趙炳超,石 波,李秀波,李鵬飛,楊 娟

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所,北京 100081;2.中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所,北京 100081)

藤茶黃酮是存在于藤茶中的一類天然植物黃酮,其主要成分二氫楊梅素具有抗氧化[1-2]、抑菌殺菌[3-4]、消炎解毒[5-6]、增強(qiáng)免疫[4]等功效。作為抗生素、激素類等飼料藥物添加劑的替代品,藤茶黃酮可有效地避免上述飼料藥物添加劑在畜產(chǎn)品體內(nèi)的殘留問題,從而很好地改善畜產(chǎn)品品質(zhì),符合當(dāng)下發(fā)展無公害畜牧業(yè)、生產(chǎn)綠色畜產(chǎn)品的要求。目前關(guān)于藤茶黃酮的應(yīng)用文獻(xiàn)報(bào)道有一些,但關(guān)于其提取工藝的研究較少。本文主要對(duì)藤茶黃酮的提取工藝進(jìn)行了研究,提出了一條以乙醇水溶液為提取溶劑,經(jīng)過提取、濃縮、結(jié)晶、干燥等步驟,最終得到藤茶黃酮產(chǎn)品的工藝,對(duì)提取工藝中的關(guān)鍵因素時(shí)間、乙醇濃度以及料液比進(jìn)行了優(yōu)化。應(yīng)用該工藝得到的藤茶黃酮產(chǎn)品中有效成分二氫楊梅素的含量不低于 85%。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 供試藤茶為天津市思科福生物工程有限公司提供,樣品經(jīng)粉碎后,粒度在 60～80目之間。二氫楊梅素標(biāo)準(zhǔn)品：購自上海融禾醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司,純度為 98%;乙醇(95%,工業(yè)級(jí));石油醚(餾程為 60℃～90℃),化學(xué)純。含量測定所用試劑均為分析純。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 藤茶黃酮提取工藝流程 在提取容器內(nèi)按一定比例(W/V)加入藤茶粉和乙醇水溶液,一定時(shí)間內(nèi)回流提取 2次。2次提取所得濾液合并后,減壓濃縮至初始體積的 1/10,加入濃縮液體積 6倍的水煮開后,放冷結(jié)晶,過濾,再用等量的水結(jié)晶一次,過濾、干燥,得到藤茶黃酮產(chǎn)品。提取率計(jì)算公式如下：提取率 =[提取得到的藤茶黃酮(有效成分二氫楊梅素)重量(g)/提取消耗的藤茶粉重量(g)]×100%。

1.2.2 二氫楊梅素含量測定 采用 HPLC法測定樣品中的二氫楊梅素含量。測定條件：Inersil ODS-3色譜柱,5μm,4.6 mm×150 mm;流動(dòng)相為乙腈 ∶0.05%磷酸(V/V)=25 ∶75;流速 1 mL/min;檢測波長 294 nm。

1.2.3 藤茶原料中藤茶黃酮(有效成分二氫楊梅素)含量測定 為了測定所用藤茶原料中藤茶黃酮(有效成分二氫楊梅素)的原始含量,進(jìn)而評(píng)價(jià)

1.2.1 項(xiàng)給出的提取方法的提取效率,在 1.2.1項(xiàng)提取方法的基礎(chǔ)上,采用進(jìn)一步加大提取溶劑用量、增加提取次數(shù)的方法以盡可能地提取出藤茶原料中的藤茶黃酮物質(zhì)。藤茶黃酮極性大,易溶于乙醇,因此用石油醚先行回流脫脂,以除去大部分脂溶性物質(zhì),如此可利于藤茶黃酮的提取。具體操作方法如下：取 10 g藤茶粉加入石油醚 100mL,回流2 h后過濾,收集脫脂后的藤茶粉,用90%乙醇水溶液提取 3次(100 mL×3),過濾,3次所得濾液合并后,用 90%乙醇水溶液定容至 250m L,高壓液相色譜法檢測提取液中二氫楊梅素的含量。以上試驗(yàn)重復(fù) 3次,取平均值。

