張偉健 車小群 鐘 倩 練曉勤

（廣東省江門市中心醫(yī)院婦科，廣東 江門 529030）

Survivin與Bax蛋白在宮頸上皮內瘤變和宮頸癌中的表達及臨床意義

張偉健 車小群 鐘 倩 練曉勤

（廣東省江門市中心醫(yī)院婦科，廣東 江門 529030）

目的研究Survivin、Bax在宮頸上皮內瘤變（CIN）及宮頸癌中的表達，探討二者在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展機制中的作用及臨床意義。方法采用免疫組織化學法檢測Survivin和Bax蛋白在83例宮頸上皮內瘤變及71例宮頸癌中的表達，另取12例正常宮頸組織作為對照。結果Survivin 蛋白的陽性率在宮頸癌、宮頸上皮內瘤變和正常宮頸組織中分別為76.1%、45.8%和0%，Bax蛋白的陽性表達率分別為7%、39.8%和75.0%（P＜0.05）。Survivin蛋白表達在CIN Ⅲ高于CIN Ⅱ，CIN Ⅱ高于CIN Ⅰ，在宮頸癌Ⅲ期高于Ⅱb期，Ⅱb期高于Ⅰ～Ⅱa期，在淋巴結轉移組高于無淋巴結轉移組（P＜0.05）。在宮頸癌與CIN中Survivin與Bax的表達呈負相關。結論Survivin和Bax的異常表達可能參與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展過程，在抗凋亡作用增強、促凋亡作用下降兩方面協同發(fā)揮作用，二者的表達程度與不良預后有關。

Survivin；Bax；宮頸癌；宮頸上皮內瘤變

宮頸癌是女性最常見的生殖道惡性腫瘤。細胞癌基因的激活、抑癌基因的失活和細胞凋亡的抑制是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要機制。Survivin是新近發(fā)現的一種凋亡抑制基因，具有抑制凋亡效應蛋白酶Caspase的活性、參與細胞周期調控及調節(jié)細胞有絲分裂等多種生物學作用[1]。Bax是一種促凋亡基因，可以通過激活Caspase信號轉導途徑、破壞ATP合成功能、改變細胞氧化還原反應等機制發(fā)揮促凋亡作用[2]。本研究通過檢測宮頸上皮內瘤變（CIN）及宮頸癌組中的Survivin與Bax的蛋白表達，探討二者在宮頸癌前病變及宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 研究對象

2006年1月至2010年12月江門市中心醫(yī)院收治的宮頸癌患者71例，按國際婦產科聯盟（FIGO）宮頸癌分期標準進行分期：Ⅰ～Ⅱa期18例、Ⅱb期26例、Ⅲ期27例，淋巴結轉移49例。CIN患者83例，CINⅠI級（輕度不典型增生）24例，CIN Ⅱ級（中度不典型增生）31例，CIN Ⅲ級（中度不典型增生）28例。宮頸正常者12例。3組年齡均為29～68歲，平均年齡44.6歲。所有患者術前均未進行化療和放療。

1.2 主要試劑

鼠抗人Survivin單克隆抗體、鼠抗人Bax單克隆抗體、一抗及二抗試劑盒和染色劑均購于上海晶美生物技術有限公司。

1.3 方法

1.3.1 標本處理

所有標本及時以4%多聚甲醛（含有1/1000DEPC）固定，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片。

1.3.2 免疫組織化學染色

采用免疫組織化學S-P法，實驗步驟按試劑盒說明書進行，以檸檬酸緩沖液高溫高壓進行抗原修復，DAB顯色，用公司出售陽性切片作陽性對照，以PBS液代替一抗作為陰性對照。

1.3.3 結果判定

Survivin陽性判定標準：Survivin陽性表達定位于細胞漿，偶見于細胞核，以細胞漿或胞核出現淡黃色、棕黃色或棕褐色顆粒為陽性信號；Bax表達陽性為細胞漿呈棕黃色或棕褐色顆粒。每例均隨機觀察5個高倍視野（×400），用半定量積分法判斷結果，陽性細胞≤5%為0分，6%～25%為 1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞ 75%為4分；陽性強度黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩項積分相乘：0分為陰性（一），1～4分為弱陽性（+），5～8分為中度陽性（++），9～l 2分為強陽性（+++）。

1.3.4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS11.5軟件對Survivin和Bax在各組中表達的陽性率進行比較，采用χ2檢驗或四格表的Fisher確切概率法；相關性分析用Spearman等級相關分析法，P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 Survivin蛋白在3種組織中的表達

