張永耀，侯惠嬋，楊潔瑜

（廣州市藥品檢驗(yàn)所，廣東 廣州 510160）

紫花地丁及其常見混偽品的比較鑒別

張永耀*，侯惠嬋，楊潔瑜

（廣州市藥品檢驗(yàn)所，廣東 廣州 510160）

目的：建立鑒別紫花地丁及其混偽品的方法。方法：性狀、熒光觀察、薄層色譜法、高效液相色譜法鑒別。結(jié)果：發(fā)現(xiàn)比較明顯的鑒別特征。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便、專屬性較強(qiáng)，可快速鑒定真?zhèn)巫匣ǖ囟　?/p>

紫花地丁；犁頭草；長(zhǎng)萼堇菜；龍膽地丁；比較鑒別

地丁類藥材的植物來(lái)源比較復(fù)雜，長(zhǎng)期以來(lái)存在同名異物的現(xiàn)象。目前全國(guó)各地使用的“地丁”主要有紫花地?。ㄝ啦丝疲?、甜地丁（豆科）、苦地?。ɡ浰诳疲?、龍膽地丁（龍膽科）、竹葉地?。ㄟh(yuǎn)志科）等［1］。

紫花地?。?xí)稱“海地丁”、“遼地丁”）為常用中藥材，收載于《中國(guó)藥典》2010年版，為堇菜科植物紫花地丁（光瓣堇菜）Viola yedoensisMakino的全草，見圖1。功能為清熱解毒，涼血消腫。用于疔瘡腫毒，癰疽發(fā)背，丹毒，毒蛇咬傷等。廣東常見的偽品為同科植物犁頭草（Viola japonicaLangsd.），見圖2，長(zhǎng)萼堇菜（Viola inconspicuaBl.），見圖3；混淆品為龍膽地?。?xí)稱“廣地丁”），即龍膽科植物華南龍膽Gentiana loureiriGriseb的全草，見圖4。本文采用性狀比較、樣品溶液的熒光觀察、薄層色譜法、高效液相色譜法等鑒別方法，可快速鑒別紫花地丁的真?zhèn)巍?/p>

圖1 紫花地丁

圖2 犁頭草

圖3 長(zhǎng)萼堇菜

圖4 龍膽地丁

1 材料、儀器及試劑

1.1 材料

紫花地丁對(duì)照藥材（批號(hào)121429-200501）、秦皮乙素對(duì)照品（批號(hào)741-9103）（中國(guó)藥品生物制品檢定所；犁頭草，長(zhǎng)萼堇菜為自采，各有3批次；龍膽地丁來(lái)自澳門市場(chǎng)（澳門衛(wèi)生局藥物事務(wù)廳提供），1批次。所有藥材均經(jīng)廣州市藥品檢驗(yàn)所中藥室副主任侯惠嬋鑒定。

1.2 儀器

島津LC-10ATVP高校液相色譜儀；色譜柱：Diamonsil C18（200mm×4.6mm，5μm）；薄層用硅膠G（青島海洋化工廠）；硅膠60預(yù)制板（Merck）。

1.3 試劑

所用試劑均為分析純（液相色譜用的甲醇為色譜純）。

2 方法和結(jié)果

2.1 性狀鑒別

紫花地丁與犁頭草、長(zhǎng)萼堇菜、龍膽地丁等混偽品性狀的主要區(qū)別見表1。

2.2 熒光觀察鑒別

取紫花地丁、犁頭草、長(zhǎng)萼堇菜、龍膽地丁粉末各1g，加水10mL，加熱至沸，濾過(guò)，取濾液，點(diǎn)于濾紙上，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視，結(jié)果紫花地丁顯亮藍(lán)色的熒光斑點(diǎn)，犁頭草、長(zhǎng)萼堇菜、龍膽地丁等紫花地丁的混偽品則不顯熒光斑點(diǎn)或顯很弱的熒光斑點(diǎn)。見圖5。

表1 紫花地丁與犁頭草、長(zhǎng)萼堇菜、龍膽地丁的性狀比較

圖5 紫外光燈（365nm）下下熒光圖

2.3 薄層色譜鑒別

取紫花地丁、犁頭草、長(zhǎng)萼堇菜、龍膽地丁粉末各1g，分別置帶塞錐形瓶中，加甲醇20mL，超聲處理15min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL溶解，濾過(guò)，濾液用醋酸乙酯提取，分取醋酸乙酯提取液，水浴上蒸至約1mL，作為供試品溶液。另取紫花地丁對(duì)照藥材1g，同法制備對(duì)照藥材溶液，再取秦皮乙素對(duì)照品，加乙醇制成每1mL含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯－醋酸乙酯－甲酸－水（10∶6∶3∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視，結(jié)果，紫花地丁供試品色譜中，在與秦皮乙素對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色（藍(lán)色）的熒光斑點(diǎn)，用氨水熏后，該熒光斑點(diǎn)加強(qiáng)并顯綠藍(lán)色；犁頭草、長(zhǎng)萼堇菜、龍膽地丁等紫花地丁的混偽品在與秦皮乙素對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，不顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。見圖6～9。

