李 昉, 李曉明, 王斌貴

(1. 中國科學(xué)院 海洋研究所 實(shí)驗(yàn)海洋生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 山東 青島 266071; 2．中國科學(xué)院 研究生院, 北京 100039)

海洋紅樹林植物木欖化學(xué)成分研究

李 昉1,2, 李曉明1, 王斌貴1

(1. 中國科學(xué)院 海洋研究所 實(shí)驗(yàn)海洋生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 山東 青島 266071; 2．中國科學(xué)院 研究生院, 北京 100039)

采用多種柱層析方法從紅樹植物木欖(Bruguiera gymnorrhiza (L.) Lam.)中分離獲得9個(gè)單體成分,綜合運(yùn)用現(xiàn)代波譜技術(shù)鑒定了所有成分的化學(xué)結(jié)構(gòu), 分別為格欖酮(I)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(II)、黃芪苷(III)、蘆丁(IV)、3-O-甲基槲皮素(V)、羽扇豆醇(VI)、羽扇豆酮(VII)、蒲公英賽酮(VIII)和胡蘿卜苷(IX), 其中化合物II～V為首次從木欖屬植物中分離得到。

木欖Bruguiera gymnorrhiza (L.) Lam.; 紅樹科(Rhizophoraceae); 黃酮; 三萜

木欖 Bruguiera gymnorrhiza (L.) Lam.系紅樹科(Rhizophoraceae)木欖屬(Bruguiera Lam.)植物, 主要分布于非洲大陸、東南亞、美洲的加勒比等沿海地區(qū), 在中國主要分布于廣西、廣東、臺(tái)灣和福建[1]。木欖的果和葉具有治療腹瀉、瘧疾、高血壓、糖尿病和便秘的功效, 還具有抗癌作用[2]。在海南瓊山市民間還利用木欖胚軸來治療糖尿病[3]。研究表明木欖植物的花、果、葉、根、皮及木部等的化學(xué)成分主要為長鏈脂肪酸、二萜、三萜、甾醇、黃酮、二硫化合物以及鞣質(zhì)等[1]。本文報(bào)道從該種植物莖葉的氯仿/甲醇提取物中經(jīng)硅膠柱層析、凝膠Sephadex LH-20柱層析、反相硅膠柱層析、制備薄層層析以及重結(jié)晶等手段分離純化得到的9個(gè)化合物, 經(jīng)現(xiàn)代波譜技術(shù)分別鑒定為格欖酮(I)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(II)、黃芪苷(III)、蘆丁(IV)、3-O-甲基槲皮素(V)、羽扇豆醇(VI)、羽扇豆酮(VII)、蒲公英賽酮(VIII)和胡蘿卜苷(IX)。其中化合物II～V為首次從木欖屬植物中分離得到。

1 材料與方法

1.1 材料

木欖莖葉于2005年12月采集于海南島, 經(jīng)中國科學(xué)院昆明植物研究所彭華研究員鑒定為紅樹科木欖屬植物木欖(Bruguiera gymnorrhiza (L.) Lam.)。標(biāo)本現(xiàn)存放于中國科學(xué)院海洋研究所實(shí)驗(yàn)海洋生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

1.2 儀器與試劑

NMR用Bruker Avance 500 MHz核磁共振儀測定(TMS為內(nèi)標(biāo)); HPLC采用戴安(Dionex)高壓液相色譜儀系統(tǒng) [Dionex P680輸液泵、ASI-100自動(dòng)進(jìn)樣器、C18 柱(5 μm, 8.0 mm× 250 mm)、UVD340U二極管陣列檢測器]。分析、制備HPLC使用溶劑為色譜純有機(jī)溶劑; 柱色譜用硅膠和薄層層析硅膠板均為青島海洋化工廠生產(chǎn); 凝膠Sephadex LH-20為Amersham Pharmacia Biotech AB 公司生產(chǎn); 顯色劑為茴香醛-硫酸顯色劑。