Survivin陽性表達主要定位于細胞漿，偶見于細胞核。Survivin在宮頸上皮內瘤變及宮預癌組織中有非常豐富的表達。但是在正常宮頸組織中的表達為陰性。Survivin陽性程度：宮頸癌高于CIN（χ2=14.58，P＜0.05），CIN高于正常宮頸組織（χ2=11.21，P＜0.05），見表1。且隨病變臨床分期和組織分化程度的升高而升高：CIN Ⅲ高于CIN Ⅱ（χ2=4.16，P＜0.05），CIN Ⅱ高于CIN Ⅰ（χ2=4.99，P＜0.05），宮頸癌Ⅲ期高于Ⅱb期（χ2=4.34，P＜0.05），Ⅱb期高于Ⅰ～Ⅱa期（χ2=4.85，P＜0.05）。而CIN Ⅲ與宮頸癌之間（χχ2=3.34，P＞0.05）差異無統(tǒng)計學意義。Survivin蛋白在有淋巴結轉移組的陽性率高于無轉移組（χ2=7.48，P＜0.05），見表2。

表1 Survivin和Bax在3組中的表達 n（%）

表2 宮頸組織中Survivin和Bax蛋白表達與臨床病理特征的關系

2.2 Bax蛋白在3組織中的的表達 Bax蛋白陽性表達主要存在于細胞漿，在宮頸上皮內瘤變、宮頸癌及正常宮頸組織中均有表達。Bax陽性程度：宮頸癌低于CIN（χ2=22.04，P＜0.05），CIN低于正常宮頸組織（χ2=5.28，P＜0.05），見表1。在CIN陽性率隨CIN級別的升高而降低：CIN Ⅲ低于CIN Ⅱ（χ2=0.60，P＞0.05），CIN Ⅱ低于CIN I（χ2=0.6，P＞0.05），但差異無統(tǒng)計學意義。在宮頸癌陽性率隨臨床分期的增高而降低：Ⅲ期低于Ⅱb期（χ2=0.39，P＞0.05），Ⅱb期低于Ⅰ～Ⅱa期（χ2=0.15，P＞0.05），但差異均無統(tǒng)計學意義。Bax蛋白在有淋巴結轉移組的陽性率低于無轉移組（χ2=0.20，P＞0.05），但差異無統(tǒng)計學意義，見表2。

2.3 CIN和宮頸癌組織中Sruvivin的表達強度與Bax蛋白表達強度之間均呈負相關關系（r1=-0.83，P1＜0.05；r2=-0.86，P2＜0.05）。

3 討 論

宮頸病變從良性病變發(fā)展為CIN、原位癌、浸潤癌是一個多階段、多步驟的連續(xù)過程，與多種癌基因和抑癌基因的表達、調控以及細胞凋亡有關。Survivin屬于凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族新成員，是具有細胞凋亡和調節(jié)細胞分裂的雙功能蛋白，是至今發(fā)現最強的凋亡抑制因子[3]。Survivin可直接作用于Caspase這一凋亡核心機制，主要通過粘附于活化的Caspase-3、Caspase-7[4]，從而阻斷凋亡過程，這說明Survivin是在凋亡通道匯聚點的部位起作用。Survivin在成人終末分化的成熟組織（除胸腺、生殖腺）中不表達或極低表達，而在人類大多數腫瘤中都可檢測到Survivin。本研究顯示，正常宮頸組織無Survivin表達，CIN陽性表達率為45.8%，宮頸癌為76.1%，這一結果與李婷等[5]的報道一致。Kim等[6]通過免疫組織化學的方法對41例CIN及宮頸浸潤癌的研究發(fā)現，隨著病變的發(fā)展，Survivin的表達逐漸升高。本研究表明Survivin蛋白表達在CIN和宮頸癌組織中逐漸升高，差異有統(tǒng)計學意義。隨著CIN級別的升高、宮頸癌分期的進展和向遠處淋巴結轉移，Survivin的表達隨之增強。以上結果提示Survivin蛋白表達與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關，其可能通過抑制細胞凋亡、促進細胞增殖而發(fā)揮作用，可能預示腫瘤具有較高的侵襲性和不良預后。

