葛李薇,武智聰,張朝鳳,張 勉

(中國藥科大學(xué)教育部現(xiàn)代中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,生藥學(xué)研究室,江蘇南京 211198)

何首烏為蓼科常用中藥材,廣布于全國各地,具有解毒、消癰、潤(rùn)腸通便等功效。而有關(guān)其系統(tǒng)位置一直引起人們的爭(zhēng)議。在傳統(tǒng)上,人們將何首烏歸為廣義蓼屬 Polygonum蔓蓼組植物[1],而在《中國植物志》[2]等分類系統(tǒng)中是將蔓蓼組植物上升為何首烏屬 Fallopia,而侯元同[3]又將何首烏屬下分為 5個(gè)組:蔓首烏組、木藤首烏組、何首烏組、醬頭組和牛皮消首烏組,還有按花粉類型[4]分成卷莖蓼組、蔓蓼組。其中蔓蓼組在植物形態(tài)上均具有莖纏繞、花兩性、柱頭頭狀,膨大塊根或根狀莖等特征,包括何首烏 F.m ultifloraThunb.、毛脈蓼 F.cillinerve(Nakai)Ohwl,齒葉蓼 F.denticulataHuang ex J.R.Wu et F.Liu等。毛脈蓼藥材名為朱砂七,別名朱砂蓮、紅藥子,主產(chǎn)于陜西秦嶺和大巴山,有清熱解毒,抗菌消炎的功效,用于治療扁桃體炎、胃炎、腸炎、潰瘍病、菌痢等[5]。齒葉蓼藥材名為醬頭,別名絳頭、赤地膽、血苕等,是民間常用藥,是我國特有種,具收斂、止瀉、消炎、止痛的作用,用于痢疾、消化不良、慢性肝炎、內(nèi)外出血[6]。3種藥材的原植物在形態(tài)特征上相似,《中國植物志》中將毛脈蓼作為何首烏的變種[2],也有學(xué)者認(rèn)為毛脈蓼為一個(gè)獨(dú)立的種[7],而在民間也常有將毛脈蓼、齒葉蓼與何首烏混用[8-9]。本文通過觀察何首烏、毛脈蓼及齒葉蓼藥用部位的形態(tài)和顯微特征,并對(duì)其 HPLC-ESI/MS圖譜進(jìn)行分析,通過與對(duì)照品比對(duì)指認(rèn)主要色譜峰,探討何首烏屬 3種藥用植物何首烏、毛脈蓼及齒葉蓼的性狀、顯微及化學(xué)成分的區(qū)別點(diǎn),為合理用藥提供科學(xué)依據(jù),也為進(jìn)一步從性狀、化學(xué)等方面研究何首烏屬的系統(tǒng)位置提供理論基礎(chǔ)。

1 儀器、試劑與材料

Agilent 1100高效液相色譜儀 (美國),Chem-Station色譜工作站,Mettler Toledo AL 104型分析天平 (瑞士),A.O.Reichert Histo STAS旋轉(zhuǎn)切片機(jī)(美國),OlympusBX-51顯微鏡和 DP50數(shù)碼成像工作站 (日本)。本實(shí)驗(yàn)所用的對(duì)照品均為本課題組分得,甲醇為色譜純,番紅 T(中國醫(yī)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司),固綠 FCF(中國醫(yī)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司),中性樹膠 (上海標(biāo)本模型廠),二甲苯、無水乙醇等試劑均為分析純。

本實(shí)驗(yàn)材料為河南嵩縣、云南新縣、江蘇南京、貴州貴陽等 4個(gè)產(chǎn)地的何首烏 F.m ultiflora,甘肅蘭州的毛脈蓼 F.cillinerve和云南西雙版納的齒葉蓼F.denticulata的膨大塊根,所用材料的原植物均由本人鑒定并經(jīng)張勉教授審核。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 性狀及顯微鑒別

對(duì)何首烏、毛脈蓼、齒葉蓼的藥用部位進(jìn)行形態(tài)觀察,采用番紅 -固綠染色法制成石蠟切片,利用光學(xué)顯微鏡觀察其顯微結(jié)構(gòu)特征 (圖1,2)。