1.3 提取與分離

木欖干燥莖、葉共計(jì)3.2 kg粉碎后用氯仿/甲醇(V/V)1 ： 1浸提3次, 每次浸提6 d, 合并提取液, 減壓濃縮得浸膏247 g。浸膏水分散后, 依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。分別得到石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相浸膏 94、80、25 g。正丁醇相經(jīng)過硅膠(200～300目)柱層析, 以氯仿-甲醇梯度洗脫,經(jīng)TLC檢測、合并相同組分, 得到4個(gè)組分。各組分經(jīng)進(jìn)一步硅膠柱層析、凝膠柱層析和反相柱層析分離純化, 得到化合物II(9.8 mg), 化合物III(5.4 mg),化合物IV(11.8 mg)和化合物V(4.1 mg)。石油醚相、乙酸乙酯相經(jīng)過硅膠柱層析, 以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫, 經(jīng) TLC檢測、合并相同組分。各組分經(jīng)反復(fù)柱色譜, 得到化合物 I(7.7 mg), 化合物 VI(66.0mg), 化合物VII(11.2 mg), 化合物VIII(10.3 mg)和化合物IX(138.6 mg), 化合物結(jié)構(gòu)見圖1。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 I： 黃色粉末(氯仿/甲醇); mp： 272～273℃;IR (KBr)νmaxcm-1： 3423, 1629, 1558, 1501, 1454,1345, 1267, 1204, 1168, 1111, 1060, 837;1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6)δ7.07 (1H, d,J= 1.9 Hz, H-2′),7.06 (1H, d,J= 1.9 Hz, H-6′), 6.55 (1H, s, H-3), 6.51(1H, d,J= 2.0 Hz, H-8), 6.37 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-6),3.86 (3H, s, 5′-OMe), 3.79 (3H, s, 5-OMe);13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6)δ159.9 (C-2), 106.4 (C-3),175.5 (C-4), 160.6 (C-5), 96.4 (C-6), 162.3 (C-7), 95.1(C-8), 159.0 (C-9), 107.2 (C-10), 120.8 (C-1′), 106.9(C-2′), 145.8 (C-3′), 137.7 (C-4′), 148.6 (C-5′), 101.8(C-6′), 55.8 (C-5-OMe) , 56.1 (C-5′-OMe)。經(jīng)與文獻(xiàn)[4]比對, 結(jié)合HSQC、HMBC歸屬相應(yīng)的碳、氫信號(hào), 確定化合物I為格欖酮。

圖1 化合物I～I(xiàn)X的結(jié)構(gòu)Fig. 1 Structures of compounds I～I(xiàn)X

化合物 II： 黃色針狀晶體(甲醇); mp： 246～247℃;IR (KBr)νmaxcm-1： 3424, 1655, 1608, 1506, 1446,1364, 1304, 1259, 1205, 1172, 1090, 1022, 998, 826;1H-NMR (500 MHz, CD3OD)δ7.84 (1H, d,J= 2.0 Hz,H-2′), 7.58 (1H, dd,J= 2.2, 8.5 Hz, H-6′), 6.88 (1H, d,J= 8.5 Hz, H-5′), 6.40 (1H, d,J= 2.1 Hz, H-8), 6.20(1H, d,J= 2.0 Hz, H-6), 5.16 (1H, d,J= 7.8 Hz, H-1′),3.47～3.85 (6H, m, H-2′～6′);13C-NMR (125 MHz,CD3OD)δ158.5 (C-2), 135.8 (C-3), 179.6 (C-4), 163.0(C-5), 100.0 (C-6), 166.2 (C-7), 94.8 (C-8), 158.9(C-9), 105.5 (C-10), 123.0 (C-1′), 116.1 (C-2′), 145.8(C-3′), 149.9 (C-4′), 117.8 (C-5′), 122.9 (C-6′), 105.6(C-1′), 73.2 (C-2′), 75.1 (C-3′), 70.1 (C-4′), 77.2(C-5′), 62.0 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道的槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷數(shù)據(jù)基本一致, 故確定化合物II為槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物 III： 黃色針狀晶體(氯仿); mp： 252～253℃;IR (KBr)νmaxcm-1： 3448, 1656, 1606, 1560, 1492,1363, 1305, 1264, 1208, 1187, 1136, 1089, 1072, 1018,895, 848;1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ8.09 (2H, d,J=8.7 Hz, H-2′, H-6′), 6.91 (2H, d,J= 8.7 Hz, H-3′, H-5′),6.47 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-8), 6.23 (1H, d,J= 2.0 Hz,H-6), 5.14 (1H, d,J= 7.5 Hz, H-1′), 3.43～3.82 (6H, m,H-2′～6′);13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ158.6 (C-2),135.7 (C-3), 179.7 (C-4), 163.1 (C-5), 94.8 (C-6),166.1 (C-7), 100.0 (C-8), 159.2 (C-9), 105.7 (C-10),122.8 (C-1′), 132.4 (C-2′, C-6′), 116.1 (C-3′, C-5′),161.6 (C-4′), 105.1 (C-1′), 73.1 (C-2′), 75.1 (C-3′),70.1 (C-4′), 77.2 (C-5′), 62.1 (C- 6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的黃芪苷的數(shù)據(jù)基本一致, 故確定化合物III為黃芪苷。

