馮永淼 閆素梅 楊鵬飛 張海琴

脂溶性維生素對(duì)家禽有重要的營(yíng)養(yǎng)作用，在其細(xì)胞和體液免疫過(guò)程中也起著重要作用。維生素A是機(jī)體必需的維生素之一，還具有增加機(jī)體免疫力的作用。有研究報(bào)道不同劑量維生素A對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)影響（王利華，2009），維生素A、E交互對(duì)肉雞免疫機(jī)能影響（陳艷君等，2008）；有研究表明，維生素A與D在動(dòng)物體內(nèi)存在相互作用，肉雞對(duì)它們的需要量不僅要考慮各自添加水平，還需考慮二者之間的相互比例。有報(bào)道稱(chēng)維生素A過(guò)量添加可能會(huì)影響維生素D及其他營(yíng)養(yǎng)素的吸收代謝，導(dǎo)致肉雞體內(nèi)代謝異常，但對(duì)于機(jī)體免疫機(jī)能的影響不清楚。本研究以免疫機(jī)能為指標(biāo)，系統(tǒng)研究日糧維生素A、D水平對(duì)肉雞免疫機(jī)能影響及其相互作用，為合理確定維生素A、D的最適添加量及其比例提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

VA（500 000 IU/g）、VD3（500 000 IU/g）由上海羅氏提供。肉雞苗由北京華都雞場(chǎng)提供。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)選擇8日齡健康A(chǔ)A雄性肉雞384只，隨機(jī)分成16個(gè)處理組，每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8只雞。各組雞的初始體重經(jīng)方差檢驗(yàn)差異不顯著（P＞0.05）。

1.3 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

試驗(yàn)以玉米和大豆粕為主要原料，按照肉雞生長(zhǎng)發(fā)育階段配制基礎(chǔ)日糧，分2～3周齡和4周齡兩階段飼養(yǎng)，基礎(chǔ)日糧除日糧VA、VD按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)添加外，其它營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)均滿(mǎn)足需求，其配方和營(yíng)養(yǎng)水平詳見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采用4×4完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，在基礎(chǔ)日糧中分別添加不同劑量的VA、VD構(gòu)成試驗(yàn)日糧。VA、VD分別設(shè)4個(gè)添加水平，VA為1 500、3 000、15 000和 45 000 IU/kg日糧；VD 為 500、1 250、2 500和5 000 IU/kg日糧。

1.5 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)雞采用涂塑肉雞籠單層籠養(yǎng)，雞籠均采用紅外線(xiàn)加熱裝置自動(dòng)控溫，試驗(yàn)期內(nèi)保持24 h/d恒定光照和機(jī)械通風(fēng)。

1.6 測(cè)試項(xiàng)目

1.6.1 免疫器官指數(shù)

28日齡時(shí)，每重復(fù)組隨機(jī)抽取2只雞（每處理組共6只）稱(chēng)重后屠宰，取胸腺、法氏囊、脾臟稱(chēng)重，測(cè)定免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)(g/kg)＝免疫器官重/體重

1.6.2 新城疫抗體滴度（HI）

試驗(yàn)肉雞8日齡用新城疫Ⅳ系苗滴鼻點(diǎn)眼接種，同時(shí)皮下注射新城疫油苗加強(qiáng)接種。28日齡時(shí)，每重復(fù)組隨機(jī)抽取2只進(jìn)行采血，制備血清，采用微量血球血凝抑制試驗(yàn)法測(cè)定血清新城疫（ND）抗體滴度。

1.6.3 CD4+(輔助性T細(xì)胞TH)、CD8+(抑制性 T細(xì)胞TS)及 CD4+/CD8+比值

28日齡時(shí)，每重復(fù)組隨機(jī)抽取2只，進(jìn)行CD4+、CD8+及 CD4+/CD8+比值測(cè)定。

1.6.4 單核-巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)

28日齡采用碳廓清試驗(yàn)方法（林清華，1999）進(jìn)行測(cè)定。按如下公式計(jì)算碳廓清指數(shù)K值和吞噬指數(shù)a值。

碳廓清指數(shù) k＝（lgOD10-lgOD2）/8

OD2：2 min 測(cè)得光密度值；OD10：10 min 測(cè)得光密度值。

吞噬指數(shù)a＝體重/（肝重+脾重）×k1/3

1.7 試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)利用SAS統(tǒng)計(jì)程序分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 VA、VD及其交互作用對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響

