祝志勇, 繆宇明, 胡仲義

(1.寧波城市職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江 寧波 315502；2.寧波綠城園林工程有限公司,浙江 寧波 315000)

優(yōu)良地被植物斑葉石蕗的組培生根誘導(dǎo)*

祝志勇1, 繆宇明2, 胡仲義1

(1.寧波城市職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江 寧波 315502；2.寧波綠城園林工程有限公司,浙江 寧波 315000)

以斑葉石蕗Farfugiumjaponicacv.aureo-maculatum的葉片為外植體，采用6-芐基嘌呤(6-BA)與萘乙酸(NAA)雙因素二次正交螺旋組合設(shè)計，對組織培養(yǎng)過程中根的誘導(dǎo)進(jìn)行了2種植物外源激素(6-BA和NAA)不同配比的對比試驗(yàn).結(jié)果表明：在16個組合中，低質(zhì)量濃度的6-BA與NAA能促進(jìn)斑葉石蕗根的誘導(dǎo)和生長；接種20 d后外植體在1/2 MS+6-BA 0.02 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1培養(yǎng)基中的生根率和平均生根數(shù)分別達(dá)到88%和5.7，高于其他處理，且根系生長狀況良好.

斑葉石蕗；生根誘導(dǎo)；外植體；二次正交螺旋組合

斑葉石蕗Farfugiumjaponicacv.aureo-maculatum，菊科Compositae大吳風(fēng)草屬Farfugium多年生草本植物，耐陰，耐寒，對環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng)，在粉沙土或紅壤土中生長良好，少病蟲害，根系發(fā)達(dá)，葉柄粗壯，葉呈心形，邊緣有凸?fàn)罴?xì)齒，葉面富有光澤，葉色翠綠，間帶嫩黃色斑點(diǎn)，在江浙地區(qū)四季常綠，是優(yōu)良的庭園種植和背陰高架公路下綠化的材料，具有廣闊的市場前景.斑葉石蕗植株根部含有千里光酸(二甲基丙烯酸)，主治咳嗽、咯血、便血、跌打損傷、乳腺炎，具有一定的藥用價值[1-4].斑葉石蕗采用種子繁殖會使金黃色斑點(diǎn)消褪而失去原有的觀賞價值，目前主要的繁殖方法是分株，但較難滿足市場的巨大需求.本文在已有研究獲得組培芽誘導(dǎo)和增殖相關(guān)技術(shù)的基礎(chǔ)上進(jìn)行斑葉石蕗的生根誘導(dǎo)，為其產(chǎn)業(yè)化發(fā)展進(jìn)行一些探索.

1 材料與方法

1.1材料與取樣

選用2008年8月從寧波綠城園林工程公司獲得的大小較為均一的2年生盆栽斑葉石蕗為材料，以其幼嫩葉片為外植體，于2009年3月22日開始實(shí)驗(yàn).

1.2外植體滅菌

將斑葉石蕗幼嫩葉片從植株上剪下，用洗潔精浸泡15 min，后用流水沖洗4～5次；分裝好后移至超凈工作臺，以1 g/L的二氯化汞溶液為滅菌試劑，滅菌處理10 min，再用無菌水處理4次.

1.3外植體培養(yǎng)

[5-7]對菊科植物組織培養(yǎng)成果的基礎(chǔ)上，結(jié)合實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，將外植體剪成1.0 cm×1.0 cm后接入MS+6-呋喃甲基腺嘌呤(KT) 0.5 mg·L-1+萘乙酸(NAA) 1.0 mg·L-1培養(yǎng)基中誘導(dǎo)芽，待不定芽萌發(fā)至1.5 cm后轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，每20 d可以繼代一次(增殖系數(shù)達(dá)7.8)，連續(xù)繼代3次轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中.