何首烏根呈團(tuán)塊狀或不規(guī)則紡錘形,表面紅棕色或褐色,皺縮不平,有淺溝,并有橫長(zhǎng)皮孔及細(xì)根痕。質(zhì)堅(jiān)實(shí),不易折斷。斷面黃棕色或紅棕色,顯粉性,可見“云錦狀花紋 ”(異型維管束)。根橫切面的木栓層為 2～3列長(zhǎng)方形的細(xì)胞;栓內(nèi)層為數(shù)列切向延長(zhǎng)的細(xì)胞;其外有頹廢的表皮細(xì)胞。韌皮部寬廣,主要由薄壁細(xì)胞構(gòu)成,韌皮射線不明顯;散有數(shù)個(gè)異型復(fù)合維管束;纖維束散在,纖維類多角形或不規(guī)則形,直徑為 5～30μm,壁厚約 2.5μm;草酸鈣簇晶散在。形成層成環(huán)。木質(zhì)部較發(fā)達(dá);導(dǎo)管類圓形,多單個(gè)散在,直徑 13～101μm;纖維類方形,直徑 5～18μm,壁厚約 2.5μm;木射線數(shù)列細(xì)胞寬,不甚明顯,細(xì)胞壁多增厚。(圖1 A,2A)

毛脈蓼根呈團(tuán)塊狀或略呈圓柱形,表面棕黃色,粗糙,具眾多瘤狀突起和支根痕。質(zhì)極硬,難折斷。斷面土黃色或黃棕色,粉性。根橫切面的木栓層為數(shù)列長(zhǎng)方形細(xì)胞;栓內(nèi)層為 2～5列切向延長(zhǎng)的細(xì)胞。韌皮部較寬;纖維束分布于中、外側(cè),散在,纖維類多角形或不規(guī)則型,直徑 4～26μm,壁厚約 2.5 μm,非木化;草酸鈣簇晶散在。形成層環(huán)狀。木質(zhì)部發(fā)達(dá);導(dǎo)管類圓形,多單個(gè)散在,外側(cè)較大,向內(nèi)漸小,直徑 12～109μm;纖維類方形,直徑 4～23μm,壁厚約 2.5μm;木射線寬約 1～4列細(xì)胞,細(xì)胞壁增厚或外側(cè)的不增厚;偶見草酸鈣簇晶散在。(圖1B,2B)

齒葉蓼根呈不規(guī)則圓形或結(jié)節(jié)狀。表面棕褐色或紅褐色,皺縮,有不規(guī)則深皺紋、鱗片狀紋、橫長(zhǎng)皮孔及細(xì)根痕。質(zhì)堅(jiān)實(shí)。斷面不平整,紅色或紫紅色,粉性,皮部窄,木部散有多數(shù)凹陷的褐色筋脈點(diǎn)。根橫切面的木栓層為數(shù)列長(zhǎng)方形細(xì)胞;栓內(nèi)層為 2～5列切向延長(zhǎng)的細(xì)胞。韌皮部極窄,細(xì)胞多皺縮,草酸鈣簇晶散在。形成層環(huán)狀。木質(zhì)部發(fā)達(dá);導(dǎo)管類圓形,多單個(gè)散在,直徑 12～109μm;纖維類方形,直徑 4～23μm,壁厚約 2.5μm;木射線寬約 1～4列細(xì)胞,細(xì)胞壁增厚或外側(cè)的不增厚;偶見草酸鈣簇晶散在。(圖1C,2C)

