周建月 田曉豐 鞠海英 (廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院輸血科,廣西 南寧 5300)

Duffy血型在人類學(xué)研究中是一個(gè)有用的工具。1950年在多次輸血的血友病患者血清中發(fā)現(xiàn)的抗 Fya和 1951年在一名產(chǎn)婦血清中發(fā)現(xiàn)的抗 Fyb是 Duffy血型系統(tǒng)中最常見的兩個(gè)抗體〔1〕。 Duffy血型系統(tǒng)有 6個(gè)抗原,即 Fya(FY1)、Fyb(FY2)、Fy3(FY3)、Fy4(FY4)、Fy5(FY5)、Fy6(FY6)。 Duffy血型的基因位于染色體 1q22-23,由于 44號(hào)氨基酸的改變出現(xiàn) FY 1和FY 2這兩種基因型〔2〕。近些年分子生物學(xué)技術(shù)在血型研究領(lǐng)域的應(yīng)用越來越多,本文采用PCR-SSP方法對(duì)廣西地區(qū)健康獻(xiàn)血者進(jìn)行 Duffy血型的基因分型研究。

1 材料與方法

1.1 樣本 隨機(jī)抽取 89名漢族健康獻(xiàn)血者應(yīng)用 EDTA抗凝的全血 200μl。采用快速鹽析法提取 DNA〔3〕,注射用水 20μl溶解待用。

1.2 引物設(shè)計(jì) 根據(jù) FY1和FY2基因背景的不同設(shè)計(jì)引物。FY 1:5′-AATGATCTTCTCCCGAATGGAG-3′,FY 2:5′-AATGATCTTCTCCCGAATGGAG-3′, 反 向:5′-CACTGGCCCCACACCTAGGTT-3′,PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度 218 bp。內(nèi)對(duì)照為人類生長(zhǎng)激素(hGH)基因特異性引物,hGH-A鏈引物序列:5′-TGCCTT CCCAACCATTCCCTTA-3′,B 鏈 引 物 序 列:5′-CCACTCACGGATTTCTGTTGTGTTTG-3′,擴(kuò)增產(chǎn)物為 434bp。

1.3 Duffy血型基因分型檢測(cè) PCR反應(yīng)體系為 10μl,包括PCR引物混合物(序列特異性引物 0.4μmol/L,內(nèi)對(duì)照引物0.4μmol/L)、10×PCR Buffer 1μl,d NTP 0.2 mmol/L,Taq酶0.1U和 DNA 0.4μg。 反應(yīng)條件:94℃ 3 min;94℃ 30 s,60℃30 s,72℃ 30 s,30個(gè)循環(huán);72℃ 5 min;4℃保存。樣本擴(kuò)增結(jié)束后 PCR產(chǎn)物在 2%瓊脂糖凝膠電泳 30 min,記錄凝膠成像結(jié)果并分析。

2 結(jié) 果

帶有Fya基因的個(gè)體在FY 1特異性引物擴(kuò)增后出現(xiàn)218bp的特異性條帶,帶有Fyb基因的個(gè)體在FY 2特異性引物擴(kuò)增后出現(xiàn) 218 bp的特異性條帶。僅有 Fya基因條帶,沒有Fyb基因條帶的判定為 Fy(a+b-);沒有 Fya基因條帶,僅有Fyb基因條帶的判定為 Fy(a-b+);既有 Fya基因條帶,又有 Fyb基因條帶的判定為 Fy(a+b+)。Duffy血型基因分型檢測(cè)結(jié)果見圖 1。本研究 89份健康獻(xiàn)血者樣本檢測(cè)結(jié)果:Fy(a+b-)78人(87.64%),Fy(a-b+)3人(3.38%),Fy(a+b+)6人(6.74%),Fy(a-b-)2人(2.24%)。Duffy血型中 Fya的基因頻率是 0.931,Fyb的基因頻率是 0.069(此試驗(yàn)只針對(duì) Fya、Fyb基因設(shè)計(jì),故 Fy(a-b-)2例不統(tǒng)計(jì)在內(nèi))。

圖1 Duffy血型基因分型檢測(cè)結(jié)果

3 討 論

Duffy血型在不同種族中的分布差異較大〔4,5〕。目前Duffy血型系統(tǒng) 6個(gè)抗原中抗-Fya和抗-Fyb都能引起溶血性反應(yīng),嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡〔6〕。絕大多數(shù)的中國(guó)人都帶有 Fya抗原,但產(chǎn)生抗-Fyb的可能性不容忽視,因?yàn)槠淇乖缓系母怕蚀嬖?。采用分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)Duffy血型直接從基因水平檢測(cè),Fy(a+b-)、Fy(a+b+)、Fy(a-b+)、Fy(a-b-)試驗(yàn)結(jié)果明確,試劑成本低。并且標(biāo)本不受新鮮或陳舊樣品限制,抽提 DNA后可長(zhǎng)期保存、復(fù)查。因此結(jié)果易于判定,也便于各實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制及互相比較。

1 趙桐茂.人類血型遺傳學(xué)〔M〕.北京:科學(xué)出版杜;1987:113-5

2 趙桐茂,張工梁.中國(guó)Duffy血型分布〔J〕.中華血液學(xué)雜志,1982;3(1):32.

3 Birley AJ,Maclennan R,Wahlqvist M,et al.MN blood group affects response of serum LDL cholesterol level to a low fat diet〔J〕.Clin Genet,1997;51(5):291.

4 Sellami MH,Kaabi H.Duffy blood group system genotyping in an urban Tunisian population〔J〕.Ann Hum Biol,2008;35(4):411-5.

5 Sousa TN,Tarazona-Santos EM.Genetic variability and natural selection at the ligand domain of the Duffy bindingprotein in Brazilian Plasmodium vivax populations〔J〕.Malar J,2010;9:334.

6 Grodecka M,Czerwiński M.Analysis of recombinant Duffy protein-linked N-glycans using lectins and glycosidases〔J〕.Acta Biochim Pol,2010;57(1):49-53.