生根的基本培養(yǎng)基是1/2 MS.在預(yù)備試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，結(jié)合各生長調(diào)節(jié)劑在植物組織培養(yǎng)中的應(yīng)用研究[8]，采用6-芐氨基嘌呤(6-BA,X1)和萘乙酸(NAA,X2)雙因素二次正交螺旋組合設(shè)計，各因子設(shè)置5個水平，共計16個處理(見表1)，每個處理30瓶，重復(fù)3次.從不定芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基起，每隔5 d觀察植株的生長和生根狀況，至30 d統(tǒng)計每個處理的平均出根率、平均根數(shù)和平均根長.采用DPS系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析.

表1 不同外源激素配比對生根誘導(dǎo)的影響

培養(yǎng)條件：(1)不同外源激素配比試驗(yàn)在室溫(23±2) ℃，光照強(qiáng)度2 000 lx，光照時間12 h·d-1條件下進(jìn)行.(2)光照強(qiáng)度梯度試驗(yàn)以1/2 MS+6-BA 0.02 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1為培養(yǎng)基，室溫(23±2) ℃，光照強(qiáng)度分別為1 000，1 500，3 000，5 000 lx.(3)環(huán)境溫度梯度試驗(yàn)以1/2 MS+6-BA 0.02 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1為培養(yǎng)基，室溫分別為16，19，22，25，28 ℃，光照強(qiáng)度為2 000 lx.

2 結(jié)果與分析

2.1不同外源激素配比對斑葉石蕗生根的影響

本實(shí)驗(yàn)中，斑葉石蕗的生根過程主要集中在接種后20～30 d.從表1可見:斑葉石蕗在含較低質(zhì)量濃度的6-BA和NAA的培養(yǎng)基中比高質(zhì)量濃度的6-BA和NAA的培養(yǎng)基中生根數(shù)多,且根系較長.在本實(shí)驗(yàn)的16個組合中，A1組合培養(yǎng)基為1/2 MS+6-BA 0.10 mg·L-1+NAA 0.22 mg·L-1，平均出根率為0.44，平均出根數(shù)為3.619，平均根長為0.7 cm；而A4組合的激素配比為1/2 MS+6-BA 0.02 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1，平均出根率為0.88，平均出根數(shù)為4.360，平均根長為5.7 cm，均高于其他處理，且根系生長良好.

在雙因素二次正交螺旋組合設(shè)計的結(jié)構(gòu)矩陣中，以X1,X2為決策變量，斑葉石蕗的出根率和生根數(shù)為目標(biāo)函數(shù)，在α=0.10的顯著水平，剔除不顯著項(xiàng),簡化后的回歸方程為

Y=0.627 41+4.468 13X2-25.522 61X22.

方差分析見表2.

表2 不同外源激素配比下斑葉石蕗生根率的方差分析結(jié)果

2.2不同光照強(qiáng)度和環(huán)境溫度對斑葉石蕗生根的影響

實(shí)驗(yàn)表明：黑暗條件對斑葉石蕗葉片的生長存在抑制作用，且植株生長矮??；當(dāng)光照強(qiáng)度為1 500～3 000 lx時，植株生長狀況良好，且葉片較大，黃斑明顯；當(dāng)光照強(qiáng)度增加到5 000 lx時，植株生長較慢，葉片上黃斑數(shù)量減少且顏色變淡(見表3).

通過研究不同環(huán)境溫度下斑葉石蕗的生根情況,發(fā)現(xiàn):當(dāng)環(huán)境溫度為16 ℃時，植株生長緩慢，根系較?。划?dāng)環(huán)境溫度為22 ℃時，植株生長健壯，根系發(fā)達(dá)，葉片較大,色澤亮綠，且黃斑明顯；當(dāng)環(huán)境溫度為28 ℃時,斑葉石蕗植株根系較小，葉片小且黃綠色(見表4).

方差分析結(jié)果顯示:光照強(qiáng)度與斑葉石蕗生根率之間差異不顯著，P值為0.166 5;環(huán)境溫度與斑葉石蕗生根率之間差異極顯著，P值為0.000 0(見表5).