圖1 何首烏、毛脈蓼、齒葉蓼根橫切面概貌圖

圖2 何首烏、毛脈蓼、齒葉蓼根橫切面詳圖

2.2 HPLC-ESI/MS圖譜分析

取何首烏、毛脈蓼、齒葉蓼粉末 (過 60目篩)0.2 g,精密稱定,加甲醇 20 mL,超聲提取 45 min,冷卻至室溫,補(bǔ)重,濾過,用 0.45μm微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液作為供試品溶液。取何首烏、毛脈蓼、齒葉蓼供試品溶液在 200～600 nm下進(jìn)行掃描,結(jié)果顯示 3者在 210、280 nm均有較強(qiáng)吸收,考慮到 210 nm靠近紫外吸收區(qū)邊緣,干擾較大,故選擇 280 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。按如下條件進(jìn)行測(cè)定:色譜柱:ZORBAX SB-C18 150 mm ×4.6 mm;5μm;柱溫:23℃;流動(dòng)相:甲醇 (A)-0.1%甲酸水 (B),梯度洗脫程序:0～25 min,5～30%;25～35%min,30～35%;35～60 min,35～55%;60～75 min,55～65%;75～90 min,65～80%;90～100 min,80～85%;100～110 min,85～100%。流速:1 mL/min;進(jìn)樣量:10μL。質(zhì)譜條件:電噴霧離子化 (ESI),負(fù)離子模式,毛細(xì)管電壓:3 200 V,干燥氣流速:9.0 L/min,霧化氣壓力:40.0psi,干燥氣溫度:350℃,質(zhì)量掃描范圍:m/z 50～1200

采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2004A)”軟件,對(duì)來自 4個(gè)不同產(chǎn)地何首烏根的HPLC圖譜進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,建立何首烏的對(duì)照指紋圖譜。通過與對(duì)照品的色譜保留時(shí)間、分子量和負(fù)離子模式下的 ESI/MS裂解方式分析,對(duì)何首烏藥材共有色譜峰、毛脈蓼和齒葉蓼的主要色譜信號(hào)進(jìn)行歸屬 (如圖3,4和 5)。

圖3 四個(gè)產(chǎn)地何首烏的色譜圖

圖4 毛脈蓼 HPLC色譜圖

上述結(jié)果表明,四個(gè)產(chǎn)地的何首烏藥材中含二苯乙烯類、蒽醌類和萘苷類 (圖3中峰 1～10),其中二苯乙烯苷 (峰 2)含量最高。毛脈蓼中亦含有二苯乙烯類、蒽醌類和萘苷類,其中蒽醌類含量較高,主要為大黃素、大黃素甲醚及其苷類。何首烏和毛脈蓼有 9個(gè)共有成分:沒食子酸、白藜蘆醇、大黃素 -6-O-β-D-葡萄糖苷、決明酮苷、大黃素 -8-O-β-D-葡萄糖苷、大黃素甲醚苷、大黃素、大黃素甲醚以及分子量 518的蒽醌苷 (未鑒定出)。而齒葉蓼中所含成分極性較大,保留時(shí)間主要集中在 20 min～40 min,含量最高的峰 3為棓兒茶素沒食子酸酯,未檢測(cè)到二苯乙烯類及蒽醌類成分,但 3種藥材中均檢測(cè)出共有成分沒食子酸。

圖5 齒葉蓼 HPLC色譜圖

3 討 論

(1)何首烏、毛脈蓼、齒葉蓼根的斷面特征具有一定區(qū)別,何首烏斷面黃棕色或紅棕色,可見“云錦狀花紋”,而毛脈蓼、齒葉蓼未見。毛脈蓼為土黃色或黃棕色,而齒葉蓼的呈紅色或紫紅色。何首烏韌皮部具異常維管束,毛脈蓼、齒葉蓼中未見。何首烏木射線不明顯,而毛脈蓼、齒葉蓼的木射線明顯,且射線細(xì)胞中有的含有草酸鈣簇晶。何首烏、毛脈蓼韌皮部寬廣,均散有纖維束,而齒葉蓼韌皮部狹窄,且細(xì)胞多皺縮,未見纖維束散在,導(dǎo)管直徑亦相對(duì)較大。

(2)HPLC/MS分析結(jié)果表明,蒽醌及二苯乙烯類化合物是何首烏和毛脈蓼中共有成分類型,但是含量上具有一定的差異性,本課題組前期的化學(xué)研究結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)[10],在以往對(duì)何首烏屬部分植物化學(xué)成分進(jìn)行研究[11-13],發(fā)現(xiàn)本屬植物大多均含特征性蒽醌類成分,本文首次報(bào)道了齒葉蓼主要含有原花青素類物質(zhì)。

(3)對(duì)何首烏中蒽醌及茋類的組織分布研究顯示,蒽醌類成分主要分布于韌皮部,茋類成分主要分布于周皮和韌皮部[14]。然而齒葉蓼韌皮部狹窄,這可能與蒽醌及二苯乙烯類成分的累積相關(guān)。

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