曲蘊慧,龐 霞,趙 樂,李晟磊,陳奎生,賀付成

1)鄭州大學第一附屬醫(yī)院檢驗科鄭州 450052 2)鄭州大學第一附屬醫(yī)院病理科鄭州 450052 3)河南省腫瘤病理重點實驗室鄭州 450052

△女,1980年5月生,碩士,主管技師,研究方向:腫瘤病理,E-mail:zdqyh09@126.com

磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)是具有甘油磷脂分解活性的酶類家族,廣泛存在于細菌、植物及哺乳動物的多種組織、細胞和分泌物中,主要位于動物細胞膜和線粒體膜上[1]。既往研究[2]表明, PLA2可合成具有不同生物活性的物質(zhì),并在磷脂的代謝和更換中發(fā)揮關(guān)鍵作用;PLA 2及其代謝產(chǎn)物除具有炎性介質(zhì)作用外,還參與調(diào)節(jié)細胞的生長增殖,與惡性腫瘤關(guān)系密切。作者采用免疫組織化學 SP法檢測分泌型磷脂酶A2(sPLA2)-Ⅱa及胞漿型磷脂酶A2(cPLA2)在57例乳腺浸潤性導管癌組織、15例乳腺纖維腺瘤組織及 15例正常乳腺組織中的表達情況,探討sPLA2-Ⅱa及cPLA2在乳腺浸潤性導管癌發(fā)生發(fā)展中的作用,以期尋找乳腺浸潤性導管癌早期診斷和預后判斷的分子指標。

1 材料與方法

1.1 標本來源 57例乳腺浸潤性導管癌及15例乳腺纖維腺瘤均為鄭州大學第一附屬醫(yī)院 2007年 3月至 2009年 2月新鮮手術(shù)切除標本,選取 15例乳腺腺病或乳腺炎手術(shù)切除標本中的正常乳腺組織作對照,所有病例術(shù)前均無化療、放療及免疫治療史,均經(jīng)病理學證實?；颊呔鶠榕?年齡29～87(50.3±11.3)歲。組織學分級Ⅰ級 9例,Ⅱ級 34例,Ⅲ級 14例;臨床分期Ⅰ期21例,Ⅱ期23例,Ⅲ期13例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 36例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例;腫瘤直徑＜2 cm者23例, 2～5 cm者27例,＞5 cm者7例。

1.2 3種乳腺組織中sPLA 2-Ⅱa及cPLA2蛋白的檢測 兔抗人sPLA2-Ⅱa及cPLA2多克隆抗體購自英國Abcam公司,SP免疫組織化學試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。采用免疫組織化學SP法,sPLA2-Ⅱa及cPLA2抗體稀釋倍數(shù)為1∶200及1∶180,DAB顯色,蘇木素復染。染色步驟嚴格按說明書進行,陽性對照用已知陽性染色的胃癌組織切片,陰性對照用 PBS代替一抗孵育組織切片。sPLA2-Ⅱa及cPLA 2陽性信號呈黃色顆粒樣物質(zhì),均位于細胞質(zhì)內(nèi)。高倍鏡下隨機選取 5個視野(每個視野觀察細胞數(shù)不少于 200個),按陽性細胞所占百分比及著色深淺進行結(jié)果判定。結(jié)果取 2項評分之積,總分 ＜3分為陰性,≥3分為陽性[3-4]。

1.3 統(tǒng)計學處理 應用SPSS 13.0進行統(tǒng)計學分析,3種乳腺組織中及不同病理特征乳腺浸潤性導管癌組織中 2種蛋白陽性表達率的比較采用 χ2檢驗,浸潤性導管癌組織中 2種蛋白表達的關(guān)系通過計算Pearson列聯(lián)系數(shù)評價,檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 3種乳腺組織中sPLA 2-Ⅱa和cPLA2蛋白的表達情況 sPLA2-Ⅱa蛋白陽性表達主要位于腫瘤細胞的胞質(zhì)中,呈淺黃色至深黃色顆粒樣物質(zhì);cPLA2蛋白陽性著色定位于細胞質(zhì),呈棕黃色或深黃色顆粒樣物質(zhì)。見圖 1和表 1。

2.2 乳腺浸潤性導管癌組織中sPLA 2-Ⅱa和cPLA 2蛋白表達情況與臨床病理特征的關(guān)系 見表2。sPLA2-Ⅱa和cPLA2蛋白表達與乳腺浸潤性導管癌組織的臨床分期、組織學分級及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)。

2.3 乳腺浸潤性導管癌組織中sPLA 2-Ⅱa與cPLA2蛋白表達的關(guān)系 結(jié)果見表3。

圖1 正常乳腺(A)、乳腺纖維腺瘤(B)及乳腺浸潤性導管癌(C)組織中sPLA 2-Ⅱa和cPLA 2蛋白的表達(SP,×200)1:sPLA 2-Ⅱa蛋白;2:cPLA2蛋白。

表1 3種組織中sPLA 2-Ⅱa及cPLA 2的表達 例(%)

表2 sPLA 2-Ⅱa及cPLA 2蛋白表達與乳腺浸潤性導管癌臨床病理特征的關(guān)系 例(%)