表2列出不同處理組肉雞的免疫器官指數(shù)結(jié)果。結(jié)果表明：日糧VA、VD的添加劑量及其交互作用對(duì)肉雞的脾臟指數(shù)均無(wú)明顯影響（P＝0.51，P＝0.51，P＝0.45）；對(duì)胸腺指數(shù)也無(wú)顯著影響（P＝0.25，P＝0.61，P＝0.89）。

日糧VA的添加劑量對(duì)肉雞法氏囊指數(shù)有明顯的影響趨勢(shì)（P＝0.08），其中，1500、3000與15000IU/kgVA組法氏囊指數(shù)間無(wú)明顯差異，但以15 000 IU/kgVA組最大，顯著高于45 000 IU/kgVA組。日糧VD的添加劑量對(duì)肉雞法氏囊指數(shù)無(wú)明顯的影響（P＝0.48），但VD水平增加至2 500 IU/kg時(shí)法氏囊指數(shù)較高，增加至5 000 IU/kgVD時(shí)略有降低。說(shuō)明日糧VA水平增加至15 000 IU/kg時(shí)，可進(jìn)一步刺激肉雞的免疫器官發(fā)育，但45 000 IU/kg的高劑量VA組不利于免疫器官的發(fā)育；日糧VD水平增加至1 250、2 500 IU/kg時(shí)，可刺激肉雞的免疫器官發(fā)育，而5 000 IU/kg的高劑量VD組有抑制免疫器官發(fā)育的可能。

日糧VA與VD的交互作用對(duì)肉雞法氏囊指數(shù)有明顯的影響趨勢(shì)(P＝0.11)。當(dāng)日糧VA水平較低，在1 500 IU/kg 時(shí)，添加低、中劑量 VD（500～2 500 IU/kg）法氏囊指數(shù)較高，尤其VD為1 250 IU/kg時(shí)最高，而日糧VD水平增加至5 000 IU/kg時(shí)，法氏囊指數(shù)反而下降，提示高劑量的VD對(duì)VA有一定拮抗作用。當(dāng)日糧添加高劑量的VD（5 000 IU/kg）時(shí)，添加不同劑量VA，其法氏囊指數(shù)與VA水平有關(guān)，低劑量VA（1 500 IU/kg）組法氏囊指數(shù)低于添加中劑量VA處理組，提示高劑量VD引起的法氏囊指數(shù)下降通過(guò)適當(dāng)增加VA水平得以緩減；但VA水平過(guò)高時(shí)（45 000 IU/kg），法氏囊指數(shù)顯著降低，說(shuō)明VA水平增加過(guò)高時(shí)，緩減效果下降。當(dāng)日糧添加高劑量的VA時(shí)，添加不同劑量VD，其法氏囊指數(shù)與VD水平有關(guān)，低劑量VD（500 IU/kg）組法氏囊指數(shù)低于添加中劑量VD組，但高劑量VD（5 000 IU/kg）時(shí)，法氏囊指數(shù)顯著降低。提示高劑量VA對(duì)法氏囊指數(shù)的降低作用通過(guò)適當(dāng)增加VD水平得以緩減，但VD水平過(guò)高時(shí)，緩減效果下降。這些結(jié)果提示，VA對(duì)VD間存在的互作效應(yīng)主要體現(xiàn)在VA、VD水平添加過(guò)高的情況下，即高劑量VA對(duì)VD的拮抗作用，和高劑量VD對(duì)VA的拮抗作用。

2.2 VA、VD及其交互作用對(duì)肉雞新城疫抗體滴度的影響

日糧VA水平對(duì)肉雞新城疫抗體滴度的影響不顯著（P＝0.22），隨日糧VA水平增加，新城疫抗體滴度先呈現(xiàn)增加的趨勢(shì)，之后又減小。日糧VD水平變化及其與VA的相互作用對(duì)新城疫抗體滴度的影響不顯著（P＝0.91，P＝0.93）。

