孔娟

銀星養(yǎng)腦片是由我院多年使用證明臨床療效確切的驗(yàn)方。主要用于中風(fēng)、心痛的治療及預(yù)防。方中銀杏葉為君藥，具活血止痛的功效。川芎、太子參、熟地為臣藥，起到增強(qiáng)銀杏葉功效的作用。我們采用HPLC法對(duì)川芎中的有效成分阿魏酸進(jìn)行含量測(cè)定，作為銀星養(yǎng)腦片的含量檢測(cè)指標(biāo)。[1]

1 儀器與試藥

1.1 儀器設(shè)備 安捷倫高效液相色譜儀及色譜工作站，UV檢測(cè)器，Kromasil C18柱，精密分析天平，UV光度計(jì)，自動(dòng)控溫電加熱水浴鍋。

1.2 試藥試劑 色譜級(jí)甲醇，自制蒸餾水，冰醋酸等試劑為AR級(jí);阿魏酸對(duì)照品;銀星養(yǎng)腦片(本院自制:批號(hào):(100628、100820、101101、110107、110203、110309)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Kromasil C18柱(4.6 m/n×250 mm，5μm)，流動(dòng)相1%冰醋酸-甲醇(70∶30)，流速1 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)321 nm，進(jìn)樣量10μl，理論塔板數(shù)以阿魏酸計(jì)大于4000，分離度大于2。

2.2 制備供試品溶液 將5粒銀星養(yǎng)腦片搗碎，精密稱定碎片約1.5 g，加入適量硅藻土混合研細(xì)，將細(xì)粉置于帶塞的錐形瓶中，精密加入70%的甲醇溶液50 ml，加塞，稱定重量，于水浴上加熱回流30 min，放冷至室溫再稱重，加入70%甲醇溶液補(bǔ)足至原重量，搖勻，靜置10 min后，取上清液濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品。

2.3 制備對(duì)照品溶液 取阿魏酸對(duì)照品約3 mg，精密稱定，置于25 ml棕色量瓶中，加約20 ml70%的甲醇溶液超聲助溶10 min后，加70%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得阿魏酸對(duì)照品儲(chǔ)備液，分別取儲(chǔ)備液 1 ml、2 ml、4 ml、6 ml、8 ml加入到10 ml棕色容量瓶中，用70%甲醇溶液稀釋至10 ml，即成阿魏酸含量為 12.2、24.4、48.8、73.2、97.6 μg/ml的系列對(duì)照品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察 分別吸取上述對(duì)照品溶液各10.0μl，按確定的色譜條件測(cè)定各對(duì)照液中阿魏酸的峰面積值。計(jì)算回歸方程為:Y=2512.3X+27.380，r=0.9998，說(shuō)明阿魏酸含量在12.2～97.6μg/ml范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度考察 同一供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，每次10.0μl，對(duì)其所得 5次峰面積進(jìn)行精密度計(jì)算，RSD為0.98%。

2.6 穩(wěn)定性考察 同一樣品液分別于0 h，1 h，2 h，4 h，6 h，8 h進(jìn)樣測(cè)定，每次10.0μl，對(duì)其所得6次峰面積進(jìn)行精密度計(jì)算，RSD為2.24%，表明樣品中的阿魏酸在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的銀星養(yǎng)腦片25粒，研磨后，按照對(duì)角分樣原則分成5份，將每一份樣品按照供試品溶液制備方法制備樣品液，并進(jìn)行含量測(cè)定，根據(jù)線性關(guān)系計(jì)算含量，樣品中阿魏酸的平均含量為1.1 mg/片，RSD為1.48%。

2.8 回收率試驗(yàn) 分別精密稱取5份含量已知的銀星養(yǎng)腦片，每份約1.0 g，將其按照樣品溶液制備方法進(jìn)行制備后，分別加入到5份相同濃度的阿魏酸對(duì)照品溶液(0.122 mg/ml)中，按照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定含量，同時(shí)計(jì)算回收率。結(jié)果測(cè)得的阿魏酸的平均回收率為98.12%，RSD=0.76%。

2.9 樣品測(cè)定 取6個(gè)批號(hào)的銀星養(yǎng)腦片，按照供試品溶液的制備方法制備樣品液，分別量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各 10.0 μl，進(jìn)樣檢測(cè)含量。批號(hào):(100628、100820、101101、110107、110203、110309)，含量:0.13、0.14、0.13、0.14、0.13、0.12。

3 討論

川芎是臨床活血化瘀要藥，具有行氣活血、祛風(fēng)止痛的功效。是銀星養(yǎng)腦片中的主要藥材之一。國(guó)內(nèi)外有較多關(guān)于川芎化學(xué)成分及藥理學(xué)的研究資料，阿魏酸是川芎的主要有效成分之一[2]。且2010版藥典中增加了阿魏酸作為川芎的含量測(cè)定項(xiàng)。因此，我們將阿魏酸的含量作為銀星養(yǎng)腦片的定量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

川芎中阿魏酸的含量測(cè)定色譜條件有較多的研究，我們采用藥典中川芎質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中關(guān)于阿魏酸含量測(cè)定的色譜條件作為銀星養(yǎng)腦片中阿魏酸的HPLC色譜檢測(cè)條件[3]。

川芎在銀星養(yǎng)腦片中是以浸膏粉入藥，原生藥每片為0.105 g，按照中國(guó)藥典2010版中川芎質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，含量不低于0.1%的標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合我們測(cè)定的6批次樣品的含量，將銀星養(yǎng)腦片的含量范圍定為:每片含阿魏酸不低于:0.1 mg。

采用高效液相色譜法測(cè)定銀星養(yǎng)腦片中阿魏酸的含量，該方法重現(xiàn)性、分離度等均符合規(guī)定，穩(wěn)定性好，可用于銀星養(yǎng)腦片中有效成分含量控制標(biāo)準(zhǔn)。

[1]朱長(zhǎng)福，石全信，嚴(yán)玉平，等.不同川芎藥材中川芎嗪及阿魏酸含量及指紋圖譜研究.中藥材，2008，3(9):1113.

[2]張村，李麗，耿立冬，劉元艷，肖永慶.芎藥材有效成分鑒別及其含量標(biāo)準(zhǔn)研究.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，(2):66-69.

[3]王方，李瑩.不同產(chǎn)地川芎藥材中川芎總酚和阿魏酸的含量測(cè)定.中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2010(20).