張 皓，楊金榮，高順昌，王潤(rùn)玲，程先超，周 慧

（天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，天津 300070）

布洛芬是臨床上常用的非甾體消炎鎮(zhèn)痛藥，具有較強(qiáng)的抗炎、抗風(fēng)濕及解熱鎮(zhèn)痛作用，但長(zhǎng)期口服布洛芬對(duì)胃腸道會(huì)產(chǎn)生副作用。布洛芬是非選擇性環(huán)氧化酶抑制劑,環(huán)氧化酶有兩種亞型：COX-1和COX-2。COX-1是一種結(jié)構(gòu)酶，存在于腸、胃、腎等大多數(shù)組織中，通過促進(jìn)PG及血栓烷A2的合成，保護(hù)胃腸道黏膜、調(diào)節(jié)腎臟血流和促進(jìn)血小板聚集等內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定[1]；而COX-2為誘導(dǎo)酶，在大多數(shù)正常組織中通常檢測(cè)不到，主要在炎癥部位由炎癥介質(zhì)誘導(dǎo)產(chǎn)生活性，通過對(duì)PG合成的促進(jìn)作用，介導(dǎo)疼痛、發(fā)熱和炎癥等反應(yīng)的發(fā)生[2]。布洛芬的治療作用源于對(duì)COX-2的抑制[3]，而不良反應(yīng)歸于對(duì)COX-1的抑制[4]。由于COX-2在炎癥部位誘導(dǎo)產(chǎn)生，所以，在局部炎癥部位給藥，實(shí)際起到了靶向作用。本課題組研制了布洛芬水溶性衍生物精氨酸布洛芬[5-6]，并以其為原料制備了外用噴霧劑，改變了口服給藥途徑，通過透皮吸收而達(dá)到療效，克服了口服給藥對(duì)胃腸道的副作用。目前，該課題組研制的精氨酸布洛芬原料已經(jīng)獲得國(guó)家頒發(fā)的新藥證書。其噴霧劑已完成處方篩選等工作，其體外透皮吸收試驗(yàn)結(jié)果表明，該處方的平均滲透速率（8 h）為 847.69 μg·h-1，是一個(gè)很有應(yīng)用前景的外用噴霧劑。本文對(duì)該制劑的含量測(cè)定方法進(jìn)行了研究探討。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 LC-10A高效液相色譜儀（LC-10Atvp高壓輸液泵、SPD-10Avp紫外檢測(cè)器、Anastar色譜工作站，日本島津），BP211D型電子分析天平（Sartorius），HH-恒溫水浴鍋(鞏義市英峪予華儀器廠)，pHS-3C精密pH計(jì)（天津市盛邦科學(xué)儀器技術(shù)公司）。

1.2 樣品與試劑 精氨酸布洛芬對(duì)照品（自制，三次重結(jié)晶，在含量測(cè)定色譜條件下顯單一色譜峰，含量99.8%）、精氨酸布洛芬原料（自制，含量99.6%）、精氨酸布洛芬噴霧劑（自制，標(biāo)示含量92.5mg/ml）、重蒸水（自制）、甲醇（色譜純，天津市康科德色譜試劑公司），磷酸、磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為Diamonsil-C18（150mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇－磷酸鹽緩沖液（75∶25），用磷酸調(diào)pH 至 3.0，流速為 1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm，進(jìn)樣量為20μl，柱溫為30℃。

2.2 溶液的配制 （1）對(duì)照品溶液的配制：精密稱取精氨酸布洛芬約0.37 g，置于100ml容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液；精密量取上述儲(chǔ)備液2.5ml至25ml容量瓶中，以流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。（2）供試品溶液的配制：精密量取精氨酸布洛芬噴霧劑1.0ml，置于25ml容量瓶中，加適量流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液1ml，置于10ml容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，即得供試品溶液。（3）空白樣品溶液的配制：按處方配制不含精氨酸布洛芬的空白樣品，精密量取空白樣品1.0ml，置于25ml容量瓶中，加適量流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻；精密量取上述溶液1ml，置于10m l容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，即得空白樣品溶液。

