王艷杰，越 皓，2，王淑敏*，李 慧，2，劉淑瑩，2

（1.長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春 130117；2.吉林省人參科學(xué)研究院，吉林 長春 130117）

高分離度快速液相色譜法檢測人參皂苷的研究

王艷杰1，越 皓1，2，王淑敏1*，李 慧1，2，劉淑瑩1，2

（1.長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春 130117；2.吉林省人參科學(xué)研究院，吉林 長春 130117）

目的建立高分離度快速液相色譜（RRLC）法定量檢測人參中的主要成分人參皂苷，并應(yīng)用于人參根、人參花及人參花不同部位中主要人參皂苷成分的含量測定。方法采用反向色譜柱進(jìn)行梯度洗脫。結(jié)果人參根、人參花及人參花不同部位人參皂苷Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd在15 min內(nèi)得到完全分離，并且測得人參花中皂苷含量約是人參根中皂苷含量10倍，人參花不同部位皂苷含量為花蕾＞花托＞花柄。結(jié)論本方法具有快速、準(zhǔn)確、分離效果好、高靈敏度、節(jié)約溶劑、可操作性強、重現(xiàn)性好的優(yōu)點，比傳統(tǒng)HPLC法更為方便快捷，能更有效的控制藥材質(zhì)量。

高分離度快速液相色譜（RRLC）；人參花花蕾；人參花花托；人參花花柄；人參皂苷

人參為五加科植物人參（Panax ginseng C.A.Mey.）的干燥根。具有抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、大補元氣、補脾益肺等功用［1-5］。人參花為人參的干燥花蕾，被歐洲譽為“綠色黃金”，我國學(xué)者對人參花的研究遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于人參［6-7］。高分離度快速液相色譜（RRLC）是一種新興的液相色譜技術(shù)，具有高分離度和快速分離的特點。本實驗建立了定量分析人參皂苷的RRLC方法，并對人參根、人參花及人參花不同部位中人參皂苷 Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd 含量進(jìn)行了比較，報道如下。

1 儀器與材料

Agilent 1200高分離度快速液相色譜儀；ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 × 50 mm，1.8 μm）色譜柱；G1312B Bin Pump SL型二元泵；G1316B TCL SL型檢測器；Chem-Station化學(xué)工作站。

乙腈：色譜純，加拿大Promptar試劑公司。甲醇：色譜純，美國TEDIA試劑公司。水為雙重蒸餾水。人參皂苷 Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd 均購自吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院。人參根、人參花均購自吉林省撫松縣。

2 溶液制備

2.1 供試品溶液

2.1.1 人參根樣品制備 取人參根粉末（過4號篩）2.0 g，精密稱定，加入40 mL 70%乙醇回流提取2次，每次1.5 h，合并兩次濾液，減壓回收乙醇，加入40 mL水溶解，加入40 mL乙醚，萃取3次，棄去乙醚層，合并水層，加入120 mL水飽和正丁醇萃取3次，合并水飽和正丁醇層，減壓回收水飽和正丁醇。浸膏加入甲醇，配成 1.2 g／mL的溶液，搖勻后過 0.45μm 微孔濾膜，即得。

2.1.2 人參花、人參花花蕾、人參花花托、人參花花柄樣品制備 將人參花分成3部分，即人參花花蕾、人參花花托、人參花花柄，分別將其于60℃干燥1 h，碾碎，過60目篩，稱取1.5 g，按1∶15的固液比加入乙醚脫脂兩次，待其乙醚氣味消失，再于60℃干燥1 h，按照1∶20的固液比加入30 mL 50%乙醇，回流提取2次，每次1.5 h，合并兩次濾液，減壓回收乙醇，得到人參皂苷浸膏粗品，加30 mL水溶解，加入水飽和正丁醇萃取3次，每次30 mL，合并正丁醇層，減壓回收正丁醇，得到人參皂苷浸膏。用甲醇溶解，配成0.18 g／mL的溶液，搖勻后過 0.45μm微孔濾膜，即得。2.2 對照品溶液 分別精密稱取對照品人參皂苷Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd 適量，加入甲醇制成每 1 mL分別含 0.118 ～ 15.8，0.016 ～ 12.4，0.024 ～ 34.8，0.07～35.0，0.035 ～ 33.3，0.036 ～ 67.9μg的溶液，作為對照品溶液。

3 色譜條件

ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 × 50 mm，1.8μm）；流動相：乙腈（B）-水（A），梯度洗脫（0 min，20%B；0 ～15 min，20% ～ 35%B；15 ～ 17 min，35%B）；流速：1.0 mL／min；檢測波長：203 nm；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量 10μL。