圖6 紫外光燈（254nm）下TLC圖

圖7 日光（氨熏后）下TLC圖

圖8 紫外光燈（365nm）下TLC圖

圖9 紫外光燈（365nm）下（氨熏后）TLC圖

2.4 高效液相色譜鑒別

取紫花地丁、犁頭草、長(zhǎng)萼堇菜、龍膽地丁粉末各0.5g，分別置帶塞錐形瓶中，加60%甲醇30mL，超聲處理15min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL溶解，濾過(guò)，濾液用醋酸乙酯提取3次，每次20mL，分取醋酸乙酯提取液，水浴上蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解并定容至10mL量瓶中，作為供試品溶液。再取秦皮乙素對(duì)照品，加60%甲醇制成每1mL含20μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照高效液相色譜法（《中國(guó)藥典》附錄ⅥD）試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇－0.5%磷酸（26∶74）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為345nm。分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜。結(jié)果，紫花地丁供試品色譜中，呈現(xiàn)與秦皮乙素對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間相同的色譜峰；犁頭草、長(zhǎng)萼堇菜、龍膽地丁等紫花地丁的混偽品在與秦皮乙素對(duì)照品色譜峰相同保留時(shí)間的位置上，略顯小峰。見圖10～14。

圖10 秦皮乙素HPLC圖

圖11 紫花地丁HPLC圖

圖12 犁頭草HPLC圖

圖13 長(zhǎng)萼堇菜HPLC圖

圖14 龍膽地丁HPLC圖

3 討論

3.1 性狀鑒別

紫花地丁與同屬的偽品犁頭草、長(zhǎng)萼堇菜等單從性狀較難區(qū)分，常出現(xiàn)誤用情況。

3.2 熒光鑒別

本文用水煮或熱水泡樣品，取上述水提液點(diǎn)于濾紙上觀察熒光，紫花地丁顯較強(qiáng)的藍(lán)色熒光；犁頭草、長(zhǎng)萼堇菜、龍膽地丁等紫花地丁的混偽品不顯或略顯熒光。此法快速簡(jiǎn)便，特別適合基層用藥單位驗(yàn)收紫花地丁藥材時(shí)使用。

3.3 薄層鑒別

紫花地丁含黃酮類、香豆素類等成分［2］。本文采用薄層色譜法、以秦皮乙素為對(duì)照，進(jìn)行薄層色譜鑒別，曾以《中國(guó)藥典》2005年版一部“紫花地丁”鑒別項(xiàng)下［3］的展開劑，即甲苯－醋酸乙酯－甲酸（5∶3∶1）上層液，發(fā)現(xiàn)該展開劑并不分層，且展開效果不理想，改用本文的展開劑，展開效果較好。氨水熏后，日光下檢視，在與秦皮乙素對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯一明顯的綠黃色斑點(diǎn)；該斑點(diǎn)置紫外光燈（365nm）下檢視，熒光加強(qiáng)并顯綠藍(lán)色。犁頭草、長(zhǎng)萼堇菜、龍膽地丁等紫花地丁的混偽品不顯或略顯斑點(diǎn)，可資鑒別。

3.4 HPLC鑒別

本文參照《中國(guó)藥典》2010年版“尿感寧顆?！敝星仄ひ宜氐暮繙y(cè)定方法［4］試驗(yàn)，得到的HPLC圖中，紫花地丁供試品色譜中呈現(xiàn)與秦皮乙素對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間相同的色譜峰，其含量約為0.03%；犁頭草、長(zhǎng)萼堇菜、龍膽地丁等紫花地丁的混偽品在與秦皮乙素對(duì)照品色譜峰相同保留時(shí)間的位置上，略顯小峰，其峰面積均少于對(duì)照品峰面積的2%，提示HPLC可作為鑒別真?zhèn)巫匣ǖ囟∮行У姆椒ㄖ?，并可測(cè)定秦皮乙素的含量。

［1］中國(guó)藥品生物制品檢定所，中國(guó)科學(xué)院植物研究所.中藥鑒別手冊(cè)（第一冊(cè)）［M］.北京：科學(xué)出版社，1997：196-206.

［2］樓之岑，秦波.常用中藥材品種整理和質(zhì)量研究（第二冊(cè)）［M］.北京：北京醫(yī)科大學(xué)中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1995：565-669.

［3］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（一部）.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：237.

［4］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（一部）.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：788-789.

Com parison and Identification of Violae Herba and Its Adulterants.

Zhang Yongyao，Hou Huichan，Yang Jieyu
（Guangzhou Municipal Institute For Drug Control，Guangzhou Guangdong510160，China）

Objective：To establish a method to distinguish violae herba and its adulterants.Methods：character identification，fluorescence observation，thin-layer chromatography，and high performance liquid Chromatography identification.ResultsThe obvious identification feature was found.ConclusionThis method is simple and specific，and can quickly identify the authenticity of violae herba.

Violae herba；Viola japonicalangsd.；Viola inconspicuaBl.；Gentiana；Comparison and identification

*張永耀，E-mail：zhangyongyao＠gzfda.gov.cn

2010-05-18）