2.3 色譜條件的專屬性 分別精密量取空白樣品溶液、對(duì)照品溶液和供試品溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖1~3）。

2.4 方法學(xué)試驗(yàn)

2.4.1 線性關(guān)系考察 精密稱取精氨酸布洛芬對(duì)照品約0.185 g，置于50ml容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，作為儲(chǔ)備液。精密量取儲(chǔ)備液2、2.25、2.5、2.75、3.0ml，分別置于 25ml容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度（濃度分別0.296、0.333、0.370、0.407、0.444mg/ml）。分別精密量取 20 μl注入液相色譜儀，在220 nm波長(zhǎng)處測(cè)定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得線性回歸方程為y=24 820 154 x+184 692,r=0.999 9。

2.4.2 精密度試驗(yàn) 取標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下，濃度為0.370mg/ml的溶液，連續(xù)測(cè)定6次，計(jì)算所得峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.31%。

2.4.3 精氨酸布洛芬溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn) 取標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下，濃度為 0.370mg/ml的溶液，在 0、1、2、4、6、8、10、24 h測(cè)定峰面積，計(jì)算所得峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.29%。

2.4.4 回收率試驗(yàn) 精密稱取精氨酸布洛芬0.37 g，置于100ml容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液，精密吸取2.5m l至25ml容量瓶中，以流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。按照2.1的色譜條件進(jìn)行測(cè)定[7-8]。

按比例精密量取全輔料溶液（空白樣品），置50 ml容量瓶中，精密加入相當(dāng)于標(biāo)示量80%、100%和120%的精氨酸布洛芬，混合均勻，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1ml，置10ml容量瓶中，以流動(dòng)相稀釋定容，搖勻，過濾，按照2.1的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率[9-11]，結(jié)果見表1。

2.4.5 樣品含量測(cè)定 按上述方法測(cè)定3批樣品（批號(hào)分別為 070901、070902、070903）含量，結(jié)果顯示3批樣品中精氨酸布洛芬含量（n=3）分別為91.2、92.9、92.0mg/ml。

表1 回收率測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

關(guān)于色譜條件的選擇，考慮到保留時(shí)間的長(zhǎng)短會(huì)從不同角度影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，保留時(shí)間短時(shí)，分離度可能達(dá)不到完全分離的要求，保留時(shí)間長(zhǎng)時(shí)，浪費(fèi)時(shí)間和試驗(yàn)試劑，故對(duì)可能影響保留時(shí)間的各因素進(jìn)行了如下摸索。

3.1 流動(dòng)相的比例 甲醇:磷酸鹽緩沖液分別為75:25，73:27和77:23，其它條件不變。結(jié)果顯示調(diào)整流動(dòng)相比例時(shí)，對(duì)峰面積影響不大，甲醇比例升高，則保留時(shí)間縮短，甲醇比例降低，則保留時(shí)間延長(zhǎng)，分離度升高，但也能達(dá)到分離度＞2的要求。

3.2 柱溫 溫度分別為30℃，25℃和35℃，其它條件不變。調(diào)整柱溫時(shí)，對(duì)峰面積影響不大，升高溫度，則保留時(shí)間縮短，但分離度不如正常柱溫的好，但也能達(dá)到分離度＞2的要求；降低溫度，則保留時(shí)間延長(zhǎng)。

3.3 流速 流速分別為 1 ml/min，0.9 ml/min和1.1ml/min，其它條件不變。調(diào)整流速，對(duì)峰面積有一定的影響，流速增加，峰面積減小，保留時(shí)間縮短，降低流速，峰面積增大，保留時(shí)間延長(zhǎng)。

筆者采用HPLC法確定精氨酸布洛芬噴霧劑的含量測(cè)定方法，并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=24 820 154 x+184 692,r=0.999 9；在 0.290～0.400 mg/ml范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系，方法的精密度及回收率均符合中國(guó)藥典2005版第二部的要求。本含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確可靠、精密度良好，可作為精氨酸布洛芬噴霧劑的定量控制方法。

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