3.1 人參標(biāo)準(zhǔn)品色譜結(jié)果 見圖1。

圖1 對照品RRLC色譜圖

3.2 各樣品色譜結(jié)果 見圖2。

圖2 樣品RRLC色譜圖

4 方法學(xué)考察

4.1 線性關(guān)系的考察 精密吸取對照品溶液注入液相色譜儀，以峰面積積分值 Y為縱坐標(biāo)，以對照品進(jìn)樣量 X（μg）為橫坐標(biāo)作圖，得人參皂苷Re、人參皂苷Rf、人參皂苷 Rb1、人參皂苷 Rc、人參皂苷 Rb2、人參皂苷Rd的回歸方程，見表1。

表1 6種人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

人參皂苷 Re進(jìn)樣量在 0.118～ 15.8μg，人參皂苷 Rf進(jìn)樣量在0.016～12.4μg、人參皂苷 Rb1進(jìn)樣量在0.024 ～ 34.8μg、人參皂苷 Rc 進(jìn)樣量在 0.07 ～35.0μg、人參皂苷 Rb2 進(jìn)樣量在 0.035 ～ 33.3μg、人參皂苷Rd進(jìn)樣量在0.036～67.9μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

4.2 精密度實驗 分別吸取對照品溶液10μL連續(xù)進(jìn)樣 5次，測定峰面積。人參皂苷 Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd 峰面積的 RSD 分別為 0.13%、0.059%、0.98%、0.65%、0.075%、0.54%，精密度良好。

4.3 重復(fù)性試驗 按供試品溶液制備方法處理樣品7份，測得人參根、人參花、人參花花蕾、人參花花托、人參花花柄中人參皂苷 Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd的 RSD 分別為 0.27% ～ 2.46%、2.86% ～ 4.49%、1.50% ～ 4.70%、0.64% ～ 4.35%、0.97% ～ 4.92%、1.26% ～4.61%，重現(xiàn)性良好。

4.4 加樣回收率實驗 取上述已測知含量的樣品各6份，每份0.5 g，精密稱定，分別按相當(dāng)于藥材中人參皂苷 Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd 100%的量加入混合對照品溶液，按“供試品溶液制備”方法進(jìn)行處理并測定，求得回收率平均值為 98.5% ～100.08%、98.9% ～ 99.6%、98.3% ～ 99.2%、98.5% ～100.03%、98.3% ～ 99.8%、98.9% ～ 99.8%。測得人參皂苷 Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd 的 RSD 為 3.86% ～4.98%、4.28% ～ 4.86%、4.67% ～ 4.89%、4.15% ～4.72%、4.25% ～ 4.62%、4.38% ～ 4.95%。

5 樣品測定

分別取按 2.1.1、2.1.2 項下制備的供試品溶液10μL注入液相色譜儀，測得的人參皂苷 Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd 的平均百分含量，見表 2。

表2 樣品含量測定結(jié)果%

6 討論

本研究用RRLC法定量分析了人參根、人參花及人參花不同部位中人參皂苷 Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd，在較短的時間內(nèi)6種人參皂苷達(dá)到完全分離，分離度大于1.8。同時該方法還具有高靈敏度、節(jié)約溶劑、可操作性強、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好的優(yōu)點，是一種可替代傳統(tǒng)方法更有效的控制藥材質(zhì)量的方法。

本研究通過對人參根、人參花及人參花不同部位中人參皂苷 Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd 含量比較，發(fā)現(xiàn)人參花中皂苷含量約是人參根中皂苷含量10倍，并且人參花不同部位皂苷含量差異較大，即花蕾＞花托＞花柄。人參一般在4年后起收，每年成產(chǎn)的人參花除極少量加工成人參花茶外，大部分被丟棄。本文通過對人參根、人參花及人參花不同部位中人參皂苷Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd 含量比較，用科學(xué)數(shù)據(jù)證明了人參花的重要性。筆者認(rèn)為，深入進(jìn)行人參花的研究與開發(fā)，對充分利用人參資源，提升人參的附加值，保護(hù)環(huán)境等方面具有重要的意義。

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R284.2

A

1007－4813（2010）06－0824－03

吉林省科技發(fā)展計劃項目（20090182）；吉林省重大科技攻關(guān)項目（20096043）

王艷杰（1983－），女，碩士研究生。研究方向：中藥化學(xué)。

*通信作者：王淑敏，教授，Tel：0431-86045467，F(xiàn)ax：0431-86172409，E-mail：minshuw＠sina.com。

2010－ 09－14）