中國藥理學(xué)通報(bào):

您好.

我對(duì)貴刊已發(fā)表的論文《聚腺苷二磷酸核糖聚合酶－1抑制劑高通量篩選模型》一文的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)產(chǎn)生疑問(附件為其文章)，其文章在Fig 3中顯示PARP-1的標(biāo)準(zhǔn)曲線，橫坐標(biāo)為PARP的濃度，縱坐標(biāo)為RFU，隨著PARP含量增加，NAD含量應(yīng)是降低，熒光值應(yīng)當(dāng)是降低，但是論文中RFU是上升，我對(duì)這篇文章的真實(shí)性產(chǎn)生疑問，請(qǐng)給予回復(fù)解釋此事，謝謝!

讀者

中國藥理學(xué)通報(bào):

關(guān)于PARP-1抑制劑篩選模型的建立文章，我們查閱了當(dāng)時(shí)實(shí)驗(yàn)記錄(本實(shí)驗(yàn)主要完成于2005年1月～10月)

1)Fig 2中，我們只檢測了反應(yīng)體系中不同濃度的NAD+反應(yīng)后的熒光值，此時(shí)沒有加入PARP-1酶。結(jié)果表明，直到500 nM反應(yīng)仍具有良好的線性關(guān)系。

2)在Fig 3中，我們實(shí)驗(yàn)的目的是想通過這個(gè)實(shí)驗(yàn)確定反應(yīng)中所要需要的PARP-1酶的量。我們選用了不同濃度的PARP-1，同時(shí)我們也加入逐漸增加的NAD+的濃度(起到滴定作用:從500 nM，1000 nM，2500 nM，5000 nM，10 000 nM和20 000 nM)，我們發(fā)現(xiàn)當(dāng)酶的濃度達(dá)到1 000 μg·L－1時(shí)，即使增加酶的濃度和NAD+的濃度，熒光值也沒什么變化，可能是反應(yīng)中酶全部反應(yīng)后，剩余NAD+的濃度達(dá)到飽和所導(dǎo)致的。因此我們實(shí)驗(yàn)中選擇酶的量為大于1 000 μg·L－1。選用的NAD+的量為500 nM。我們認(rèn)為Fig 3中熒光值上升可能是由于逐漸加入NAD+含量增加的原因。

3)當(dāng)我們確定反應(yīng)的酶的量和NAD+的量后，就建立了篩選模型，空白對(duì)照組只含有NAD+，認(rèn)為是100%抑制，陽性對(duì)照孔只含有NAD+和Parp-1，認(rèn)為是0%抑制率。對(duì)于加了化合物的孔則通過計(jì)算得到相對(duì)的抑制率。

4)關(guān)于周老師對(duì)Fig 3的疑問，非常抱歉我們沒有在文章中寫明反應(yīng)條件，建立的該模型是在我們實(shí)驗(yàn)室初步建立完成的，也進(jìn)行了陽性藥篩選和穩(wěn)定性研究，但是由于我們寫作不嚴(yán)謹(jǐn)，給您帶來困擾，很抱歉。

如果需要我進(jìn)一步提供資料，我會(huì)積極配合，謝謝。此致!

柳軍