漏量是21mmol/L[6]，如果檢測的樣本滲漏值超過此極限則無法檢測微滲漏。

6 熒光滲漏實驗

熒光滲漏實驗采用熒光染料或熒光染料標記物，如熒光素魯米那（luminol）或若丹明（rhodamine）標記的脂多糖，由冠方向根方滲漏，一定時間后用激光共聚焦掃描電鏡（confocal laser scanning microscopy，CLSM）觀察熒光素滲入根管充填材料的部位及深度，通過熒光強度計算材料的滲漏情況[17]。檢測滲漏液的熒光強度和根管內熒光劑的分布，即可獲得滲漏大小和根管內滲漏的區(qū)域和路徑。

熒光素敏感性高，誤差小，定量分析滲漏大小，不受溫度和充填技術的影響。

7 放射性同位素滲漏實驗

放射性同位素微滲漏是用放射性同位素（125I）標記小分子物質（如溶菌酶）后進行滲漏實驗，結果定量化。Hakel等[18]利用放射性同位素微滲漏實驗檢測封閉劑的滲漏情況：樣本冠方包埋后將根尖2mm置于125I標記的溶菌酶溶液，一定時間后取出并處理樣本至無放射性，將樣本切片后通過γ計數器檢測每薄片的放射活性，可定量檢測根尖封閉性。

放射性同位素滲漏實驗不受操作者主觀因素影響，容易分析和比較，且放射性同位素125I不與牙本質發(fā)生離子交換，但應避免使用與羥基磷灰石發(fā)生離子交換的放射性同位素。因放射性同位素有放射性損害，因此較少使用。

8 總結

評價微滲漏的方法較多，但各檢測方法缺少相關性，主要為各方法的實驗原理及評價標準不同，實驗結果與所選用的實驗方法密切相關[9-19]，因此應根據材料的理化性能選擇合適的檢測方法，并根據實際情況進行適時改進，以得到更有意義的實驗結果。

[1]Huang FM,Tai KW,Chou MY,et al.Cytotoxicity of resinzinc oxide-eugenol-,and calcium hydroxide-based root canal sealers on human periodontal ligament cells and permanent V79 cells[J].Int Endod J，2002,35（2）：153-158.

[2]Paqué F,Sirtes G.Apical sealing ability of Resilon/Epiphany versus gutta-percha/AH Plus：immediate and 16-months leakage[J].Int Endod J,2007,40（9）：722-729.

[3]Wu MK，van der Sluis LW,Ardila CN,et al.Fluid movement along the coronal two-thirds of root fillings placed by three different guttapercha techniques[J].Int Endod J,2003,36（8）：533-540.

[4]Sevimay S,Kalayci A.Evaluation of apical sealing ability and adaptation to dentine of two resin-based sealers[J].J Oral Rehabil，2005,32（2）：105-110.

[5]Venturi M,Prati C,Capelli G,et al.A preliminary analysis of the morphology of lateral canals after root canal filling using a tooth-clearing technique[J].Int Endod J,2003,36（1）：54-63.

[6]Shemesh H,Wu MK,Wesselink PR.Leakage along apical root fillings with and without smear layer using two different leakage models：a twomonth longitudinal ex vivo study[J].Int Endod J,2006,39（12）：968-976.

[7]Pommel L,Camps J.Effects of pressure and measurement time on the fluid filtration method in endodontics[J].Endod J,2001,27（4）：256-258.

[8]Taschieri S,Del Fabbro M，Francetti L,et al.Effect of root-end resection and root-end filling on apical leakage in the presence of corecarrier root canal obturation[J].Int Endod J,2004,37（7）：477-482.

[9]De-Deus G,Petruccelli V,Gurgel-Filho E,et al.MTA versus Portland cement as repair material for furcal perforations：a laboratory study using a polymicrobial leakage model[J].Int Endod J,2006,39（4）：293-298.

[10]Barthel CR,Moshonov J,Shuping G,et al.Bacterial leakage versus dye leakage in obturated root canals[J].Int Endod J,1999,32（5）：370-375.

[11]Clark-Holke D,Drake D,Walton R,et al.Bacterial penetration through canals of endodontically treated teeth in the presence or absence of the smear layer[J].J Dent,2003,31（4）：275-281.

[12]Gilbert SD，Witherspoon DE,Berry CW.Coronal leakage following three obturation techniques[J].Int Endod J,2001,34（4）：293-299.

[13]Jacobson SM,von Fraunhofer JA.The investigation of microleakage in root canal therapy.An electrochemical technique[J].Oral Surg Oral Med Oral Pathol,1976,42（6）：817-823.

[14]Inan U,Aydemir H,Ta demir T.Leakage evaluation of three different root canal obturation techniques using electrochemical evaluation and dye penetration evaluation methods[J].Aust Endod J,2007,33（1）：18-22.

[15]Delivanis PD,Chapman KA.Comparison and reliability of techniques for measuring leakage and marginal penetration[J].Oral Surg Oral Med Oral Pathol,1982,53（4）：410-416.

[16]Xu Q，Fan MW,Fan B,et al.A new quantitative method using glucose for analysis of endodontic leakage[J].Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod,2005,99（1）：107-111.

[17]Bouillaguet S,Wataha JC,Lockwood PE,et al.Cytotoxicity and sealing properties of four classes of endodontic sealers evaluated by succinic dehydrogenase activity and confocal laser scanning microscopy[J].Eur J Oral Sci,2004,112（2）：182-187.

[18]Hakel Y,Wittenmeyer W,Bateman G,et al.A new method for the quantitative analysis of endodontic microleakage[J].J Endod,1999,25（3）：172-177.

[19]Karagen B,Gen oglu N,Ersoy M,et al.A comparison of four different microleakage tests for assessment of leakage of root canal fillings[J].Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod，2006,102（1）：110-113.