Bax是Bcl-2家族的重要成員，對細胞凋亡的調控起著重要作用。Bcl-2可以抑制多種組織的細胞凋亡，延長細胞生存而參與腫瘤的發(fā)生，是目前公認的抗凋亡基因。Bax是水溶性蛋白，能與Bcl-2形成二聚體，具有抑制Bcl-2從而促進細胞凋亡的作用。本研究發(fā)現，Bax蛋白表達水平在正常宮頸組織中高于CIN，在CIN中高于宮頸癌，與文獻報道較一致[7]。研究結果提示Bax在正常組織中的高表達可以促進細胞凋亡，不致引起細胞異常增殖從而引發(fā)腫瘤的形成。而在腫瘤組織的表達下調，細胞增殖不能得到有效控制，細胞凋亡減少，異常細胞惡性轉化，致使腫瘤的發(fā)生。

同時，本研究發(fā)現Survivin的表達與Bax存在負相關性，提示二者在抗凋亡作用增強、促凋亡作用下降兩方面協同發(fā)揮作用，目前二者的相互作用機制尚不清楚。有研究表明，Survivin能抑制由Fas/Caspase -8和Bax /細胞色素C誘導的Caspase活化和凋亡[8]，但二者作用于何種序列、如何抑制Caspase級聯反應從而協調轉錄引發(fā)宮頸癌變尚有待于進一步研究。

[1]Borbely AA,Murvai M,Szarka K,et al.Survivin promoter polymorphism and cervical carcinogenesis[J].J Clin Pathol,2007,60(3):303-306.

[2]Kepp O,Rajalingam K,Kimmig S,et al.Bak and Bax are nonredundant during infection and DNA damage-induced apoptosis[J].EMBO J,2007,26(3):825-834.

[3]Ambroxini G,Adida C,Altieti DC,et al.A novel anti-apoptosis gene,surviving,expressed in cancer and lymphoma[J].Nat Med,1997,3(8):917-921.

[4]Shin S,Sung BJ,Cho YS,et al.An anti-apoptotic protein human surviving is a direct inhibitor of caspase-3 and -7 [J].Biochemistry,2001,40(4):1117-1123.

[5]李婷,劉鳳英,徐曉明等.Survivin與高危型人乳頭瘤病毒在宮頸癌及癌前病變中的表達和意義[J].實用婦產科雜志,2005,21(2):106-109.

[6]Kim HS,Shiraki K,Park SH.Expression of surivin in CIN and invasive squamous cell carcinoma of uterine cervix[J].Anticancer Res,2002,22(2A):805.

[7]王曉琴,戴穹,楊志惠.bcl-2、Ki-67和bax蛋白在宮頸上皮內瘤變和宮頸癌中的表達及臨床意義[J].中國醫(yī)療前沿,2008,3(2):27-28.

[8]薛軍.凋亡蛋白抑制因子家族成員(IAPs)之一survivin的研究進展[J].國外醫(yī)學內科學分冊,2003,30(1):28.

Expression and Clinical Significance of Surviving and Bax in Cervical Intraepithelial Neoplasia and Cervical Carcinoma

ZHANG Wei-jian, CHE Xiao-qun, ZHONG Qian, LIAN Xiao-qin
(Department of Gynecology, Jiangmen Central Hospital, Jiangmen 529030, China)

ObjectiveTo investigate the expression of surviving and Bax in cervical intraepithelial neoplasia and cervical carcinoma, and to explore the role of them in cervical carcinoma pathogenesis.MethodsThe exprssion of Survivin and Bax was detected with immunohistochemical method in situ in CIN and cervical carcinoma. Normal cervical tissues were acted as the control.ResultsThe positive rates of Survivin protein in cervical carcinoma, CIN and the normal cervical tissues were 76.1%, 45.8% and 0%,respectively. While the expression of Bax were 7%, 39.8% and 75.0% in the above three groups(P＜0.05). The expression of Survivin in CIN Ⅲ was obviously more signifi cant than those in CIN Ⅰ/Ⅱ. And the differences were obviously more signifi cant in cervical carcinoma at stage Ⅱb-Ⅲ than those at stage Ⅰ～Ⅱa. The expression of Survivin in cervical carcinoma with lymphatic metastasisi was more signifi cant difference than those with lymphatic metastasis. Negative correlation between Survivin and Bax protein was observed in cervical carcinoma.ConclusionThe abnormal expression of Survivin and bax may participate in the occurrence and development of cervica carcinoma, and suggest malignant degree of tumor and patients' poor prognosis.

Survivin; Bax; Cervical carcinoma; CIN

R737.33

B

1671-8194（2011）03-0011-02