李迎春，竇志英，鄭蓓蓓

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生，天津 300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193）

鹽川楝子炮制工藝的初步研究*

李迎春1，竇志英2，鄭蓓蓓1

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生，天津 300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193）

[目的]探討鹽制川楝子的炮制工藝。[方法]以川楝素含量為指標(biāo)，采用正交設(shè)計實(shí)驗(yàn)，以悶潤時間、烘制溫度、藥材大小規(guī)格為考察因素篩選炮制工藝。[結(jié)果]小規(guī)格川楝子藥材，用2 g鹽加40 mL蒸餾水配成的溶液悶潤3 h，然后在200℃下烘干，取出放涼為最佳條件。[結(jié)論]優(yōu)選的飲片加工工藝合理可行,其高效液相色譜（HPLC）方法準(zhǔn)確、重復(fù)性好，適用于川楝子飲片的質(zhì)量控制。

川楝子；川楝素；正交實(shí)驗(yàn)；炮制工藝

川楝子，為楝科植物川楝（Melia toosendan Sied.Et Zucc.）的干燥成熟果實(shí)，別名金鈴子，又名楝實(shí)。性味苦寒，有小毒，歸肝、小腸、膀胱經(jīng)，具疏肝泄熱、行氣止痛、驅(qū)蟲之功效[1]。川楝子生用有毒，炮制后能降低毒性，增強(qiáng)理氣止痛作用，所以常炮制后用藥。傳統(tǒng)的炮制方法有炒焦、鹽制、醋制等，中醫(yī)認(rèn)為，鹽制引藥下行能療疝止痛?，F(xiàn)有的研究表明，川楝子不同炮制品都有顯著的鎮(zhèn)痛作用，其中以鹽制品鎮(zhèn)痛抗炎作用最強(qiáng)[2]，而目前對鹽制川楝子的工藝和質(zhì)量控制等方面研究較少，缺乏規(guī)范化的工藝過程和標(biāo)準(zhǔn)。本研究以川楝素含量為指標(biāo)，采用正交設(shè)計初步探討鹽制川楝子的最佳炮制工藝。

1 儀器與藥品

美國Softa高效液相色譜（HPLC）系統(tǒng)（6000 LDI PUMP；6000 PVW UV/VLS DETECTOR）；手動進(jìn)樣系統(tǒng)；烘箱DHG78-1（湖北省黃石市醫(yī)療器械廠）；粉碎機(jī)（武義縣屹立工具有限公司），F(xiàn)A 1004N型電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司），KQ-500E型醫(yī)用超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），HH-S型水浴鍋（鞏義市英峪予華儀器廠）。乙腈為色譜純（天津市康科德科技有限公司），其余試劑均為分析純，水為超純水。川楝素標(biāo)準(zhǔn)品（供含量測定用，HPLC≥98%，批號58812-37-6，成都曼思特生物科技有限公司）

川楝子飲片產(chǎn)自四川，購于天津市中藥飲片廠，批號1001084；經(jīng)本校中藥學(xué)院生藥教研室馬琳教授鑒定為楝科植物川楝（Melia toosendan Sied.Et Zucc.）的成熟果實(shí)。

2 方法與結(jié)果

2.1 炮制品中川楝素的含量測定

2.1.1 色譜條件 色譜柱為HypersilODS2（250 mm×4.6 mm,5 μm），流動相為乙腈-水（30∶70），流速為1 mL/min，檢測波長為210 nm，柱溫為35℃，進(jìn)樣量10 μL。理論塔板數(shù)按川楝素峰計算應(yīng)不低于3 000。空白溶劑色譜圖中在與川楝素相應(yīng)位置上無峰，說明此系統(tǒng)條件無干擾，見圖1。

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取川楝素對照品適量，加甲醇制成0.270 g/L的溶液，作為對照品儲備液。

2.1.3 供試品溶液的制備 精密稱定炮制品粉末（過40目篩）約1 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，在一定條件下超聲提取30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過。重復(fù)提取3次，合并濾液蒸干，甲醇溶解定容至10 mL的容量瓶中，搖勻即得。

2.1.4 線性關(guān)系考察 精密吸取0.270 g/L川楝素對照品溶液，以甲醇配制質(zhì)量濃度為：0.270、0.135、0.067 5、0.033 75、0.016 875、0.008 437 5 g/L，在上述色譜條件下測定川楝素的峰面積值，以峰面積和質(zhì)量濃度進(jìn)行回歸處理，得回歸方程Y=2 064.7X+1 053.3，r＝0.999 9。線性范圍在 0.084 375～2.70 μg呈良好的線性關(guān)系。

2.1.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定川楝素的含量，結(jié)果峰面積的相對均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）為0.146%。

2.1.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一供試品，分別于0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣測定，測得川楝素峰面積，計算RSD為2.641%。

圖1HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram

2.1.7 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取同一批號樣品,按照供試品溶液的制備方法,分別制備6份供試品溶液,測定川楝素的峰面積，計算RSD為1.831%。

2.1.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱定己測知含量的樣品6份各1g,分別精密加入一定量的川楝素對照品，按含量測定方法進(jìn)行測定，計算加樣回收率，結(jié)果RSD為1.069%。

