董 茜，單安山，劉化偉，呂文龍

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物營養(yǎng)研究所，哈爾濱 150030）

近年來中藥飼料添加劑的研發(fā)速度越來越快，由于飼料產(chǎn)業(yè)的規(guī)模越來越大，加工飼料的產(chǎn)量越來越大，所以引發(fā)大面積飼養(yǎng)中毒的潛在性也在增大。由于食物鏈的蓄積作用，飼料添加劑對人群健康的影響也是一個(gè)不可回避的問題。由于女貞子食用毒理學(xué)安全性未見有全面評價(jià)的報(bào)道，因此，本文結(jié)合女貞子的產(chǎn)品開發(fā),按國家有關(guān)飼料添加劑規(guī)范，對其做了安全毒理學(xué)評價(jià)。為女貞子作為綠色飼料添加劑在畜牧生產(chǎn)中的合理使用提供理論依據(jù)，同時(shí)也為中草藥飼料添加劑的標(biāo)準(zhǔn)化、產(chǎn)業(yè)化推廣應(yīng)用，以及利用營養(yǎng)手段調(diào)控畜產(chǎn)品的質(zhì)量和安全提供理論依據(jù)。

馬德瑩等研究表明[1]，日糧中添加1%的女貞子可顯著提高蛋雛雞血清新城疫抗體水平與脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。李群道等研究表明，日糧中添加1%的女貞子能提高肉仔雞的抗體效價(jià)，顯著提高了雞脾臟淋巴細(xì)胞在ConA誘導(dǎo)下的增殖反應(yīng)[2]。郭曉秋等研究表明，女貞子水提物可提高肉仔雞抗氧化功能[3]。楊銀平等研究發(fā)現(xiàn)，在日糧中添加女貞子萃取物可以極顯著提高蛋雞的產(chǎn)蛋率[4]。石莉莎等研究表明，日糧中添加1%的女貞子可明顯提高血清中腫瘤壞死因子[5]。陳鵬等研究表明，飼料中添加女貞子原粉可以提高肉仔雞的生長性能[6]。通過以上研究可知，女貞子具有增強(qiáng)機(jī)體生長性能，畜禽免疫機(jī)能以及提高機(jī)體抗氧化能力等作用。

為了進(jìn)一步研究女貞子超臨界CO2萃取物的性質(zhì)及其作用，使其能夠安全有效的用于臨床，按照國家衛(wèi)生部頒布《食品安全性毒理學(xué)評價(jià)程序和方法》GB15193進(jìn)行[7]，對其進(jìn)行了急性毒性試驗(yàn)，30 d飼養(yǎng)試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 受試藥物

女貞子購于哈爾濱藥材批發(fā)市場，過60目篩加工粉碎為細(xì)末，將女貞子置于65℃烘箱中烘干，置于東北林業(yè)大學(xué)進(jìn)行超臨界CO2萃取。

1.2 受試動物

昆明系小鼠40只，體重為18～22 g，雌雄各半，由哈爾濱市漢方試驗(yàn)鼠類養(yǎng)殖所提供。Wistar大鼠：體重為70～100 g，雄雌各半，由哈爾濱獸醫(yī)研究所提供。試驗(yàn)前均在實(shí)驗(yàn)條件下飼養(yǎng)觀察1周。

1.3 急性毒性試驗(yàn)

取健康小鼠40只，隨機(jī)分為4個(gè)組，每組10只，雄雌各半。試驗(yàn)前禁食16 h，但不限制飲水。試驗(yàn)時(shí)，按每千克體重11、13、15 g劑量，一次灌胃。給藥后立即觀察并記錄動物的外觀、行為活動、精神狀態(tài)、食欲、排便、體重和死亡情況，即使剖檢死亡動物，觀察病理變化，取病例器官做病理組織學(xué)檢查，存活動物繼續(xù)飼養(yǎng)1周，觀察中毒情況。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，處死所有試驗(yàn)動物，解剖檢查，比較各組試驗(yàn)結(jié)果。

1.4 30 d飼養(yǎng)試驗(yàn)

將大鼠隨機(jī)分為4組，每組12只，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)。給藥前飼養(yǎng)1周。受試物分高、中、低劑量組，分別按每千克體重3.75、2.25、0.75 g劑量摻入正?；A(chǔ)日糧飼喂，對照組飼喂正?；A(chǔ)日糧。連續(xù)給予30 d[8]。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠急性毒性試驗(yàn)

結(jié)果見表1。

表1 女貞子超臨界CO2萃取物對小鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果Table 1 Acute toxicity of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum in mice

試驗(yàn)期間，動物的精神狀態(tài)良好，采食量正常，飲水正常，毛色正常，體重正常，未見動物有任何中毒表現(xiàn)，無一動物死亡。表明受試物對雌雄小鼠經(jīng)口LD50均大于15 g·kg－1·BW－1，按急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)屬于無毒級物質(zhì)。

2.2 30 d飼養(yǎng)試驗(yàn)

2.2.1 動物一般表現(xiàn)

試驗(yàn)過程中動物無死亡，精神狀態(tài)良好，毛色正常，采食正常，飲水正常，無異常行為表現(xiàn)。

2.2.2 各劑量組對動物生長活動的影響

結(jié)果見表2。由表2可知，各組動物生長活動正常。受試物劑量組雌、雄動物體重相比較無明顯差異，最高劑量組與對照組差異無顯著性（P＞0.05）。由此表明，女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠的體重?zé)o影響。