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)以斑葉石蕗葉片為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，成功誘導(dǎo)其根的形成，并且在16組生根培養(yǎng)基中獲得最適的生根培養(yǎng)基為1/2 MS+6-BA 0.02 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1.圖1和圖2為斑葉石蕗組培苗及其根系的照片.

表3 不同光照強(qiáng)度對斑葉石蕗生根率和生根數(shù)的影響

表4 不同環(huán)境溫度對斑葉石蕗生根率和生根數(shù)的影響

表5 光照梯度、溫度梯度對斑葉石蕗生根率影響的方差分析結(jié)果

通過光照強(qiáng)度梯度和環(huán)境溫度梯度試驗(yàn)，獲得斑葉石蕗生根誘導(dǎo)最適光照強(qiáng)度為1 500～3 000 lx，最適培養(yǎng)環(huán)境溫度為22～25 ℃.在此環(huán)境條件中得到的斑葉石蕗組培苗不但繁殖系數(shù)大，植株健壯，且保持了其原有的園林觀賞價值.

本實(shí)驗(yàn)考慮了生產(chǎn)和研究兩方面的需要，在設(shè)計上從2個方面進(jìn)行了創(chuàng)新探索:首先是外植體的選擇.相關(guān)文獻(xiàn)[7]中所采用的外植體多為菊科植物的花苞或者幼芽，這2種外植體受植物生長季節(jié)影響較大，而以葉片為外植體,不僅克服了季節(jié)限制,且不會受植株數(shù)量而產(chǎn)生較大的影響，因而,該方法可為斑葉石蕗相近科屬珍稀植物的組織培養(yǎng)研究提供一定的參考.其次，與此前學(xué)者的有關(guān)研究相比,增加了光強(qiáng)和溫度2個環(huán)境因子的梯度試驗(yàn)，為斑葉石蕗的規(guī)?；M培生產(chǎn)、煉苗提供了切實(shí)可行的環(huán)境調(diào)控依據(jù).

圖1 斑葉石蕗組培苗

圖2 斑葉石蕗組培苗根系

本研究中建立了數(shù)量可觀的斑葉石蕗組培苗,為下一步的品種改良研究提供了豐富的實(shí)驗(yàn)材料.作為同是植物生長環(huán)境指標(biāo)的培養(yǎng)基酸堿度梯度試驗(yàn),有待在下一階段進(jìn)行深入研究.

參考文獻(xiàn)：

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(責(zé)任編輯 薛 榮)

StudyonrootingoftissuecultureofFarfugiumjaponicacv.aureo-maculatum

ZHU Zhiyong1, MIAO Yuming2, HU Zhongyi1

(1.NingboCityCollegeofVocationalTechnology,NingboZhejiang315502,China; 2.NingboLüchengGardensConstructionandVirescenceProjectLtd.Corp.,NingboZhejiang315000,China)

WithFarfugiumjaponicacv.aureo-maculatumleaves as explants, using 6-benzyl-purine (6-BA) and naphthalene acetic acid (NAA) two-factor combination of the quadratic orthogonal spiral design, the process of root tissue culture induction was carried out for two kinds of extrogenous phytohormone (6-BA and NAA) in different compared proportions. Results showed that: in 16 combinations, low concentrations of 6-BA and NAA could promote the root induction and growth ofFarfugiumjaponicacv.aureo-maculatum; 20 days later, rooting rate and the average root number of explants in medium A4 (1/2 MS+6-BA 0.02 mg5L-1+NAA 0.05 mg5L-1) reached to 88% and 5.7, respectively, higher than the other treatments, and root growth in good condition.

Farfugiumjaponicacv.aureo-maculatum; rooting; explant; quadratic combination of orthogonal helical

1001-5051(2010)01-0095-05

2009-12-02

浙江省教育廳2008年度高?？蒲杏媱濏?xiàng)目(Y200803329)；寧波市科技局農(nóng)業(yè)與社會發(fā)展科技攻關(guān)項(xiàng)目(2009C10019)

祝志勇(1968-)，男，浙江淳安人，副教授，碩士.研究方向:植物資源.

S681

A