化合物 IV： 黃色粉末(氯仿/甲醇); mp： 196～197℃;IR (KBr)νmaxcm-1： 3416, 1655, 1603, 1505, 1456,1362, 1296, 1204, 1169, 1065, 1014, 880, 809;1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ7.68 (1H, d,J= 2.1 Hz, H-2′), 7.64 (1H, dd,J= 2.1, 8.4 Hz, H-6′), 6.89(1H, d,J= 8.4 Hz, H-5′), 6.41 (1H, d,J= 2.1 Hz, H-8),6.22 (1H, d,J= 2.1 Hz, H-6), 5.12 (1H, d,J= 7.5 Hz,H-Glu-1), 4.54 (1H, s, H-Rha-1), 3.29～3.92 (10H, m,sugar protons), 1.14 (3H, d,J= 6.2 Hz, H-Rha-6);13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6)δ158.5 (C-2), 135.6(C-3), 179.4 (C-4), 162.9 (C-5), 100.0 (C-6), 166.0(C-7), 94.9 (C-8), 159.3 (C-9), 105.7 (C-10), 123.6(C-1′ ), 116.1 (C-2′), 145.8 (C-3′), 149.8 (C-4′), 117.7(C-5′), 123.2 (C-6′), 104.7 (C-1′), 75.7 (C-2′), 78.2(C-3′), 74.0 (C-4′), 77.2 (C-5′), 68.6 (C-6′), 102.4(C-1′′), 72.3 (C-2′′), 71.4 (C-3′′), 72.1 (C-4′′), 69.7(C-5′′), 17.8 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道的蘆丁的數(shù)據(jù)基本一致, 故確定化合物IV為蘆丁。

化合物 V： 黃色針狀晶體(氯仿); mp： 258～259℃;IR (KBr) νmaxcm-1： 3442, 1655, 1607, 1564, 1505,1441, 1362, 1296, 1275, 1216, 1171, 1120, 1018, 976,832, 805;1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.69 (1H, d, J =2.2 Hz, H-2′), 7.58 (1H, dd, J = 2.1, 8.5 Hz, H-6′), 7.00(1H, d, J = 8.4 Hz, H-5′), 6.48 (1H, d, J = 2.1 Hz, H-8),6.25 (1H, d, J = 2.1 Hz, H-6), 3.86 (3H, s, H-3-OCH3);13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ 156.8 (C-2), 139.4(C-3), 179.6 (C-4), 163.3 (C-5), 99.4 (C-6), 164.9(C-7), 94.5 (C-8), 157.9 (C-9), 106.0 (C-10), 123.2(C-1′), 116.4 (C-2′), 145.9 (C-3′), 149.1 (C-4′), 116.3(C-5′), 122.2 (C-6′), 60.2 (C-3-OCH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道的 3-O-甲基槲皮素的數(shù)據(jù)基本一致,故確定化合物V為3-O-甲基槲皮素。

化合物 VI： 無色針狀晶體(氯仿); mp： 172～173℃;IR (KBr) νmaxcm-1： 3424, 2943, 2851, 1638, 1454,1380, 1043, 881;1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 4.68(1H, d, J = 1.9 Hz, H-29a), 4.56 (1H, br s, H-29b), 3.19(1H, dd, J = 4.9,11.4 Hz, H-3α), 2.37 (1H, dt, J = 5.2,16.3 Hz, H-19), 1.68 (3H, br s, H-30), 1.03, 0.96, 0.94,0.83, 0.79, 0.76 (各 3H, s, H-23～H-28);13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ 39.0 (C-1), 27.4 (C-2), 79.0 (C-3), 38.7(C-4), 55.3 (C-5), 18.3 (C-6), 34.3 (C-7), 40.8 (C-8),50.4 (C-9), 37.2 (C-10), 20.9 (C-11), 25.1 (C-12), 38.0(C-13), 42.8 (C-14), 27.4 (C-15), 35.6 (C-16), 43.0(C-17), 48.3 (C-18), 48.0 (C-19), 151.0 (C-20), 29.8(C-21), 40.0 (C-22), 28.0 (C-23), 15.4 (C-24), 16.1(C-25), 16.0 (C-26), 14.5 (C-27), 18.3 (C-28), 109.3(C-29), 19.3 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道的羽扇豆醇的數(shù)據(jù)基本一致, 故確定化合物VI為羽扇豆醇。