2.1.9 樣品含量測定 精密稱取川楝子生品粉末1 g，按供試品溶液制備方法制備溶液，測定了3批樣品含量，分別為 1.974，1.953，1.896 mg/g。

2.2 炮制工藝條件的優(yōu)選

2.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計 按照傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)經(jīng)過多次預(yù)試，由單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，烘制溫度、悶潤時間和藥材規(guī)格對川楝子中的川楝素含量影響較大，故本實(shí)驗(yàn)選取烘制溫度（A）、悶潤時間（B）、藥材大?。–）為考察因素，選取3個水平，用鹽量則選取傳統(tǒng)用量2%。不考慮交互作用，采用L9（34）正交表安排實(shí)驗(yàn)，因素水平見表1。

2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 按正交表安排進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每號試驗(yàn)重復(fù)2次，取不同大?。–）的川楝子100 g，均勻噴灑40 mL食鹽水（取2 g食鹽加水至40 mL），密閉悶潤不同時間（B），置于烘箱中在不同溫度（A）下烘干后取出，放冷。正交實(shí)驗(yàn)測定數(shù)據(jù)和統(tǒng)計結(jié)果見表2。方差分析結(jié)果見表3。

表1 因素及水平Tab.1 The factors and levels

2.2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析 表2和表3結(jié)果顯示：三個因素對結(jié)果均無顯著性影響，極差分析認(rèn)為各因素的主次順序是C＞A＞B,即藥材規(guī)格＞烘制溫度＞悶潤時間。在本實(shí)驗(yàn)條件下應(yīng)選擇的組合為A3、B2、C3,即小規(guī)格川楝子飲片在一定量鹽水中悶潤3 h后，200℃下烘干，取出放冷。

2.2.4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 按上述最佳工藝制備2份炮制品，按上述含量測定項(xiàng)下的方法測定,見表4。

由上表可知，2份鹽制品結(jié)果差異較小，說明該工藝條件比較穩(wěn)定可行。鹽制品與生品相比，川楝素含量均有所下降。

表2 正交工作安排及實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.2 The orthogonal work schedule and test results

表3 方差分析表Tab.3 The ANOVA table

3 討論

川楝素是一種從楝屬植物中分離得到的一種四環(huán)三萜類化合物，不僅是川楝子中的重要活性成分，也是毒性成分。川楝素的結(jié)構(gòu)是半縮醛結(jié)構(gòu)，始終以互變異構(gòu)體存在，所以計算時要以兩個峰面積之和計算[3-4]。

本研究以川楝素的含量測定作為川楝子藥材質(zhì)控的定量標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)表明各個因素對川楝素含量影響無顯著性差異，在綜合實(shí)驗(yàn)成本和節(jié)約資源的基礎(chǔ)上，確定最佳工藝組合為為 A3、B2、C3，即小規(guī)格川楝子飲片在一定量鹽水中悶潤3 h后，200℃下烘干。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，采用不同的烘制溫度，悶潤時間，藥材規(guī)格鹽制的川楝子飲片，川楝素含量均明顯低于生品，這與炮制后降低毒性相符，在達(dá)到去毒的目的同時，仍可保留其藥效成分，控制到無毒而有效的程度。因?yàn)榇ㄩ拥闹委熈颗c中毒量非常接近，用藥需要非常謹(jǐn)慎，迫切要求深入探討在一定工藝條件下，川楝子藥材在炮制過程中產(chǎn)生的物理變化和化學(xué)變化。另外，在HPLC的圖譜中發(fā)現(xiàn)，生品的樣品在兩個川楝素峰之間存在一個較大色譜峰，而鹽制后的樣品，這個色譜峰幾乎接近消失，含量變化明顯，究竟這個物質(zhì)是否由于鹽發(fā)生了分解變化，有待于進(jìn)一步的探索。

表4 川楝子生品與鹽制品比較Tab.4 Comparison of raw and salted products ofToosendan

采用HPLC法測定川楝子藥材中川楝素的含量具有快速、精確的特點(diǎn),分離度好，可控制川楝子炮制品的質(zhì)量。

[1] 路志強(qiáng).川楝子的性味功能與現(xiàn)代臨床應(yīng)用[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥,1997,3（1）:45-46.

[2] 紀(jì)青華，陸兔林.川楝子不同炮制品鎮(zhèn)痛抗炎作用研究[J].中成藥,1999,21（4）：181-182.

[3] 鐘熾昌,謝晶曦,陳淑鳳,等.川楝素的化學(xué)結(jié)構(gòu)[J].化學(xué)學(xué)報,1975,33（1）:35-47.

[4]舒國欣,梁曉天.關(guān)于川楝素的化學(xué)結(jié)構(gòu)的修正[J].化學(xué)學(xué)報,1980，38（2）：196-198.

Preliminary study on processing technology of salted toosendan

LI Ying-chun,DOU Zhi-ying,ZHENG Bei-bei
（Tianjin University of Traditional Chinese Medicine， Tianjin 300193， China）

[Objective]To investigate the processing technology of salted Toosendan.[Methods]Taking toosendanin as the indicators of target content,screening the processing technology by using the orthogonal experimental design and taking moistening the time,baking temperature and the size specifications as the study factors of investigation.[Results]Small size Toosendan herbs,adding 40ml of distilled water and 2 g salt to make a solution,moistening for 3 h,and then drying at 200℃,removing and letting cool were the best conditions of processing.[Conclusion]This optimal processing technology of the herbal pieces is rational and feasible,the HPLC method is accurate,reproducible,and applicable to the quality control of the herbal piece of Toosendan.

toosendan;toosendanin;orthogonal design;processing technology

R285.5

A

1672-1519(2011)01-0072-03

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81073053）。

李迎春（1984－），女，碩士在讀，研究方向?yàn)橹兴幣谥萍捌渌幬锎x研究。

竇志英。

2010-09-22）