2 結(jié)果

2.1 藤茶原料中藤茶黃酮(有效成分二氫楊梅素)含量測定 3次提取液濃度檢測結(jié)果分別為 6.132×10-3、6.128 ×10-3、6.124×10-3g/m L,三次的均值為 6.128×10-3g/m L。藤茶原料中藤茶黃酮(有效成分二氫楊梅素)的含量為 6.128×10-3g/m L×250m L/10 g×100%=15.32%。

2.2 時(shí)間對(duì)提取率的影響 結(jié)果如表 1所示。

表1 提取時(shí)間對(duì)提取率的影響

表1給出了提取時(shí)間對(duì)藤茶黃酮提取率的影響結(jié)果。不難看出,時(shí)間達(dá)到 1 h前,提取率隨時(shí)間的延長不斷增加;1 h時(shí),提取率達(dá)到最高;之后時(shí)間再延長,提取率會(huì)緩慢下降。回流時(shí)間過長或許會(huì)導(dǎo)致藤茶黃酮部分分解,因此回流時(shí)間為 1 h比較適宜。

2.3 乙醇濃度對(duì)提取率的影響 結(jié)果如表 2所示。

表2 乙醇濃度對(duì)提取率的影響

提取溶劑中隨著乙醇濃度的升高,藤茶黃酮有效成分二氫楊梅素的提取率也不斷增加,產(chǎn)品的純度也相對(duì)較高,根據(jù)物質(zhì)的相似相容原理,這可能是二氫楊梅素在乙醇中溶解度較好導(dǎo)致。乙醇濃度較低時(shí),其他易溶于水的物質(zhì)也會(huì)更多地被提取出來,致使二氫楊梅素的提取率和純度較低。乙醇濃度達(dá)到 90%,提取率達(dá)到最高,之后再增加乙醇濃度,提取率也不再增加。

2.4 料液比對(duì)提取率的影響 結(jié)果如表 3所示。

表3 料液比對(duì)提取率的影響

藤茶粉原料與提取溶劑之間的料液比(W/V)對(duì)提取率也有明顯的影響。如果提取溶劑太少,則提取不充分,提取效果較差,相應(yīng)的提取率會(huì)較低。當(dāng)料液比達(dá)到 1∶4時(shí),提取效果即可達(dá)到最佳。之后再增加溶劑的用量,除了會(huì)降低提取過程的經(jīng)濟(jì)性外,還會(huì)使提取物中的雜質(zhì)增加,進(jìn)而使之后的分離提純工序也會(huì)更加繁瑣、困難。

3 討論

藤茶黃酮是藤茶中的主要活性物質(zhì),含量通常在 15%～20%的范圍內(nèi)。黃酮類物質(zhì)的提取主要有水提取和醇提取兩種方法,考慮到水提取方法得到的產(chǎn)品雜質(zhì)較多,后續(xù)純化復(fù)雜,本文選用了以乙醇為溶劑的提取方法。試驗(yàn)結(jié)果表明：在提取時(shí)間為 1 h、乙醇溶液濃度為 90%、料液比為 1∶4的條件下,回流提取 2次,藤茶黃酮產(chǎn)品的提取率最高,已接近于藤茶原料中藤茶黃酮的原始含量。結(jié)晶純化后產(chǎn)品中二氫楊梅素的含量可達(dá) 85%以上。

[1] 楊書珍,寧正祥,張友勝.油溶性二氫楊梅素對(duì)油脂的抗氧化作用[J].中國油脂,2003,28(1)：44-46.

[2] 鐘正賢,覃潔萍,陳學(xué)芬,等.雙氫楊梅樹皮素對(duì)鏈脲霉素所致糖尿病大鼠的降血糖作用[J].廣西科學(xué),2000,7(3)：203-205.

[3] 楊書珍,張友勝,寧正祥,等.二氫楊梅素對(duì)幾種食品常見菌的抑制效果[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2003,15(1)：40-42.

[4] 熊皓平,朱金桃,劉朝陽.顯齒蛇葡萄生化成分分析及抑菌作用研究[D].長沙：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué),2002.

[5] 周雪仙,曾湘華,李秋娥,等.江華瑤族防感藤茶的藥理研究[J].中國民族醫(yī)藥雜志,1996,2(4)：37-39.

[6] 鐘正賢,覃潔萍,周桂芬,等.廣西瑤族藤茶中雙氫楊梅樹皮素的藥理研究[J].中國民族醫(yī)藥雜志,1998,7(3)：42-44.