化合物 VII： 無色針狀晶體(氯仿); mp： 182～183℃;IR (KBr) νmaxcm-1： 2941, 2858, 1705, 1644, 1455,1381, 870;1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 4.66 (1H, d,J = 1.7 Hz, H-29a), 4.54 (1H, d, J = 1.7 Hz, H-29b),1.65 (3H, br s, H-30), 1.04, 1.03, 0.99, 0.90, 0.87, 0.78(各 3H, s, H-23～H-28);13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ 39.5 (C-1), 34.0 (C-2), 217.9 (C-3), 47.2 (C-4), 54.8(C-5), 19.6 (C-6), 33.5 (C-7), 40.7 (C-8), 49.7 (C-9),36.8 (C-10), 21.4 (C-11), 25.0 (C-12), 38.1 (C-13),42.8 (C-14), 27.3 (C-15), 35.4 (C-16), 42.9 (C-17),48.1 (C-18), 47.8 (C-19), 150.6 (C-20), 29.7 (C-21),39.9 (C-22), 26.6 (C-23), 20.9 (C-24), 15.9 (C-25),15.7 (C-26), 14.4 (C-27), 17.9 (C-28), 109.4 (C-29) ,19.2 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道的羽扇豆酮的數(shù)據(jù)基本一致, 故確定化合物VII為羽扇豆酮。

化合物 VIII： 無色針狀晶體(氯仿); mp： 182～183℃;IR (KBr) νmaxcm-1： 2938, 2863, 1709, 1474, 1450,1386, 1376, 996;1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 5.56(1H, dd, J = 2.7, 8.2 Hz, H-15), 2.57 (1H, m, H-2a),2.37 (1H, m, H-2b), 1.13 (3H, s, H-26), 1.08 (6H, s,H-25, H-23), 1.07 (3H, s, H-24), 0.99 (3H, s, H-29),0.93 (3H, s, H-27), 0.91 (3H, s, H-30), 0.90 (3H, s,H-28);13C-NMR (125MHz, CDCl3) δ 38.4 (C-1), 34.1(C-2), 217.4 (C-3), 47.6 (C-4), 55.8 (C-5), 20.0 (C-6),40.7 (C-7), 38.9 (C-8), 48.7 (C-9), 37.6 (C-10), 17.5(C-11), 33.6 (C-12), 35.7 (C-13), 157.7 (C-14), 117.2(C-15), 37.7 (C-16), 29.9 (C-17), 48.9 (C-18), 36.7(C-19), 28.8 (C-20), 33.1 (C-21), 35.2 (C-22), 21.5(C-23), 26.2 (C-24), 14.8 (C-25), 25.6 (C-26), 29.9(C-27), 17.5 (C-28), 33.4 (C-29), 21.4 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道的蒲公英賽酮的數(shù)據(jù)基本一致,故確定化合物VIII為蒲公英賽酮。

化合物 IX： 白色無定型粉末(氯仿/甲醇); mp：290～291℃; IR (KBr) νmaxcm-1： 3416, 2918, 2850, 1622,1541, 1467, 1074, 1023; 茴香醛顯色為紫色; 與胡蘿卜苷標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行薄層色譜對照, 在 3種不同的溶劑展開體系Rf值及顯色行為均一致, 且與標(biāo)準(zhǔn)品的混合熔點(diǎn)不下降。故鑒定化合物IX為胡蘿卜苷。

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Chemical constituents of marine mangrove plant Bruguiera gymnorrhiza

LI Fang1,2, LI Xiao-ming1, WANG Bin-gui1
(1. Key Laboratory of Experimental Marine Biology, Institute of Oceanology, Chinese Academy of Sciences,Qingdao 266071, China; 2. Graduate School of the Chinese Academy of Sciences, Beijing 100039, China)

Dec., 8, 2009

Bruguiera gymnorrhiza; Rhizophoraceae; flavone; triterpene

Various techniques were used to purify and determine the chemical constituents of the mangrove plant Bruguiera gymnorrhiza. As a result, nine compounds including gramrione (I), quercetin-3-O-β-D-glucoside (II),astragalin (III), rutin (IV), 3′,4′,5,7-tetrahydroxy methylflavone (V), lupeol (VI), lupenone (VII), 14-taraxeren-3-one (VIII), and β-daucosterol (IX) were isolated and identified. Compounds II～V were isolated from this genus for the first time.

Q58

A

1000-3096(2010)10-0024-04

2009-12-08;

2010-03-16

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(30770234, 30910103914); 山東省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2006GG2205023)

李 (1975-), 女, 博士生, 山東菏澤人, 主要從事天然產(chǎn)物研究, 電話： 0532-82898890, E-mail： iceli_2003@163.com; 王斌貴,通信作者, 電話： 0532-82898553, E-mail： wangbg@ms.qdio.ac.cn

(本文編輯： 張培新)