2.3 VA、VD 及其交互作用對(duì)肉雞吞噬指數(shù)的影響

不同VA組的吞噬指數(shù)差異趨于顯著(P=0.12)。日糧VA水平為1 500、3 000、15 000 IU/kg時(shí)，肉雞的吞噬指數(shù)均較高，尤以15 000 IU/kg時(shí)最高；日糧VA水平增加至45 000 IU/kg時(shí)，吞噬指數(shù)有明顯的降低趨勢(shì)。日糧VD水平對(duì)肉雞吞噬功能無(wú)顯著影響（P=0.31），但其變化規(guī)律與VA影響相似，日糧VD水平增加至5 000 IU/kg時(shí)，吞噬指數(shù)呈下降的趨勢(shì)。日糧VA、VD的交互作用對(duì)肉仔雞吞噬指數(shù)無(wú)顯著影響（P=0.69）。

2.4 VA、VD及其交互作用對(duì)肉雞外周血T細(xì)胞亞群CD4＋、CD8＋比例影響

不同劑量VA對(duì)CD4＋亞群比例影響差異趨于顯著（P=0.13），日糧 VA 水平為 1 500、1 5000、45 000 IU/kg時(shí)，CD4＋比例均較高，其中45 000 IU/kg時(shí)最高，有明顯高于3 000 IU/kgVA組的趨勢(shì)。不同劑量VD對(duì)CD4＋亞群比例影響組間差異也趨于顯著（P=0.09），日糧VD水平為2 500 IU/kg時(shí)，CD4＋亞群比例明顯高于500 IU/kgVD組，而與1 250、5 000 IU/kg處理組間無(wú)明顯差異。日糧VA、VD的交互作用對(duì)肉仔雞CD4＋亞群比例無(wú)顯著影響（P=0.42）。

不同劑量VA、VD對(duì)肉雞外周血CD8＋亞群比例沒(méi)有顯著影響（P=0.90，P=0.43），但VD水平為5 000 IU/kg時(shí)，CD8＋亞群比例有增加的趨勢(shì)。日糧VA、VD交互作用對(duì)肉仔雞CD8＋亞群比例有明顯的影響趨勢(shì)（P=0.12）。當(dāng)VA水平較低（1 500 IU/kg）時(shí)，低劑量VD（500～1 250 IU/kg）CD8＋亞群比例較低；而VD水平增加至 2 500、5 000 IU/kg 時(shí)，CD8＋亞群比例增加，且VD水平為5 000 IU/kg時(shí)最高。提示在對(duì)CD8＋亞群比例的影響方面，高劑量的VD對(duì)VA有一定拮抗作用。高劑量 VD（5 000 IU/kg）時(shí)，添加低劑量 VA，其 CD8＋亞群比例較高，而高劑量 VA（45 000 IU/kg）使 CD8＋亞群比例降低。提示在對(duì)CD8＋的影響方面，高劑量VD對(duì)VA的拮抗作用通過(guò)增加VA水平得以緩減。VA與VD間存在的互作效應(yīng)對(duì)CD8＋亞群比例的影響主要體現(xiàn)在VA、VD添加量過(guò)高的情況下，即高劑量VA對(duì)VD的拮抗作用和高劑量VD對(duì)VA的拮抗作用。

不同劑量VA及VD，對(duì)肉雞外周血淋巴細(xì)胞亞群 CD4＋/CD8＋比值沒(méi)有顯著的影響（P=0.77，P=0.48）。日糧VA、VD的交互作用對(duì)肉仔雞CD4＋/CD8＋比值有顯著的影響（P=0.02）。由試驗(yàn)結(jié)果看出，日糧VA水平為1 500 IU/kg，VD水平為1 250 IU/kg時(shí)，二者比值最高，但VD水平增加至5 000 IU/kg時(shí)降到最低，說(shuō)明在對(duì)CD4＋/CD8＋比值的影響方面高劑量VD對(duì)VA存在一定拮抗。

