祝 青,刁慶春

（1.樂山職業(yè)技術(shù)學(xué)院,四川614000；2.重慶市第一人民醫(yī)院皮膚科 400011）

外陰白色病變是指女性外陰皮膚和黏膜發(fā)生變性及色素改變的一種慢性疾病。由于該病確切病因至今未明,患者長(zhǎng)期得不到有效的治療而成為臨床上的一個(gè)頑癥。國(guó)外統(tǒng)計(jì)其發(fā)病率為1/300～1/1000,其中2%～3%患者可能發(fā)生癌變[1]。而聚焦超聲治療是一種新興的無創(chuàng)物理治療手段,治療外陰白色病變有良好的效果,現(xiàn)已在臨床上廣泛應(yīng)用[2],但有關(guān)其治療機(jī)制的探討卻較少。神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）是一種對(duì)中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)都有營(yíng)養(yǎng)活性的蛋白質(zhì)[3]。P物質(zhì)（SP）是一種由11個(gè)氨基酸組成的致炎神經(jīng)肽[4]。本研究用SP免疫組化法觀察超聲治療前、后NGF和SP在外陰皮膚中的變化,探討NGF和SP在外陰白色病變發(fā)病機(jī)制中的可能作用及聚焦超聲治療外陰白色病變的可能機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本科進(jìn)行聚焦超聲治療外陰白色病變的20例患者為治療組,每例患者治療前及治療后6個(gè)月病變部位各取皮膚1次,其中10例同時(shí)取外陰正常皮膚為對(duì)照組。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 患者取膀胱截石位,常規(guī)外陰備皮,消毒,局部浸潤(rùn)麻醉后。用CZF型超聲治療儀（重慶海扶公司研制）對(duì)患者的外陰病變區(qū)域進(jìn)行超聲治療,工作頻率為10MHz。治療探頭以3～5mm/s的速度進(jìn)行連續(xù)直線掃描,輻照時(shí)間為15～30min,治療后24h內(nèi)外陰間斷冷敷。

1.2.2 NGF和SP表達(dá)的檢測(cè) 采用SP法免疫組化試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司研制）檢測(cè)NGF和SP蛋白表達(dá)情況,其中兔源性NGF多克隆抗體（武漢博士德生物工程有限公司研制）的工作濃度為1∶200,兔源性SP多克隆抗體（武漢博士德生物工程有限公司研制）的工作濃度為1∶100。

1.2.3 結(jié)果判斷 以細(xì)胞質(zhì)、胞漿、胞膜或間質(zhì)出現(xiàn)黃色/棕黃色顆粒和著色為NGF、SP表達(dá)陽性。采用生物醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)（重慶遠(yuǎn)程醫(yī)療設(shè)備有限公司）對(duì)切片上的染色信號(hào)進(jìn)行光密度分析,以平均光密度值代表信號(hào)表達(dá)強(qiáng)度。每張切片隨機(jī)選取3個(gè)視野（×100）,計(jì)算其平均值,進(jìn)而計(jì)算出各組的平均光密度值均數(shù)。

2 結(jié)果

正常皮膚NGF和SP主要表達(dá)于表皮中上層,陽性染色呈淺黃色至棕黃色?；疾∑pNGF和SP表達(dá)于表皮全層,陽性染色呈棕黃色至棕褐色。陽性表達(dá)平均光密度值患病皮膚明顯高于正常皮膚,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。聚焦超聲治療6個(gè)月后復(fù)查,患病皮膚NGF和SP蛋白的染色與治療前相比明顯變淡,其陽性表達(dá)平均光密度值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）,見表1,封3圖1、2。

表1 聚焦超聲治療前、后NGF和SP在表皮組織中陽性表達(dá)強(qiáng)度平均光密度值±s）

表1 聚焦超聲治療前、后NGF和SP在表皮組織中陽性表達(dá)強(qiáng)度平均光密度值±s）

★：P＜0.05,與對(duì)照組比較；▲：P＜0.05,與治療前比較。

組別 n NGF SP對(duì)照組 10 0.2359±0.0136 0.2036±0.0112治療組治療前 20 0.3647±0.0149★ 0.2544±0.0128★治療后 20 0.2370±0.0124▲ 0.2052±0.0125▲

3 討論

近年來研究發(fā)現(xiàn),NGF對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)以外的組織也具有重要的作用。SP是屬于速激肽家族。NGF和SP既參與組成神經(jīng)免疫網(wǎng)絡(luò),又是兩種重要的瘙癢介質(zhì)[5]。已發(fā)現(xiàn)NGF和SP與多種疾病有關(guān),如特應(yīng)性皮炎、銀屑病、白癜風(fēng)、蕁麻疹、扁平苔蘚、白塞病、斑禿等[6-11]。Horiuchi等[12]以患特應(yīng)性皮炎（AD）的NC鼠為研究對(duì)象,皮損處的表皮神經(jīng)纖維較對(duì)照組更為豐富,提示NGF與AD密切相關(guān)。SP是發(fā)現(xiàn)最早、分布最廣泛的一種神經(jīng)肽,目前發(fā)現(xiàn)除中樞神經(jīng)系統(tǒng)外,嗜酸性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和肥大細(xì)胞也能釋放SP[13]。SP能通過誘導(dǎo)前炎癥因子而直接或間接的增強(qiáng)皮膚炎性反應(yīng),這些細(xì)胞因子包括IL-1、IL-6、TNF-α和IFN-γ,它們又能在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍組織中誘導(dǎo)NGF的合成。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化的方法檢測(cè)到皮損中NGF和SP的表達(dá)明顯高于正常皮膚（P＜0.05）,提示NGF和SP可能通過啟動(dòng)神經(jīng)免疫網(wǎng)絡(luò)參與外陰白色病變的發(fā)病。

超聲波是一種機(jī)械波,超聲治療就是將超聲波束經(jīng)體外發(fā)射透入組織內(nèi),到達(dá)預(yù)先選定的深度,沉積形成一個(gè)生物學(xué)焦域,對(duì)焦域內(nèi)的組織產(chǎn)生治療作用,而不影響超聲波所經(jīng)過的組織和鄰近組織[14-15]。聚焦超聲以其特有的物理特性和對(duì)正常組織無創(chuàng)的特點(diǎn),開辟了無創(chuàng)治療的新領(lǐng)域[16]。本研究結(jié)果顯示NGF和SP表達(dá)超聲輻照后較輻照前明顯減弱,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。推測(cè)其作用機(jī)制可能是超聲輻照后通過其物理和生化效應(yīng)改變了局部組織微循環(huán),改善微血管和神經(jīng)末梢的營(yíng)養(yǎng)狀況和功能,促進(jìn)神經(jīng)末梢分泌的神經(jīng)肽物質(zhì)恢復(fù)正常,減少局部炎癥介質(zhì)的釋放,而減輕局部炎性反應(yīng),使癥狀、體征得到改善。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,影響NGF和SP的分泌和表達(dá)可能是聚焦超聲治療外陰白色病變的機(jī)制之一。

超聲波治療外陰白色病變高效而且安全,具有廣闊的發(fā)展前景,但其治療機(jī)制目前尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)超聲治療是有影響NGF和SP分泌、表達(dá)的作用,并對(duì)其治療機(jī)制進(jìn)行了初步的研究,但其具體的作用機(jī)制還需要進(jìn)一步的探索。

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