表3 乳腺浸潤性導管癌組織中sPLA 2-Ⅱa及cPLA 2蛋白表達的關(guān)系 例

3 討論

乳癌是最常見的惡性腫瘤之一,近年來其發(fā)病率呈逐年遞增的趨勢,且發(fā)病年齡也漸趨于年輕化。如何從分子水平來尋找乳腺浸潤性導管癌可能的分子治療靶點長期以來備受人們關(guān)注。該研究應用免疫組織化學技術(shù)對比了正常乳腺、乳腺纖維腺瘤及乳腺浸潤性導管癌組織中cPLA2及sPLA2-Ⅱa蛋白的變化規(guī)律及其與乳腺浸潤性導管癌臨床生物學行為的關(guān)系。

PLA2的調(diào)節(jié)根據(jù)其存在部位、氨基酸順序同源性和生化功能特征不同,可分為3種類型:sPLA2、cPLA2和Ca2+非依賴型磷脂酶A2(iPLA2)。sPLA2包括sPLA2-Ⅰ、Ⅱa、Ⅱb、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅸ和Ⅹ等,存在于胞質(zhì)的顆粒中或在細胞受刺激后合成并釋放至細胞外,對磷脂Sn-2位的脂肪酸無選擇特異性;cPLA2廣泛存在于體內(nèi)各種組織細胞中,活化時需要 Ca2+的參與和上游激酶的磷酸化作用,并可優(yōu)先選擇性地水解磷脂Sn-2位釋放氨基酸(AA)。sPLA2和cPLA2都表現(xiàn)出對Ca2+的高度敏感性;iPLA2包括iPLA2-Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ,iPLA2對AA沒有優(yōu)先選擇性,不需Ca2+維持其催化活性。iPLA2-Ⅵ曾被認為參與細胞膜的重建,另外一些學者[5]認為 iPLA2-Ⅵ也參與細胞受刺激后的 AA釋放過程。不同類型的PLA2結(jié)構(gòu)、功能各有不同,但其生理生化特性卻有許多相似之處。PLA2具有熱穩(wěn)定性,置于65℃環(huán)境中75min或90℃30min活性不變;易溶于水,但其水解聚集狀態(tài)底物(如脂微團、單層和雙層膜脂)的活力遠遠大于水解分散存在底物的活力,即其主要催化的是非均相反應;其底物分子排列方式影響酶活性。PLA 2可被許多物理、化學及生物因素激活,如機械損傷、內(nèi)毒素、血管緊張素Ⅱ、泌乳素、緩激肽、凝血酶、氧自由基和抗原等。一些細胞因子,如IL-1、TNF、IFN、PAF也能激活PLA2。

sPLA 2-Ⅱa廣泛地分布在哺乳動物的組織和細胞中,但酶的活性變化相當大[6]。取人組織標本提取液用放射化學法測定sPLA 2-Ⅱa的酶活性發(fā)現(xiàn):消化道、軟骨、腮腺和前列腺含大量sPLA2-Ⅱa,而在骨骼、骨骼肌、心、腦、腎、肝、肺、脾、胰腺、胎盤和羊膜中其活性卻很低[7]。研究[8]表明,sPLA2-Ⅱa可被許多物理、化學、生物因素及一些細胞因子激活,sPLA2-Ⅱa可使膜磷脂Sn-2位的脂酰鍵水解后,通過環(huán)氧化酶及脂加氧酶途徑,產(chǎn)生溶血磷脂及不飽和脂肪酸,它們既是信號轉(zhuǎn)導的下游效應物,也可作為脂質(zhì)炎癥介質(zhì),參與機體的一系列生理病理過程。cPLA2廣泛存在于人類各種組織中,其含量較sPLA 2-Ⅱa相對穩(wěn)定,在肺和腦組織海馬中含量略高。與sPLA2-Ⅱa一樣,cPLA2的激活也受到許多物理、化學、生物因素及一些細胞因子的調(diào)節(jié)。在缺乏Ca2+升高的情況下,cPLA2也能被激活。cPLA2被激活后,水解磷脂,生成花生四烯酸等活性物質(zhì),啟動炎癥反應,引起機體多種疾病[9]。

該研究結(jié)果顯示:sPLA2-Ⅱa和cPLA2在乳腺浸潤性導管癌組織中的表達高于正常對照組織,表明sPLA2-Ⅱa和cPLA2參與了乳腺浸潤性導管癌的發(fā)病過程,并可能在其中發(fā)揮重要作用。該研究結(jié)果還表明,不同組織分化程度及臨床分期的乳腺浸潤性導管癌中sPLA2-Ⅱa和cPLA2的表達亦不同,隨組織分化程度降低,其表達增高。而腫瘤的分化程度和分期影響腫瘤的預后,提示sPLA2-Ⅱa和cPLA2與腫瘤的預后及生物學行為有關(guān)。另外淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組織sPLA2-Ⅱa和cPLA2表達高于陰性組織,說明sPLA2-Ⅱa和cPLA 2與乳腺浸潤性導管癌的惡性程度有關(guān)。作者認為sPLA2-Ⅱa和cPLA2可作為影響乳腺浸潤性導管癌浸潤行為和預后評估的指標。但其作用的分子機制及其潛在的作用,還有待于進一步深入研究。

總之,對cPLA2及sPLA2-Ⅱa的深入研究有利于進一步了解乳腺浸潤性導管癌的生物學特性,為乳腺浸潤性導管癌的早期診斷和治療提供新的發(fā)展方向。

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