3 討論

VA作為機(jī)體重要的營(yíng)養(yǎng)素之一，在機(jī)體免疫反應(yīng)中起到免疫調(diào)節(jié)作用，能提高雞的免疫力。VD在動(dòng)物體內(nèi)主要是通過(guò)1，25-(OH)2D3發(fā)揮其生理功能，對(duì)機(jī)體的免疫機(jī)能起重要作用。關(guān)于日糧VA、VD水平與肉雞免疫器官發(fā)育的影響研究報(bào)道較少，尤其關(guān)于高劑量的添加效應(yīng)及二者的互作效應(yīng)研究則更少。本試驗(yàn)結(jié)果得出，日糧VA水平在1 500～15 000 IU/kg范圍內(nèi)增加時(shí)，肉雞法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)呈增加的趨勢(shì)，以15 000 IU/kg時(shí)較高，但日糧VA水平進(jìn)一步增加至45 000 IU/kg時(shí)，二者又呈明顯的降低趨勢(shì)。日糧VD的添加劑量在500～2 500 IU/kg范圍內(nèi)時(shí)，肉雞的脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)較高，但VD水平增加至5 000 IU/kg時(shí)，二者呈降低的趨勢(shì)。日糧VA與VD水平對(duì)肉雞免疫器官法氏囊和胸腺發(fā)育的影響存在一定互作效應(yīng)，主要表現(xiàn)在高劑量VA對(duì)VD的拮抗作用和高劑量VD對(duì)VA的拮抗作用。

高士爭(zhēng)（1999）得出，日糧添加VA，肉雞血清抗體滴度和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化兩項(xiàng)指標(biāo)明顯高于不添加VA組，而且抗體滴度和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化在22 000 IU/kgVA水平時(shí)達(dá)到最大，在添加量為44 000 IU/kg時(shí)，抗體滴度和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化開(kāi)始下降。說(shuō)明高水平VA，可顯著提高肉雞的體液免疫和細(xì)胞免疫功能，獲得最大的免疫反應(yīng)，但過(guò)高劑量的增加反而降低了免疫機(jī)能。本試驗(yàn)結(jié)果得出，15 000 IU/kgVA組的新城疫抗體滴度及吞噬指數(shù)最高，45 000 IU/kgVA組吞噬指數(shù)最低，新城疫抗體滴度也較低，低劑量VA（1500 IU/kg）組的新城疫抗體滴度水平最低。日糧VD水平變化及其與VA的相互作用對(duì)新城疫抗體滴度和吞噬指數(shù)無(wú)明顯影響。說(shuō)明提高日糧VA水平至15 000 IU/kg可促進(jìn)肉雞的體液免疫與非特異性免疫機(jī)能，而低劑量的VA（1 500 IU/kg），使體液免疫功能趨于下降，高劑量的VA（45 000 IU/kg）使體液免疫與非特異性免疫功能下降。

CD4＋/CD8＋變化常用作衡量免疫系統(tǒng)激活強(qiáng)弱的參數(shù)，其比例高表明機(jī)體免疫系統(tǒng)處于較強(qiáng)的激活狀態(tài)，反之則表明免疫系統(tǒng)處于正?；蜉^弱狀態(tài)，比例過(guò)高或過(guò)低都暗示免疫系統(tǒng)功能紊亂。本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧VA水平在1 500～45 000 IU/kg、VD在 500～5 000 IU/kg范圍內(nèi)增加，CD4+亞群比例存在不同程度的差異，CD8＋亞群比例無(wú)明顯變化。 CD4＋/CD8＋比值雖然也無(wú)顯著變化，但高劑量VA（45 000 IU/kg）組最高，高劑量VD（5 000 IU/kg）組最低。日糧VA、VD的交互作用對(duì)肉雞CD8＋亞群比例有明顯的影響趨勢(shì)（P=0.12），對(duì) CD4＋/CD8＋比值有顯著的影響（P=0.02）。說(shuō)明日糧VA、VD對(duì)肉雞細(xì)胞免疫的影響存在一定互作效應(yīng)，而且主要體現(xiàn)在高劑量VA對(duì)VD的拮抗作用和高劑量VD對(duì)VA的拮抗作用，但詳細(xì)的結(jié)果及影響機(jī)理還有待于進(jìn)一步探討。

（參考文獻(xiàn)若干篇，刊略，需者可函索）