由表3和4可知，女貞子超臨界CO2萃取物摻入飼料中飼喂給大鼠30 d，動物未出現(xiàn)異?，F(xiàn)象，各受試物劑量組動物體重增長、采食量、總的食物利用率均無明顯差異，并且高劑量組動物體重增長、采食量、總的食物利用率與對照組比較無顯著差異（P＞0.05），說明女貞子超臨界CO2萃取物對動物進(jìn)食及生長狀況無不良影響。

表2 女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠體重的影響（±S）Table 2 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on body weight changes in rats（±S）

表2 女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠體重的影響（±S）Table 2 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on body weight changes in rats（±S）

性別Sex劑量（g）Dose動物數(shù)（只）Number體重（g）Weight 0雌Female第2周Week 2 150.8±13.20 154.5±10.34 149.8±2.50 154.8±10.59 151.5±13.33 156.8±6.18 150.0±15.34 156.3±6.95 0.75 2.25 3.75 0 0.75 2.25 3.75 6 6 666 6 6 6第0周Week 0 85.0±14.72 86.3±13.77 81.3±6.29 83.8±11.09 86.3±13.77 88.8±13.15 87.5±17.08 85.0±12.91第1周Week 1 116.3±15.06 116.8±14.31 114.8±5.19 117.8±11.73 117.0±14.07 119.0±13.44 118.8±15.11 118.8±9.00雄Male第3周Week 3 201.5±7.85 204.3±11.30 201.0±4.32 202.8±10.21 202.0±5.34 206.3±2.50 202.8±5.32 203.3±5.44第4周Week 4 238.5±10.85 247.5±13.30 242.8±5.56 245.8±8.02 239.3±3.86 248.5±2.08 244.3±3.86 248.0±7.07

表3 女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠每周采食量的影響Table 3 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on food intake in rats

表4 女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠增重及總食物利用率的影響Table 4 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on food utilization in rats

2.2.3 對大鼠血常規(guī)的影響

結(jié)果見表5。

從血液常規(guī)指標(biāo)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可知，各受試物劑量組的血紅蛋白、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板之間差異不顯著，并且最高劑量組與對照組比較差異無顯著性（P＞0.05），亦無劑量－效應(yīng)關(guān)系，而且波動數(shù)值都在大鼠血液學(xué)正常值范圍之內(nèi)[9－10]，表明女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠的紅細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白含量和血小板均無不良影響，無毒理學(xué)意義。

表5 女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠血常規(guī)檢查結(jié)果的影響Table 5 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on hemogram in rats

2.2.4 對大鼠血清生化檢查的影響

大 鼠 血 清的ALT、 AST、 BUN、 Cr、 Glu、Alb、TP、TCH、TG測定，各受試物劑量組之間對比無顯著差異（見表6），并且最高劑量組和對照組之間差異不顯著（P＞0.05）。表明女貞子超臨界CO2萃取物對肝、腎功能、脂代謝、糖代謝均無不良影響。所測定的數(shù)值均在正常值范圍內(nèi)[11]，無毒理學(xué)意義。

2.2.5 對大鼠臟器絕對重量及臟/體比的影響

結(jié)果見表7、8。

表6 女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠血液生化指標(biāo)的影響Table 6 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on blood components in rats

表7 女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠臟器絕對重量的影響Table 7 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on absolute organ weight in rats

表8 女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠臟/體比的影響Table 8 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on the ratio of spleen to body weight in rats

由表7和8可知，各受試物劑量組之間無顯著性差異，并且最高劑量組與對照組比較差異不顯著（P＞0.05），而且均在大鼠臟器重量正常值范圍內(nèi)[12]。表明女貞子超臨界CO2萃取物對實(shí)驗(yàn)動物各臟器的發(fā)育以及生長無明顯影響。

2.2.6 病理組織學(xué)檢查

大體解剖肉眼所見：各試驗(yàn)劑量組雌雄大鼠的心、肝、脾、腎、胃腸、睪丸和卵巢與正常對照組比較其外觀顏色和臟器大小正常，均未見明顯滲出物、增生、水腫、萎縮等病理變化。各劑量組受檢臟器均未見有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的病理變化。

3 討 論

我國是最早使用中草藥作為飼料添加劑的國家[13]，為保障使用的安全，并對女貞子超臨界CO2萃取物的進(jìn)一步開發(fā)利用提供可靠的毒理學(xué)依據(jù)，我們進(jìn)行了毒理試驗(yàn)。結(jié)果表明小鼠經(jīng)口LD50在15 g·kg－1·BW－1范圍內(nèi)，屬于無毒級。女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠30 d飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明，女貞子超臨界CO2萃取物對在實(shí)驗(yàn)期間各劑量組的大鼠均未見異常癥狀和體征，也無死亡情況；女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠體重增長未見明顯影響；女貞子超臨界CO2萃取物各劑量組雌、雄大鼠的增重、進(jìn)食量及食物利用率與對照組相比較均無顯著性差異；女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠的生長發(fā)育未見明顯影響；女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白和血小板未見明顯影響；女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠血液生化指標(biāo)未見明顯影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明，女貞子超臨界CO2萃取物各試驗(yàn)組與對照組的大鼠的血清葡萄糖、白蛋白、膽固醇、甘油三酯、尿素氮、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、總蛋白、肌酐等生化檢查結(jié)果均在正常范圍內(nèi)；從女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠組織檢查結(jié)果的影響可知，大鼠大體解剖觀察和病理組織學(xué)觀察結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)異常病變。通過鏡檢可知，心臟、肝臟、脾臟、腎臟、胃、腸、睪丸、卵巢均未見一場病變，未見明顯不良影響。

4 結(jié)論

通過以上研究結(jié)果表明，作為飼料添加劑，從毒理學(xué)角度來看，女貞子超臨界CO2萃取物在此劑量條件下對動物是安全的，可以放心的食用。

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